药敏试验实际操作流程

禽缘已定 · 发表于 2010-9-20 08:39:00

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一、药敏试验操作步骤

（一）材料：琼脂，病料，蒸馏水，药敏片

（二）器材：酒精灯，高压灭菌锅，培养皿，火炉，无菌操作台，镊子，剪刀，锥形瓶，干燥箱，培养箱，天平，玻璃棒，干净毛巾（报纸），炭笔

（三）步骤：

1、 将培养皿清洗干净用报纸包好放在高压灭菌锅内灭菌15分钟，取出后放入干燥箱内干燥，放在恒温箱（37℃）中备用。

2、高压锅的使用：在高压锅内胆以外注入水（内胆可以拿出来），把高压锅的排气阀管插入内胆相应位置，并对称把螺丝拧紧，打开排气阀，关闭安全阀，接通电源，待高压锅内有蒸气从排气阀溢出时，关闭排气阀，这时压力表指针上升，等达到0.14MPa，开始计时，15-20分钟后放气，待指针回到0时，取出消毒好的器皿放入干燥箱内备用。

3、 将无菌操作台的紫外线灯提前30分钟打开（杀毒灭菌作用），将干燥好的培养皿取出放入操作台上（注意配套上大下小）。

4、 将锥形瓶洗净，称取琼脂4.5g放入已洗净的锥形瓶中，加入蒸馏水100ml，放在火炉上直至琼脂溶解（注意避免沸腾），取出用报纸封口，用线绳扎紧，放在高压锅内灭菌10分钟，灭菌后取出锥形瓶放凉（标准：将手背贴在瓶上不烫手为准50-60℃但避免过冷而凝固）。

5、 将操作台上的紫外线灯关闭，将琼脂缓缓倒入培养皿中（0.5cm厚），轻轻摇动使其均匀（避免出气泡、厚度不均匀）。琼脂凝固后，涂病料。

6、 点燃酒精灯，用灭菌的剪刀（在酒精灯火焰上烧一下），切开病料，用灭菌镊子夹取深部无污染病料均匀涂抹在培养皿上（在离酒精灯20cm范围内操作），将药敏片放在培养皿上（一般每个培养皿放5-6个药敏片），轻轻按压，在培养皿底部标清药敏片的名称，放在培养箱中37℃培养24h。观察结果。

（四）结果：

药敏圈直径在25毫米以上时称为细菌对该药敏圈极敏。

药敏圈直径在20-25毫米时称为细菌对该药敏圈高敏。

药敏圈直径在15-20毫米时称为细菌对该药敏圈中敏。

药敏圈直径在10-15毫米时称为细菌对该药敏片低敏。

药敏圈直径在10毫米以下时称为细菌对该药敏片不敏感

附：药敏片的制备：用浓度是说明的4倍浸泡24h，自然在滤纸上干燥。例：100g药兑水200kg，做药敏片1g药用1斤水，放入浸泡24h。