实验室检测与禽疫病流行动态分析

baichunmei

实验室检测与禽疫病流行动态分析
赵继勋  张国中
（中国农业大学，实验动物研究所）

实验室检测结果可为疫病流行的动态分析提供有用的依据。
一、疫病流行动态分析对实验室检测的基本要求
（一）样本要求
1．样本的地域范围：
（1）病病流行的世界性趋势要求以国家为基本范围
（2）重点：①养殖集中地区  ②流通活跃地区
2．样本连续性和时间跨度
①年度为基础   ②流行疫病的特殊性（跨年度的跟踪、疫病流行区域的跟踪）
3．样本的数量：至少20个以上来源和400份的检测
4．样本的代表性：
（1）涵盖各种生理状态：年龄段、生产特点（易发病时期）
（2）送检样本的代表性：（每一批次）
     应涵盖病鸡与假定健康鸡
     随机性
     双份血清的采取（间隔两周）
5．样本的背景材料
（1）送检单的内容：
品种、日龄、临床症状、发病的死亡率、产蛋率、剖检记录、免疫及用药状况、发病后的处理及变化、已知检测的结果。
（2）背景材料的详尽了解
①当地疾病流行情况
②最近出现的明显的饲养管理改变
③天气状况
④检查生产记录，做出相关图表进行动态分析
（二）标准化的检测
1．检测的依据：OIE和国标、部标
2．目前我室的血清学检测方法

检测方法    检测对象
Elisa    白血病（ALV和ALV-J）、CAA、REV、
IBD、IBV、Reo、TRT、AEV、AIV
AGP    Pox、MDV、IC、IBD、腺病毒、ILT、AIV
HI    NDV、AIV（5，7，9型），EDS、Yucaipa
平板凝集    MG、MS、S P.
注：试剂盒，主要是Idexx公司和Intevel公司出品
HI和AGP抗原、抗血清，主要是自制，部分则购自哈兽研和中监所
3．每次检测必做标准参考血清对照及结果经过质量管理体系的严格检查。
（三）血清学检测基础上的研究工作
1．常规的病毒、细菌、分离鉴定
2．新的或必需的疾病的动物实验及临床、流行状态的追踪。
二、主要流行疫病及其检测结果特点的分析
1．NDV
（1）正常状态下的检测结果
①商品肉鸡
通常为≤26，有时可达29。
母源抗体较种鸡低2个滴度
②其他鸡：
通常在2个月龄时可达26~8甚至更高。
多次免疫的最高值也不会超过212。
③抗体的维持：现有免疫条件下，通常2个月不会有大变动，其抗体波动不会超2个滴度（应考虑每次检测的准确性）
（2）保护力的确定及感染的抗体指标
①28认为较安全
②>212则认为是感染
③感染早期的抗体离散度变大（≥6个滴度）或出现≤23的滴度有诊断意义。
④双份血清检测出现抗体滴度有2个以上的升高有诊断意义。
（3）目前NDV流行的抗体检测新趋势
①可能出现抗体水平不降而只有上升的趋势。
②用特殊分离株制备的抗原可检测到更高的抗体
（4）新的流行NDV的特点
①鸡发病时期：a. 10~20日龄
b. 育成鸡群合群时
c. 产蛋开始至高峰期
②发病特点：幼雏死亡、神经症状、产蛋鸡的产蛋下降
（多种形式，顽固地盘据性）
③剖检不能排除NDV
④用特制疫苗效果好
2．IBDV
（1）母源抗体普遍较高，2000~4000甚至更高
（2）免疫日期通常较早800~1500时首免者多。
对于突破母源抗体发挥疫苗效果不利
（3）两次免疫后通常保护滴度可达到4000以上
（4）大部分种鸡抗体可高至6000~15000，有的个体更高
（5）抗体诊断几乎用不着，因为临床发病时症状较典型
（6）主要应用于首免日确定，中等毒力或以下疫苗应在抗体500时，中强毒力苗应在800以下。
（7）如用AGP检查，50%样本阳性时已可视为有保护作用。
（8）发病法氏囊的免疫电镜观察病毒容易。
3．IBV
（1）Elisa诊断无法区别亚型，有人认为疫苗反应不应超过滴度6000，大部分样本滴度值集中于2000~6000区域，而感染时大部分样本可达8000~15000，此种情况尚未能确定。最近检测平均滴度10000以上的鸡群不少，但并无疾病表现。
（2）中和试验对于发病判定效果较好，因为现有疫苗多用M型，故对肾型和肌肉型（491型）可通过中和试验证明。
（3）HI试验少用，也不能分型并缺少感染确诊指标。
（4）分毒较容易，96-2000年曾多次分到野毒近2年来已很少分离出野毒株。
（5）IBV的确诊需通过分离病毒及动物回归结果证实。常规检测很难判定。
4．EDS
（1）近年已少见，临床HI检查，通常抗体滴度不高，常常只有24-6，偶尔可达28。
（2）发病已少，不呈流行状。
5．Reo
（1）Elisa检测最近2年和以前的结果截然不同，以前滴度值很少过2000，现在通常可测得平均值过10000。
（2）过去免疫后常可检测出血清阴性有时可达30%，目前已很少有阴性结果出现。
（3）Reo的检测确诊是困难的，从病理材料（肌腱渗出液）分离鉴定是主要方式，可通过卵黄囊接种，用AGP方法测研磨的CAM进行判定。
（4）注意大量的葡萄球菌感染问题，以及偶尔发现的营养问题。
6．MG
（1）抗体变化的情况为
1—30日龄        阳性>95%
30—60日龄       阳性>30%
60—90日龄       阳性>10%
90日龄以上       阳性>95%
说明感染普遍存在。
（2）Elisa检测的阳性少于平板凝集，平板凝集准确程度稍差
（3）不同来源平板凝集抗原差别较大
（4）单纯感染少见，存在也不会形成大的生产问题（非免疫鸡群除外）。因此检测价值不大，主要用于出口检测，种鸡净化，非免疫鸡群，SPF鸡群检测。
（5）抗体的变阳突然而且阳性率在短时间内上升，证实其水平传播快，几乎全群同步污染。
7．MS
（1）和MG相比，阳性率大大减小，但也很难避免阳性样本出现，其水平传播能力相对较低。
（2）用足底趾垫的肿胀渗出液进行分离，但也很难获得满意结果。
8．AEV
（1）免疫效果通常较好。
（2）按时免疫，通过AGP测量50以上阳性认为免疫有效。
（3）Elisa测量可得较好检测结果。
注意阳性反应太高是假阳性（如OD值≥1.3）。
（4）判定雏鸡发病需通过种蛋进行鸡胚敏感试验，或病雏脑经卵黄囊接种。
（5）最近两年发病较少，前几年相对较多。
9．TRT
（1）检查阳性率较高，一般鸡群都可查出
（2）其阳性检出率和临床的严重程度并无明显联系，可见其混合感染问题较大。
（3）抗菌素的治疗对TRT发生及诊断有混淆视听之嫌。
10．禽流感
（1）H5亚型
①一次免疫HI抗体可达24-6，二次免疫可达24-8多次免疫最高可达211。
②抗体水平均匀度常较差。
③感染时用HI抗体诊断常无效。因为急速死亡造成抗体上升的困难。
④抗体水平达26有充分保护力。小鸡母源抗体有相对较长时间的保护力。
⑤H5的HI抗体检测水平近年比2000年前好。
（2）H7亚型
①常可检出26以下的HI抗体，多由于疫苗注射或多价疫苗免疫而致。
②抗体检出无实际意义，尚未有证据证明中国有致病H7亚型毒株流行
（3）H9亚型
①一般免后可达26-11，≥212可被认为有感染可能。
②一般免疫效果较好。
③正常的免疫抗体水平出现均匀度变大，有些个体抗体≤23，或双份血清检查平均滴度上升超过2个滴度，可视为有感染指证。
（4）诊断试剂的问题仍有存在。特别是H7的抗体太高及出现H9抗体效价低于H5抗体效价现象几乎都是由试剂有问题造成的。
每批试剂都应用标准血清验证。
（5）母源抗体通常比种鸡抗体低2-3个滴度
（6）免疫后应于21天产生可靠保护力
（7）抗体水平维持不变可在2个月以上
（8）AGP和Elisa检查不能分型，只能用于进出口和非免疫鸡，SPF鸡检测。AGP检出率明显低于HI方法。
11．其他
（1）ITL和Pox由于临床症状明显，很少检测。
（2）IC和S P.由于很难区分免疫与感染，临床检测较少。
IC的分型（HI方法）检测可能有用，尤其是近年传出B型感染及致病问题。S.P的平板特异性较差。
三、检测结果的应用
1．群体观念的建立：对个别的误差不用计较。如出现一个弱阳性，甚至强阳性者有可能误差或诊断试剂灵敏度，特异性问题
2．连续性检测结果的重要性
3．大量检测反映的共性问题对疫病流行动态分析最为重要
4．必需结合临床症状和疫病流行情况分析检测的合理性
5．对各种试剂的灵敏和特异性要有正确认识
6．检测基础上的深入研究是流行疫病诊断和动态分析的基本保证。
四、当前疫病流行的状况
1．主要疫病流行是NDV
2．肿瘤问题在部分肉鸡中是主要问题，尤其是REV的污染值得重视

光明未来

非常好，感谢！

zsqang

H9作3次疫苗后，HI 抗体很多>4096，不能说是感染