【分享】《家禽解剖图谱》——采样与注意事项（1）

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一、需要注意的操作要点

正如第1章所述，剖检的第二个目的就是采样，采样可用于实验室确诊的补充，也可用于常规疫苗监测、流行率评估等目的。

为了使实验室检测结果有效，必须进行适当的采样，而这需要在以下几个方面提前考虑：

1. 所选取的组织或器官

应选择能够提供代表性信息的组织或器官。

在某些情况下，应选取有明显病变的组织，而在其他情况下，则应根据现有文献选择可能出现特征性病变的组织。

2. 样本的类型

在确定所采组织或器官后，需要考虑采集样本的类型，可以是该器官的一部分、涂片玻片或 FTA采血卡。

3. 保存方法：

在获得样本后，需确定送达实验室前的保存方法，如浸泡于福尔马林中、冷藏、冷冻或常温保存。

这三个方面将取决于以下因素：

1. 所需进行的实验室检测类型

所需分析的类型将在很大程度上决定样本的种类与保存方式。

同时，需确诊或排除的病理情况也会影响所选择的实验室检测方式。

2. 疑似病理情况：

必须掌握所需确诊或排除病理的一些基本信息。

例如：哪些器官最易受累、这些器官是否有特异性病变（病理特征性损伤），或在感染性疾病中，病原体可被检测的时间窗口等。

所有这些信息将决定最适合的实验室检测方法，并进而确定最合适的样本类型。

值得强调的是，如有任何问题或疑虑，实验室通常可提供帮助，并就每种病理情况推荐最合适的检测方法或可用的检测项目。

实验室样本提交注意事项

需要注意的是，接收样本的实验室掌握的病例信息远不如临床兽医，因此建议采取以下做法：

1. 随样本提交“检测申请表”：表格中应列明所有参考编号或提交的样本，并附上病例背景信息（包括禽类种类、日龄、免疫程序、地理区域、观察到的临床症状及剖检发现的病变等）。  同时提供联系人信息（电话和电子邮箱）。

2. 准确标记样本容器：在样本容器上标明养殖场或场址的标识，或病例资料中指定的参考编号。

3. 在外包装上标明发件人信息及接收实验室地址。

4. 通过快递发送样本：务必注意节假日和周末对邮政时效的影响，确保样本在运输过程中不超过24小时。

无论何种情况，强烈建议提前通知接收样本的实验室，特别是当样本属于易腐或紧急情况时。

二、组织病理学

组织病理学检查是一种极为有用的工具，主要用于：

1. 确认疾病或病理的原因，特别是那些引起特征性显微镜下病变的。

例如，在气管上皮中发现核内包涵体和合胞体细胞，是传染性喉气管炎的典型特征。

2. 将感染性因子的存在与相关病变联系起来，病原体的存在并不总能证明其是致病原因。

例如，分子检测发现传染性法氏囊病病毒（IBDV）的存在时，并不总是与法氏囊病的临床病理改变有关，可能只是检测到了疫苗毒株。

3. 指导那些临床表现不典型的病理过程的诊断。

样本类型

组织病理学检查所需的样本为器官或组织的部分切片。

组织块应为近似正方形，每边长度约为0.5至1厘米。

脑组织不从颅骨中取出，而是整体固定进行处理。

取样组织或器官

应从有病变的器官或根据文献资料可出现特征性病变的器官中采样。

样本保存

组织应浸泡于稀释后的10%中性缓冲福尔马林溶液中（与商业浓缩型相比）。

使用带密封盖的塑料容器进行保存（见图1）。



需要注意，商用福尔马林的最大浓度为40%，按1:10比例稀释后浓度为4%。

组织与福尔马林的体积比例应为1:10，以确保良好的固定效果（见图2）。



适合进行组织病理学检查的典型病理

马立克氏病 / 鸡白血病

腺病毒感染、鸡结核病

传染性喉气管炎 / 鸡痘

鸡脑脊髓炎 / 脑软化症

曲霉菌病（Aspergillosis）

营养性缺乏疾病

寄生虫病（球虫病）

腱鞘炎病毒感染

中毒性或营养性肌病

三、微生物学 / 细菌学检查

细菌学检查是一种非常有价值的工具，主要用于：

1. 从临床表现中分离出致病的细菌或真菌；

2. 进行药敏试验（抗生素敏感性试验），以帮助确定可能更有效的抗生素治疗方案。

样本类型

微生物学检查的样本可通过使用带运输培养基的无菌拭子（见图3）进行采集，或切取器官组织的一部分，在尽可能无菌的条件下放入无菌容器中（见图4）。





采样的组织或器官

通常优先选择具有提示细菌感染的肉眼可见病变的组织或器官；

在怀疑败血症的情况下，即使没有明显病变，也建议每只禽类采集至少2到3个不同组织，以确认多组织中是否存在细菌。

对于肠道细菌或肠道菌群计数，应采集拟检测部位的肠内容物。

一种较为无菌的取样方法是：对目标肠段两端进行结扎，然后在靠近结扎点前后各切一刀，取出完整肠段。

无论何种情况，应由兽医指导实验室关于怀疑的微生物种类，以便实验室使用最适合的培养方式进行分离。

例如：若怀疑沙门氏菌（Salmonella）感染，必须在申请中明确提出，因为其分离需要特定的培养基。

样本保存

由于某些细菌对冷冻较为敏感，因此最佳保存方式为冷藏。

在使用拭子取样时，建议使用通用型运输培养基，以保持细菌的活性，便于后续分离与鉴定。

适合进行细菌学检查的病理情况

所有细菌性或真菌性病因且病原体容易分离的病例均可进行该类检查。

四、病毒学检查

病毒学检查的目的是分离病毒。

与大多数细菌或真菌相比，病毒的分离不仅耗时，而且成本较高，通常需要多代传代才能成功分离。

因此，目前只有少数实验室将病毒分离作为常规检测手段。

由于上述限制，近年来已发展出多种分子诊断技术，可更快速地检测病毒存在。

然而，在需要进行血清型或保护型分析时，病毒分离仍是必需的。

样本类型

与细菌学检查类似，病毒分离的样本可以通过拭子采集，也可以取组织样本。

采样组织或器官

应从病毒复制部位的组织中采样，通常这些组织也是病变出现的部位。

在肠道病毒感染的情况下，可从粪便或肠内容物中分离病毒。

样本保存

冷冻保存是保持病毒活性的最佳方式。

然而，在某些情况下，标准的-20°C冷冻温度仍不足以维持病毒活性。

因此，建议将样本冷藏并通过快递尽快送达实验室。

适合进行病毒学检查的典型病理情况

鸡传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis）

鸡传染性喉气管炎（Avian infectious laryngotracheitis）

鸡痘（Avian pox）

腺病毒感染（Adenovirus infection）

禽流感（Avian influenza）

新城疫（Newcastle disease）

来源：poultry times，译者：阿兵 | 配图：书籍原图