这是我老师写的。望大家学习学习

马谈 · 发表于 2008-10-9 11:22:27

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      细菌药敏试验
一、目的要求：1．学会药敏试验的操作方法
      2．掌握药敏试验结果的判定方法
二、原理：筛选病原菌的敏感性药物，提高治疗效果。
  随着养鸡业的不断发展，鸡的细菌性传染病种类也有所增多，用抗生素防治鸡细菌性传染病就显得特别重要。但由于滥用抗生素，耐药性菌株也越来越多。有的鸡场在治疗鸡的某种细菌病时，轮流应用多种抗生素都无效，这样一是耽误了鸡病的治疗，二是浪费了大量药物，造成了极大的经济损失。为了尽快有效地治疗鸡的细菌性传染病，对从病、死鸡体分离出的细菌作药敏试验，选用对细菌具有高抑制能力的药物是非常重要的。
  药敏试验方法有两类：
1．预测治疗效果有试验：测量药物最小抑菌浓度（MIC）的琼脂稀释法和肉汤稀释法；测量含药纸片周围抑菌圈直径大小的K-B纸片琼脂扩散法；E试验；最低杀菌浓度(MBC)的测定：联合药物敏感试验。
2．监控治疗效果的试验：血清抗菌药物浓度测定；血清杀菌滴度的测定。最常用的是纸片法，因为此法操作简单，结果迅速。
三、纸片法的操作步骤：
1．待试菌涂布用铂金饵(接种环)无菌操作挑取待试细菌纯培养物(量要稍多一些)，以划线方式将细菌致密而均匀地涂布于普通琼脂平板或血琼脂平板培养基表面(磺胺药的药敏试验要用无胨琼脂平板)。待试菌如果是肉汤培养液，可先用灭菌1ml吸管或灭菌注射器吸取0．1～0．2ml加入上述培养基表面，然后用灭菌L型玻璃棒或接种环涂布均匀。
2．贴纸片无菌操作打开平皿，用无菌尖头镊子夹取各种抗菌素药敏试纸片，按一定密度分别贴到上述已涂布细菌的培养基表面。纸片在培养基分布方式，一般是中央贴一种纸片，四周等距离贴若干种纸片，根据平板大小贴的纸片数量而多少不一(不要太密，以防相邻的抑菌圈太大而联合)。如果是自制纸片，将纸片的药名做好标记，以防混淆。
3．培养将贴好药敏试纸片的平板翻转，将底部向上，置于37℃温箱内培养24h，取出观察结果。
4．结果观察与判定标准经过培养，在具有抗菌能力的药敏试纸片周围便出现一个无菌生长的透明圈，称为抑菌圈。抑菌圈的大小，说明了该抗菌素效果的高低。若无抑菌圈，则说明该菌对此种药物有耐药性。所以，判定结果时，应按测量的抑菌圈直径大小(以毫米为单位)作为敏感度高低的判定标准。
  抑菌圈直径>20毫米为极度敏感；
  抑菌圈直径在1 5--20毫米为高敏；
  抑菌圈直径在10--1 5毫米为中敏；
  抑菌圈直径<10毫米为低敏； ?
  无抑菌圈为不敏感(耐药)。
  经药敏试验后，应首选高敏药物进行治疗，也可选用两种药物协同应用，以减少抗药菌株的产生。但在实际生产中还要考虑药物的价格，有时高敏药物不一定能得到应用。
四、实验材料 ?
1.营养琼脂(有商品出售)
2.培养皿：直径90毫米
3．菌种：大肠杆菌斜面培养物
4．接种环
5．中试管
6．棉签及细菌的液体培养物
7．药敏试纸(商品或自制) ??
8．尖头小镊子
9．试管架
10．酒精灯
11．恒温培养箱
五、注意事项细菌涂布要均匀，否则会影响结果观察(可以将细菌的固体培养物用无菌生理盐水或肉汤稀释后，用棉签涂布或用注射器吸取
2．菌液浓度应该有一定的要求，但实际工作中往往不必按规定浓度，只要是在同等条件下比较即可。
3．贴药敏纸片时，贴好一种后必须将尖头镊子用火焰消毒，冷却后才能再夹取另一种，否则有可能污染药敏纸片。