【分享】被冤枉多年的滑液囊支原体

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滑膜支原体（M. synoviae ）是家禽继发性细菌感染最常见的先决条件之一。它引起上呼吸道的亚临床感染，可发展为全身感染，导致产蛋量减少和蛋壳质量变差。
鸭源鸡杆菌（Gallibacterium anatis）作为一种机会性病原体与输卵管炎、腹膜炎等密切相关,通常会引起以抑郁、腹泻、呼吸综合征和产蛋量减少为特征的临床感染，并引起死亡率上升,给养鸡业带来严重的经济损失。

本研究的目的是确定鸭源鸡杆菌（G. anatis）和滑膜支原体（M. synoviae ）流行的可能相关性，以及它们数量的相互相关性。该研究对来自八个不同农场的十六个蛋鸡群进行。使用 qPCR 测定分析气管拭子样本。结果显示，在分析样本中，农场两种病原体的流行具有统计学显着相关性，G. anatis的平均水平明显高于M. synoviae. 没有检测到每种病原体数量的相关性。

介绍
G. anatis和M. synoviae引起的感染会给家禽生产带来巨大的经济损失。M. synoviae是继发感染最常见的先决条件之一，而G. anatis很容易从呼吸系统的上部传播到下部或通过输卵管向上传播到体腔，并引起严重的感染。

G. anatis是一种机会性病原体，可引起以抑郁、腹泻、呼吸综合征和产蛋量减少为特征的临床感染。然而，感染通常是亚临床的并且容易被忽视。有许多诱发因素，例如免疫力受损、荷尔蒙状况、压力、动物卫生条件差和合并感染，可导致全身感染和高死亡率。自然感染动物的发病率和死亡率各不相同，而在实验感染的免疫抑制蛋鸡中，死亡率可增加至 73%。由于检测G. anatis的常规诊断方法的不足，病原体往往难以分离，因此容易误诊。因此，开发了一种高度特异性、灵敏性和可重复性的 qPCR 方法，该方法也用于本研究以鉴定和量化病原体。

滑膜支原体引起上呼吸道亚临床感染，可导致继发性呼吸道和全身感染。它还会导致鸡蛋质量和产量下降，以及跛行和严重的关节炎。滑膜支原体菌株对不同的组织具有趋向性，但在几项研究中已经记录了促关节和促输卵管菌株与其他呼吸道病原体之间的协同作用。与呼吸道和关节病形式相反，在过去 20 年中，越来越多地检测到与卵子畸形相关的输卵管嗜性菌株。该疾病的呼吸道形式可以以罗音为特征，但最常见的是无症状。鸡群的发病率在 2% 到 75% 之间变化，而死亡率通常低于 1%，因此导致高谴责、体重下降和饲料效率下降。商业 ELISA 测定通常用于常规鸡群监测，而鉴定是使用不同的 PCR 的方法完成的。

这两种细菌最常位于上呼吸道系统，经常引起亚临床感染，因此本研究的目的是确定它们的流行程度，以及它们在所研究的蛋鸡群中数量的相互关系。

材料和方法采样和 DNA 分离
在这项研究中，调查了来自八个蛋鸡农场的十六只鸡群。鸡群的年龄从 8 周龄到 66 周龄不等（表 1）。每群采集五个气管拭子样本并储存在-20°C，直到 DNA 分离。根据制造商的说明，使用 GenElute 哺乳动物基因组 DNA 小量提取试剂盒（Sigma-Aldrich, Co., St Louis, MO, USA）从每个样本中单独分离 DNA。分离的 DNA 储存在 -20 °C 直至进一步分析。

qPCR 分析
使用 GoTaq Probe qPCR Master Mix (Promega, Madison, WI, USA) 对细菌进行定量。使用的引物和探针对G. anatis（gyrB：F-5'-CGATTGTGTCCGTTAAAGTGC、R-5'-TGCAAACGCTCACACCAACTG、P-5'-FAM-CTGGTTTCTTCCGAAGTGAAAAGTGTAGTGGA-BHQ1）和M. synoviae（16S-23S rDNA ISR：F ）具有特异性-5'-CTAAATACAATAGCCCAAGGCAA、R-5'-CCTCCTTTCTTACGGAGTACA、P-5'-FAM-AGCGATACACAACCGCTTTTAGAAT-BHQ1)。如 Wang等人所述执行量化方案。(2016)，以及拉维夫和克莱文 (2008)。反应混合物的总体积为 15 ?L。每个样品一式两份进行分析，而G. anatis和M. synoviae为了绝对定量的目的，已知浓度的样品一式三份平行进行。使用 Mx3005P 仪器（美国 Stratagene）进行分析。

统计分析
统计分析在 Statistica 13.5.0.17 中完成。(TIBCO Software Inc.) 软件。正态分布采用 Kolmogorov-Smirnov 检验，平均基因组拷贝数采用 Mann-Whitney U 检验。使用相关矩阵分析病原体拷贝数之间的相关性和每个农场中两种病原体流行率之间的相关性。统计显着性设定为 p<0.05。

结果
在大多数研究的鸡群中都检测到了这两种病原体，但第 11 群（农场 E）和第 15 群（农场 H）没有检测到滑膜支原体，而第 8 群（农场 C）没有检测到任何病原体。检测到，可能是因为鸡群的年龄较小（表 1）。结果显示，在大多数情况下，G. anatis 每个样本的平均拷贝数更高（表 1 ），并且所有农场的G. anatis平均拷贝数显着更高（数据未显示）。病原体与每个拭子的细菌数量之间没有相关性（图 1A）。然而，结果显示统计显着相关性 (p = 0.032)G. anatis和M. synoviae（图 1B）。



讨论

本研究的目的是确定G. anatis和M. synoviae 的流行之间可能存在的相关性，以及它们在蛋鸡气管拭子中数量的相互关系。这两种细菌都定殖在呼吸系统中，这会导致临床感染并造成大量生产损失。几项研究表明，滑膜支原体的合并感染会导致严重的临床症状，尽管迄今为止尚未检测到滑膜支原体和 G. anatis 之间的相关性。

这项研究的结果显示G. anatis和M. synoviae的流行具有统计学显着相关性 (p=0.032) （图 1B），这证实了所研究的病原体之间可能存在联系。在大多数情况下（表 1），几乎所有鸡群中都检测到G. anatis，并且每个样本的滴度都高于M. synoviae （表 1），这有利于G. anatis是上呼吸系统中的一种共生微生物，可以在其中大量发现而不会引起临床感染。样品中病原体的数量之间没有相关性。据我们所知，在任何被研究的农场进行采样时，都没有感染的临床表现。



图1- (A) G. anatis 与MS每个农场的每个棉签的基因组拷贝数。(B)各农场GA和MS患病率的相关性。

免疫预防是预防家禽疾病最重要的技术措施之一。滑膜支原体减毒活疫苗在预防临床感染和消灭农场野生毒株方面表现出高效。另一方面，G. anatis菌株的特点是遗传变异性高，这使得通用商业疫苗的生产复杂化，尽管正在研究不同的免疫原作为可能的候选疫苗。这项研究的结果表明G. anatis和M. synoviae的流行率很高，并证实需要对家禽养殖场进行定期监测。由于M. synoviae最常引起亚临床感染，病原体通常在农场内的鸡群中纵向传播，从而导致经济损失。在家禽养殖场实施适当的细菌病原体早期检测和控制方法可以更好地预防疾病，从而使鸡群更健康并提高生产率。

来源：鸡保姆，中南山 编译整理，致谢本文原作者：礼查·洛齐卡, 西尔维娅·布扎里科， 热尔伊科·戈茨坦和海因泽洛娃

可兽医

应该是不冤，老外不了解中国的情况

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常老师1

这种菌如果不能垂直传染，危害就不会超过霉形体感染。

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