【分享】《家禽解剖图谱》——采样与注意事项（2）

共享精神

一、分子生物学检查

分子检测是一种极其有用的工具，可用于：

检测细菌、病毒或寄生虫性病原体，例如滑液支原体（Mycoplasma synoviae），这类病原体通常分离成本较高。

对病原体进行基因分型。

许多情况下，分子检测不仅可以检测出病原体，还可以对其进行更深入的特征分析。

例如：区分不同毒株，或区分野毒株与疫苗株。

如前所述，对传染性法氏囊病病毒（Gumboro virus）进行分子分型可区分疫苗株与野毒株。

病原体的定量检测。

某些技术可以测定样本中基因组拷贝数的精确值。

虽然目前这些技术主要用于实验研究，但将来可能在某些疾病的诊断中发挥重要作用。

样本类型

分子检测的样本可通过拭子或组织切片获得。

用于分子检测的拭子必须为干拭子，不能含有任何运输培养基（见图5）；

某些病原体的检测中，使用 FTA卡（FTA-card） 采样也是有益的（例如：用于Gumboro病毒的检测）。

研究表明，该卡片可灭活病原体而保留其遗传物质，因此适用于分子技术。

但需注意的是：病原体一旦被灭活，日后无法再从FTA卡中分离出活体微生物。



采样组织或器官

是否取病原体复制部位的组织或病原体静止存在的组织，应视具体病原体的特性而定。

样本保存

如同病毒学检测，最佳保存方式为冷藏并通过快递送达实验室。

若使用 FTA卡采样，则可常温邮寄。

适合进行分子检测的典型病理情况

滑液支原体感染（Mycoplasma）

鸡传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis）

传染性法氏囊病（Gumboro disease）

禽呼肠病毒病（Avian pneumovirosis）

鸡传染性喉气管炎（Avian infectious laryngotracheitis）

禽流感（Avian influenza）

新城疫（Newcastle disease）

梭菌感染（Clostridium）

传染性鼻炎（Infectious coryza）

产蛋下降综合征（Egg drop syndrome）

二、血清学检查

血清学检查包括一系列用于检测特定病原体抗体存在及其水平的实验室方法。

目前最常使用的血清学方法包括：

1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）

2. 血凝抑制试验（HAI）

3. 也常用：快速平板凝集试验（RPA）、病毒中和试验（VN）

血清学检测的适用情形

血清学技术是一种特别有用的工具，主要适用于：

慢性病例：当症状出现已超过两周，此时直接检测病原体的可能性较低；

缺乏直接病原体检测方法的疾病；

监测疫苗接种后的免疫应答。

样本类型

在所有情况下，样本为血液。

如第1章所述，禽类常用的采血部位为肱静脉（翅静脉），对日龄较小的禽只则推荐颈静脉采血。

样本保存

推荐使用聚丙烯塑料试管（优于玻璃或其他塑料材质），以利于血清从其他血液成分中分离（见图6）。



试管不得含抗凝剂，以便血液凝固。

注意事项包括：

不要将试管装满，除非使用了含有凝胶或分离粒子的专用血清分离管；

采血后将试管水平放置，以增加凝血接触面积；

如需通过快递发送样本，可常温运输。若在寄送前需暂时保存，建议保持4°C冷藏；

严禁冷冻；

应尽早将血清从血块中分离，以避免溶血。如样本需2天后才能寄出，建议提前分装血清入新试管保存。

样本数量

血清学检测成本相对较低，可同时分析大量样本。

为获得有代表性的结果，样本数量应具有代表性，即群体越大，应采集的样本数越多。

肉鸡群体：建议最少采集20份样本；

种鸡或蛋鸡群体：建议最少采集30份样本；

绝不应少于10份样本。

采样时间

需注意，抗体在感染病原体后才会出现，通常系统性抗体在感染后约一周开始出现。

因此，若要检测血清转换，应在临床症状出现后约两周采样，或在疫苗接种后约两周采样；

若要明确是否发生血清转换，应分别在临床症状初现时采样，并在2–3周后再次采样。

结果解读

特别是在ELISA检测中，市面上存在多种商品化试剂盒，其灵敏度和特异性可能存在差异。

不建议直接比较不同试剂盒所获得的检测结果。

适合进行血清学检测的典型病理情况

传染性法氏囊病（Gumboro disease）

鸡传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis）

鸡传染性喉气管炎（Avian infectious laryngotracheitis）

支原体感染（Mycoplasma）

鸡传染性贫血（Avian infectious anaemia）

禽呼肠病毒病（Avian pneumovirosis）

新城疫（Newcastle disease）

三、寄生虫学检查

寄生虫学检查是极具价值的工具，主要用于：对寄生虫进行分类鉴定；

进行球虫卵囊的常规计数，以监测球虫病的流行情况。

样本类型

进行卵囊计数时，推荐使用粪便混合样；

若需采集体内或体外寄生虫进行分类或种类鉴定，则应直接采集寄生虫本体作为样本。

样本保存

粪便样本可常温保存，因为球虫卵囊具有很强的抵抗力；

若需运送用于分类鉴定的寄生虫，应置于96%乙醇中保存。

四、毒理学检查

毒理学检查是非常有价值的手段，主要用于：检测外源性毒素的水平；

检测生物性毒素的存在，如肉毒毒素或真菌毒素（霉菌毒素）。

毒理学检测的局限性

毒理学检查的主要难点在于：兽医必须提前判断要检测哪种毒素。

某些毒素可导致特异性的大体或组织病变（如：肾脏中的红螺菌素（oosporein）病变）；

但大多数毒素所致病变非常非特异性，甚至完全无可见病变，这会大大增加诊断难度；

此外，不是所有毒素都有对应的检测方法，且已存在的检测方法通常仅限于特定实验室开展，并非常规项目。

因此，毒理学检查通常不用于日常临床诊断。

样本类型

检测外源性毒素或霉菌毒素时，应采集怀疑毒素存在的材料作为样本，例如：饮水、饲料、垫料等；

检测肉毒毒素时，应采集受感染禽只的血清。

样本保存

样本保存方式依其性质而定：

饲料或垫料等样本可常温保存；

组织、器官及血清等生物样本应冷冻保存。

来源：poultry times，译者：阿兵 | 配图：书籍原图