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发表于 2010-6-14 08:10:04
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来自： 中国河北邯郸
本帖最后由 薛老师 于 2016-8-22 23:40 编辑 <br /><br />找到一篇陈红梅文章，可仅供参考。全文如下：
鸡蛋抗体检测法在禽流感免疫监测中的应用
1实验室检测
1．1材料准备
采取禽流感接种免疫14天以上的同群鸡的血清和鸡蛋(把鸡蛋用含消毒刑的潮湿软布撩洗干净，晾干备用)。
禽流感H5亚型HI抗原，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生产；96孔微量凝集板(尽量不用1次性的，有时结果相对会置影响)和生理盐水、微量移液器、滴头、纯化水、1％鸡红细胞悬液及微量振荡器、快建匀样器、离心机等器械。
1．2试验方法
血凝(HA)，在96孔微量反应板的第1排的1—12孔，每孔均加入0．025毫升生理盐水，吸取0．025毫升H5抗原加入第1孔．混匀；吸取0．025毫升加入第2孔，如此对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0．025毫升弃之，换清头，每孔再加入0．025毫升生理盐水，然后均加入0．025毫升1％鸡红细胞悬液(将鸡虹细胞悬液充分摇匀后加入)振荡均匀，在室温(20-25度)静置40分钟观察．对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔底。判定结果以完全凝集(不流淌)的抗原最高稀释倍数为1个血凝单位(HAU)。
血凝抑制(H1)，在微量反应板的第1孔加入16％的生理盐水，第2-11孔均加入0．025毫升生理盐水，第12孔加入 0.05毫升生理盐水(作为红血球对照)；将待捡鸡蛋做号码编排．并做好登记，按顺序打开鸡蛋，将蛋黄倾倒于平皿或其他易于操作的容器中，每个蛋黄吸取0．025毫升．加入第1孔中：自左边第1排向排列逐个吸取加入(应注意每吸取1只需换滴头)，在快速匀样器上充分混匀后吸取0．025毫升加入第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0．025毫升弃之，逐个进行；然后放微量振荡器上振荡混匀1分钟；在第1孔至第11孔均加入4HAU混匀的H5抗原0．025毫升(第1l孔为抗原对照)混匀，在室温(或恒温培养箱内)20度静置30分钟；然后每孔加入0．025毫升1％鸡红细胞悬液，微量振荡器混匀1分钟：在室温(或恒温培养箱内)20度静置20-40分钟查看结果，对照孔红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。
结果判定，以完全抑制4个HAU的抗原稀释倍数作为血凝抑制试验HI滴度。对于免疫禽只HI价小于4Log2判定为免疫效力低下，进行疫苗接种免疫；田价大于或等于4Log2为免疫效力良好，能起到保护作用。
1．3回归试验
为防止4单位抗原配制不准确，特作回归试验检测。
在微量反应板的1-4孔均加入0.025毫升生理盐水、取4HAU混匀的A1抗原液0．025毫升加入第1孔，依次倍比稀 释至第4孔，从第4孔吸取0．025毫升弃之。每孔均加入0．025毫升1％鸡红细胞悬液，20-25度下静置20分钟后观察结果．有1孔凝集，则抗原配制正确。
2应用效果分析
免疫较好的鸡群抗体滴度均匀，H1效价均在4Log2以上。HI滴度的高低在一定程度上也反映了免疫保护水平的高低，样品HI滴度较高时．其保护水平也相对要高。
对检测Hl效价低的应及时进行免疫接种，确保鸡群保持较高的抗体水平．抵御病毒的侵入。
在采，S样品时一定要考虑到免疫天数的影响。一般来说，质量可靠的油苗免疫接种14天后产生抗体，最好在免疫21天后进行抗体检测。
按每采集1次血清影响1星期产蛋计算，7360只鸡将少产51 520枚鸡蛋，按每8枚0．5千克折算为3 220千克，每千克按市场价6元计算．采集鸡蛋与采集血样相比，将给场、户带来直接经济效益1．94余万元。每抽20份血样按影响同群1 000只鸡计算，将有368000只鸡受到影响，按同群影响产蛋率5%计算，将少产128 800枚鸡蛋，0．5千克(8枚)折算为8050千克，按6元／千克计，将直接产生经济效益4．8万余元。
全县蛋鸡存养量达400万只，不定期采集一轮血样将造成效万元的直接经济损失．而改用按点采取鸡蛋的方法，即避免了抓鸡取血时带来的应急反应(这样不需要外人进入鸡场，只要饲养人虽按分布的点拾取即可)和抽取血样时鸡营养亏掼而带来的产蛋率下降。每年还将节省采取蛋鸡血样时的器械、用具、人力、物力款项敷万元，同时也为养殖场、户节省了大量的重复免疫的人力、物力和财力。
运用“鸡蛋免疫抗体检测法”，能把四抽检血样而造成的应激反应、产蛋率下降、营养损失等一系列影响降到最低。采用鸡蛋替代抽血的方法即简便易行，又不影响监测结果．值得大面积应用。
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