抗菌素的联合药敏试验

少林寺

两种抗菌素同时使用时，可出现协同、颉颃、无关和耐药四种情况。为了有效地控制耐药菌株的产生，发挥抗菌素的协同作用，使用低浓度的抗菌素就可控制细菌，因此，在使用抗菌素前，必须进行抗菌素的联合药敏试验。
各种抗菌素的应用组合如下表：
                  表6   各种抗菌素的应用组合

组别                      抗菌素                         抑菌种类

1组          链霉素、四环素、磺胺类                 主要为革兰氏阴性杆菌 2组          多粘菌素 3组          红霉素、卡那霉素、庆大霉素

1组          青霉素、氯霉素、四环素                 主要革兰氏阳性或阴性球 2组          红霉素、新生霉素、万古霉素             菌或革兰氏阳性杆菌 3组          新霉素、卡那霉素、万古霉素、庆大霉素

   在做联合试验时，应先做其中某一组，若不敏感时，再做另外两组；若三组均不敏感时，则做第三组和第一组或第二组抗菌素联合试验，为了省时间，也可以同时做第一、二、三组抗菌素的联合敏感试验。

   抗菌素的联合敏感试验有两种方法：纸条法和试管法。

一、纸条法

（一）、试验材料

1．普通琼脂或血液琼脂古板。

2．被试细菌。

3．药敏试纸条。

药敏纸条的制备：将新华1号滤纸剪成20mm*6mm的纸条，用铅笔写上抗菌素的名称或代号，每100条为1组，放在平皿内，高压灭菌、烘干。按“简易抗菌素药纸片的制备方法”的要求，先将抗菌素配成适宜的浓度（青霉素2000微克/毫升，链霉素、四环素、土霉素为20000微克/毫升，磺胺类药为20000微克/毫升），每100条纸片加抗菌素溶液4ml，浸透后，放在37度温箱中烘干，置冰箱中保存备用。

（二）、试验方法

1．用接种环（或灭菌棉拭子）取被试细菌的培养物，均匀地涂布于灭菌的普通琼脂或血液琼脂平板上。

2．用灭菌镊子把含药纸条按“田”字形垂直放在接种细菌的平皿上，各种抗菌素纸条的间距应为1—2mm，可将平皿放在预先划好的图案上，按画好的放纸条位置，准确地将纸条放在平板表面。

3．将琼脂平板置37度温箱中，培养24h，观察结果。

（三）、结果测定

1. 凡在两个垂直的纸条上出现垂直的抑菌时，即为两种药物具有无关作用。

2．凡在两个垂直的纸条上出现抑菌，但在两纸条之间有细菌生长者，即为两种药物具有颉颃作用。

3. 凡两个垂直的纸条出现抑菌，而生长的细菌呈大小不同的弧形者，即为两种药物具有协同作用或相加作用。在临床上应采用这两种抗菌素为宜。

                     二、试管法

（一）、试验材料

1．培养基：PH7.4蛋白胨水（要求过滤灭菌，透明、无沉淀物），如细菌对营养要求较高，可加0.5％无菌血清。血清琼脂平板。

2．抗菌素原液与原液的稀释液：用灭菌生理盐水，按表7的要求，配制成各种抗菌素的原液和原液和稀释液。抗菌素原液，置冰箱中可保存一个月。

3．三磺胶原液：取磺胺嘧啶，磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶各1g，地起研碎，加10％氢氧化钠0.2ml和生理盐水24.8ml，配成4％的溶液，高压灭菌，以生理盐水将上清液稀释25倍，即成160mg％的原液。

4．菌液：一般均用幼龄肉汤培养物（37度，18h）。

（二）、试验方法

1．作两种抗菌素联合敏感试验，每种抗菌素两个稀释度，有四种不同的组合。

2．将选用的两种抗菌素原液及原液的稀释液按表8组合，分别加入4支10ml的培养基试管内。

3．同时另取4支培养基试管，按表7的要求分别作成两种抗菌素的高浓度和低浓度管，进行单独敏感性试验。

4．每管内加菌液0.05ml，于37度温箱中，培养18h。

（三）、结果判定

凡有细菌生长（培养物混浊）者为不敏感，培养物清晰透明者为抑制了细菌的生长。

从所有透明（不生长菌）的培养物管内，取一接种环培养液，涂布于血液琼脂平板上，培养18h，记录菌落数。

1．有效的单独抗菌素  低浓度能抑菌，菌落数<50个。

2．有效的联合抗菌素  培养物应透明，菌落数<10个。

3．协同作用  单独抗菌素高浓度能抑菌，而联合抗菌素低浓度则可抑制细菌的生长。

4．颉颃作用  单独抗菌素反较联合抗菌素抑菌能力强。

5．无关作用  单独抗菌素与联合抗菌素的结果没有很大的差别。

                 表7  抗菌素原液和原液的稀释液

抗菌素

原液         原液的稀释淮        高浓度管          低浓度管 （微克/毫升）    （微克/毫升）      （微克/毫升）     （微克/毫升）

链霉素 氯霉素 四环素 多粘菌素 红霉素 新霉素 夹桃霉素 新生霉素 青霉素 杆菌肽 三磺胺

800               200               20                 5 400               80                10                 2 400               80                10                 2 400               40                10                 2 80                8                 2                  0.2 80                8                 2                  0.2 80                8                 2                  0.2 80                8                 2                  0.2 40u               4u                1u                 1u 40u               8u                1u                 0.2u 160mg％          16mg％            4mg％             0.4mg％

               表8  两种抗菌素联合敏感试验

培养基 移入培养基 内的量（ml）	1           2           3           4
甲抗菌素原液 甲抗菌素稀释液 乙抗菌素原液 乙抗菌素稀释液	0.25        0.25                         0.25         0.25 0.25                    0.25             0.25

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