重大动物疫病采样监测技术（家禽）

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第一章　畜禽血液和病料采集技术
第一节 畜禽血液采集技术
一、要求：
1、所有采血用具均应事先以消毒、干燥处理；
2、采血部位要进行剪毛、清拭并按常规进行消毒（先碘酊后酒精）。
3、怀疑传染病时，采血过程要防止到处流散，检后的残余血液及所用器皿要进行消毒处理。
4、需抗凝的要加入抗凝剂。常用的抗凝剂有：
①双草酸盐抗凝剂：
　草酸钾　　　0.6克；草酸铵　　　1.2克；蒸馏水　加至100毫升；溶解后，吸取0.5毫升，加入供采血用的试管或小瓶中，置干燥箱内（温度不能超过80℃），烘干备用（实际含草酸盐10毫克，可供5毫升全血抗凝用）
②枸橼酸钠 6mg可使1ml血液不凝固，或配成3.8%的溶液。适用于血钙的测定和血沉测定时的抗凝。
③乙二胺四乙酸二钠（EDTA二钠）每10毫克可使5毫升全血抗凝；或配成10%的溶液，每2滴可使5毫升全血抗凝。
④肝素对血中有机成分和无机成分测定均无影响，多用于科研。常用肝素钠配成1ml内含1mg (0.1%)的水溶液，取0.1ml分装于小试管或小青霉素瓶中，在80℃以下烤干后备用，可使5～10ml血液不凝固。
5、需分离血清的血液（不抗凝），试管要静置、斜放，便于血清晰出。
6、注意安全。

二、家禽血样的采集
(一)鸡翅内侧静脉采血
1、器械准备：酒精棉球；小试管或细塑料管，试管架；镊子；配5～7＃针尖的一次性注射器。
2、保定：手提保定。助手一手抓住两只鸡腿，一手抓鸡翅根部，以拇指按压静脉管。
3、部位确定：鸡翅内侧腋静脉，肉眼可见。
4、操作：助手抓住鸡翅根部，以拇指按压静脉管，使之充盈。术者左手大拇指捏住鸡翅内侧，余四指捏住鸡翅外侧，展平鸡翅，右手持针，沿血管方向，于血管傍先刺入皮下，然后再斜刺向血管，抽取血液（此法避免拔针后出血过多）。也可直接刺向血管，抽取血液（采用此法，拔针后要用干棉球按压数分钟止血）。或者将鸡翅摆平，直接先将静脉用针刺破，待血液流出后，用细塑料管利用虹吸的原理吸取血液，事毕，用火将细塑料管一头封闭。
(二)鸡心脏采血
方法1
操作要点：鸡左侧向上横卧保定，拔去胸上部部分羽毛，寻找由胸骨走向肩胛的皮下大静脉，心脏约在该静脉的分支下侧，有时用食指可摸到心脏跳动。用酒精消毒后，以碘酊标记部位。针头（7＃）刺入时，如触及胸骨可稍拔出，使针头稍向右偏，避开胸骨，再将针头向里刺入，边刺边抽动活塞，若刺入心脏，便有血液涌入注射器，术毕，局部消毒。
方法2
操作要点：鸡仰卧保定，鸡头部朝向术者，拔去胸上部少许羽毛，用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窝，右手持针（7＃），自胸骨上方凹窝斜向前下方心脏方向（鸡的左侧、术者的右侧）刺入，边刺边抽动活塞，若刺入心脏，便有血液涌入注射器，术毕，局部消毒。
注意：此法（含方法1、2）采血后，多会引起鸡只死亡，仅适用于淘汰鸡的采血。
(三)鸡头部静脉窦采血
1、器械准备：酒精或碘酊棉球；小试管，试管架；镊子；配5－7＃短针尖的一次性注射器。
2、保定：助手一手抓鸡的两只腿，一手抓鸡的两翅，使头部向上。术者左手食指和中指夹住鸡喙，大拇指压住颈上部，以此固定头部。
3、部位确定：鸡头后部，枕骨大孔为刺入点。
4、操作：鸡只如上述方法确切保定后，枕骨大孔部少许拔毛，消毒，术者右手持针，自枕骨大孔进针，针头对准喙尖，约与颈椎纵轴成45°角，刺入约0.5～0.8cm（视鸡只大小），刺入静脉窦后，针头感觉无阻力，抽取血液，术毕消毒。
注意：此法采血后，亦会引起鸡只死亡，故适用于淘汰鸡的采血。苗鸡采血亦可用此法。

第二节畜禽病料采集技术
一、样品采集的原则
采集检测样品是诊断检测工作的重要内容。采样的时机是否适宜，样品是否具有代表性，样品处理、保存、运送是否合适及时，与检验结果的准确性、可靠性关系极大。采集样品时，需要符合以下规定：
1、适时采样。根据检测要求及检测对象和检验项目的不同，选择适当的采样时机十分重要。样品是有时间要求的，应严格按规定时间采样，有临床症状需要作病原分离的，样品必须在病初的发热期或症状典型时采样，病死的动物，应立即采样。
2、合理采样。根据诊断检测的要求，须严格按照规定采集各种足够数量的样品外，不同疫病的需检样品各异，应按可能的疫病侧重采样。对未能确定为何种疫病的，应全面采样。
3、典型采样。选取未经药物治疗、症状最典型或病变最明显的样品，如有并发症，还应兼顾采样。
4、无菌采样。采集检验样品除供病理组织学检验外还供病原学及血清学检验，供病原学及血清学检验的样品，必须无菌操作采样，采样用具、容器均须无菌处理，尸体剖检需采集样品的，先采样后检查，以免人为污染样品。
5、适量采样。采集样品的数量要满足诊断检测的需要，并留有余地，以备必要时复检使用。
6、样品处理。采集的样品应一种样品一个容器，立即密封，根据样品的性状检验要求的不同，作暂时的冷藏、冷冻或其它处理。供病毒学检验的样品，数小时内要送到实验室，只作冷藏处理，超过数小时的要冷冻处理，（冻结方法：可将样品放入-30℃冰箱内冻结，然后再装入有大小冰块或干冰的冷藏瓶（箱）内运送，亦可将装入样品的容器放入隔热保温瓶内，再放入冰块，然后按100ｇ冰块加入食盐约35克，立即将隔热保温瓶瓶口塞紧。瓶内温度可达-21℃左右）。供细菌学检验或血清学检验的样品，冷藏送实验室即可。装样品的容器应贴上标签，标签要防止因冻结而脱落，标签标明采集的时间、地点、号码和样品名称，并附上发病、死亡等相关资料，尽快送实验室。
7、安全采样。既要保护采样人员，以要防止病原外泄，还要防止样品受到污染。
8、样品包装。主要是密闭，防止样品损坏、污染和外泄等意外发生。
迅速送检。应尽快送实验室进行检测，延误送检时间，会影响到检测质量和结果的可靠性。
二、血液样品的采集
1、病毒检验用血液样品。应在动物发病初体温升高期采集。血液样品必须是脱纤血或是抗凝血。抗凝剂可选用肝素或EDTA，枸缘酸钠对病毒有轻微毒性，一般不宜采用。采血前，在真空采血管或其它容器内按每毫升血液加入0.1%肝素1ml或EDTA20mg。采集的血液立即与抗凝剂充分混合，防止凝固。采脱纤血时，先在容器内加入适量小玻璃珠，加入血液后，反复振荡，以便脱去血液纤维。采集的血液经密封后贴上标签，以冷藏状态立即送实验室。必要时，可在血液中按每毫升加入青霉素和链霉素各500～1000IU，以抑制血源性可采血中污染的细菌。
2、细菌检验样品。采血应在动物发病初体温升高或发病期，未经药物治疗期间采集。血液应脱纤或加肝素抗凝剂(或EDTA或枸缘酸钠)，但不可加入抗生素。采集的血液经密封后贴上标签，以冷藏状态立即送实验室，否则须置4℃冰箱内暂时保存，但时间不宜过久，以免溶血。
3、血清学检验样品。用作血清学检验的样品不加抗凝剂或脱纤处理。为保障血清质量，一般情况下，空腹采血较好。采集的血液贴上标签，室温静置待凝固后送实验室，并尽快将自然析出的血清或经离心分离出的血清吸出，按需要分装，再贴上标签冷藏保存备检。较长时间才检验的，应冻结保存，但不能反复冻融，否则抗体效价下降。作血清学检验的血液，在采血、运送、分离血清过程中，应避免溶血，以免影响检验结果。采集双份血清检测比较抗体效价变化的，第一份血清采于发病的初期并作冻结保存，第二份血清采于第一份血清后3～4周，双份血清同时送实验室。 4、寄生虫检验样品。因不同的血液寄生虫在血液中出现的时机及部位各不相同，因此需要根据各种血液寄生虫病的特点，取相应时机及部位的血液制成血涂片，送实验室。
三、组织样品的采集
组织样品一般由扑杀动物或病死尸体剖中采集。从尸体采样时，先剥去动物胸腹部皮肤，以无菌器械将腹腔打开，根据检验目的和生前疫病的初步诊断，无菌采集不同的组织。
1、病毒检验样品。作病毒检验的组织，必须以无菌技术采集，组织应分别放入灭菌的容器内并立即密封，贴上标签，放入冷藏容器立即送实验室。如果时间较长，可作冻结状态运送，也可将组织块浸泡在PH7.4左右的乳汉液或磷酸缓冲肉汤保护液内，并按每毫升保护液加入青霉素、链霉素各1000IU，然后放入冷藏容器内送实验室。
2、细菌检验样品。供细菌检验的组织样品，应新鲜并以无菌技术采集。如遇尸体已经腐败，某些疫病的致病菌仍可采集于长骨或肋骨，从骨髓中分离细菌。采集的所有组织分别放入灭菌的容器内并立即密封，贴上标签，放入冷藏容器立即送实验室。
四、粪便样品的采集
1、病毒检验样品。分离病毒的粪便必须新鲜。少量采集时，以灭菌的棉拭子从直肠深处或泄殖腔粘膜上蘸取粪便，并立即投入灭菌的试管内密封，或在试管内加入少量PH7.4的保护液再密封。贴上标签冷藏送实验室。
2、细菌检验样品。作细菌检验的粪便，最好在动物使用抗菌药物之前，从直肠或泄殖腔粘膜上采集，采样方法与供病毒检验的相同。可投入无菌缓冲盐水或肉汤的指形管内，贴上标签冷藏送实验室。
3、寄生虫检验样品。粪便样品应选取新排出的或直接从直肠内采得，以保持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态，一般寄生虫检验的粪便用量较多。采得的粪便以冷藏不冻结状态送实验室。

第三节　几种畜禽疫病的样品采集
一、禽流感的样品采集、保存和运输
病毒主要在呼吸道粘膜细胞内增殖。
(一)病禽
1、至少从5只濒死禽采集样品。样品包括：泄殖腔拭子和气管拭子(置于缓冲液中)各5个(小珍禽可采集新鲜粪便)；气管和肺的混样5个，肠管及内容物的混样5个；肝、脾、肾和脑等组织样品(不能混样)各5个。
采集方法：1)泄殖腔棉拭子：将棉拭子插入肛门并旋转，使粪便沾在拭子上，后放在运输缓冲液中。2)气管棉拭子：活鸡采样时，将棉拭子插入活鸡的气管内，轻轻擦拭气管壁并放入缓冲液中。死亡动物采气管样品时，可在肺和气管离体情况下进行采集，应将棉拭子插入较深部位用力擦拭，并按上述方法将棉拭子放在运输缓冲液中。3)粪便样品：可从活禽市场采取新鲜粪便，用棉拭子沾取粪便，并将采好的样品放在运输缓冲液中。
2、分别采集至少10个病鸡的血样(急性发病期血清)。采集10只病禽的血样，使用一次性采血器，心脏或翅静脉采血，每只禽采血样2ml～3ml，经离心或自然析出血清后，将血清移到指形管中。封好口，贴好标签。不同禽只的血样不能混合。
(二)病死禽
无发病禽时，可从死亡不久的病禽采样，采样要求同病禽。
棉拭子单独放入容器，容器中盛放含有抗菌素的PH值为7.0～7.4的PBS液。抗生素的选择视当地情况而定，组织和气管拭子悬液中加入青霉素(20001U／mL)、链霉素(2 mg／mL)、庆大霉素(50цg／mL)、制霉菌素(100001U／mL)。但粪便和泄殖腔拭子所用的抗生素浓度应提高5倍。加入抗生素后pH值应调至7.4。
（三）样品的保存和运输
1、血样要单独存放，不能混合。
2、样品应密封于塑料袋或瓶中，置于有制冷剂的容器中运输，容器必须密封，防止渗漏。
3、样品若能在24小时内送到实验室，冷藏运输。否则，应冷冻运输。若样品暂时不用，则应冷冻(最好-70℃或以下)保存。
二、新城疫
新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分泌物和排泄物，以脑、脾和肺含毒量最高，骨髓含毒时间最长。
样品：眼分泌物、泄殖腔拭子、脾脏、气管粘膜、脑等。

雪中送鸡

学习一下

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学习   

手术刀

谢谢楼主，还是希望大家都看看的好，以备急用时能不慌乱，会操作。
    另，楼主是学校教师还是禽场技术骨干呢？这样专业？