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药敏实验
一、实验材料及器具：
1）普通琼脂培养基、肉汤培养基、氯化钠（生理盐水浓度为0.8%）
2）药敏片
3）灭菌试管、棉签等
4）病料或细菌
5）恒温培养箱、高压锅、培养皿若干，镊子2个、接种环、生理盐水、蒸馏水、酒精灯、脱脂棉、玻璃棒
二、培养基的制备：
固体培养基配置
1）取肉汤培养基和琼脂培养基（按瓶上说明量），放入烧杯或三角瓶中，加蒸馏水100ml，用玻璃棒充分搅拌使完全溶解，在高压锅内1.5个大气压20分钟后取出。
2) 将营养培养基或其他培养基倒入消毒后的平皿上，平铺2～3mm厚，冷却后倒置放入4度冰箱待用。
液体培养基配置
取肉汤培养基，放入烧杯或三角瓶中，加蒸馏水100ml，用玻璃棒充分搅拌使完全溶解，在高压锅内1.5个大气压20分钟后取出。
三、实验方法：
3.1 划线培养做药敏实验
A、先培养细菌，用消毒后的接种环将病料用接种环直接划线在固体培养基上37度培养24小时。
B、将培养出的菌落用下列方法
1）用经火焰灭菌的接种环挑取待试细菌的纯培养物，以化线接种方法将挑取的细菌涂到制好的琼脂上，注意一定要划均匀。
2）用灭菌的镊子，将制好的药敏片分别均匀的贴在平皿上，为使药敏片与培养基表面贴，可用镊子轻按下纸片，一个直径90mm的平皿上可以贴6～7个药敏片。
3）将贴好药敏片的平皿倒放入恒温培养箱中，培养24小时后，取出观察结果。（一天出结果）
3.2 病料直接涂板药敏实验
直接用无菌方法取病料，用生理盐水稀释，根据病料细菌的多少，将病料稀释成浓度在10～30倍左右的稀释液，用消毒后的纱布过滤后，用滴管取滤液0.2---0.5 ml直接滴在制好的培养基上，用三角玻璃棒平铺，掌握在既刚好铺过来，但又不能使细菌液过多，直接将药敏片铺在平皿上，用镊子轻按，使充分接触，自然放置5分钟，将平皿倒放入恒温培养箱中，培养24小时观察结果。
3.3 液体纯培养药敏实验
A、先培养细菌，用消毒后的接种环将病料用接种环直接划线在固体培养基上37度培养24小时。
B、用高压灭菌过的牙签挑去致病菌单菌落直接放入装有液体培养基的试管中37度培养24小时。
C、用三角玻璃棒平铺，掌握在既刚好铺过来，但又不能使细菌液过多，直接用镊子将药敏片铺在平皿上，用镊子轻按，使充分接触，自然放置5分钟，将平皿倒放入恒温培养箱中，培养24小时观察结果。
3.4、观察结果与判定：
1）经培养后，对涂布的细菌有抑制能力的抗菌药物，在其周围出现一个无菌生长的圆圈，称为抑菌圈，抑菌圈越大说明该菌对此药物越
敏感。
一般判定标准为：抑菌圈直径＞20mm为极度敏感；15.1～20mm为高度敏感；10～15mm为中度敏感；10mm以下为不敏感或耐药。
（禽流感与新城疫）血凝实验测抗体
一、实验材料及器具：移液器（10ul 和100ul各一把）；一次性反应板；生理盐水；鸡红细胞（新鲜配置：先直接3000转/分，离心弃去上清和中间白细胞层，留下红细胞用生理盐水稀释后反复离心3次弃去上清，留下红细胞）
二、3支抗原稀释倍数:H5按照400倍稀释；H9按照150倍稀释；ND按照180倍稀释（根据样品数量，用多少稀释多少）。
三、实验步骤
1.在反应板中的第一孔每孔加入25ul生理盐水至第12孔。
2.第一孔加入待检血清25ul，用移液器混匀后，吸取25ul向后倍比稀释（每次反复混匀后抽取25ul）至12孔，最后一孔弃去最后25ul。
3.每孔加入稀释后抗原25ul至12孔。
4.每孔加入1%红血球25ul，微型震荡器震荡2min混匀。
5.半小时后观察V型一次性反应板凝集情况，根据最后凝集孔判定结果。（第一孔1:2； 第2孔：1:2[sup]2[/sup]； -------第12孔：1:2[sup]12[/sup]）。
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发表于 2010-10-23 11:13:49
