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一、喜爱迪20对6种细菌、1种酵母和1种霉菌的效力试验（欧洲悬浮试验）
1．试验原理
　　将微生物以十倍梯度稀释制成悬浮液，与1%的喜爱迪20溶液接触；同时加入0.03%的牛血清白蛋白溶液，模拟可能存在的少量有机物干扰的状态。室温下经过一定接触时间后，微生物的存活数用标准的平板菌落计数方法计数。
再用1%牛血清白蛋白溶液重复上述试验，模拟有大量有机物干扰时的情况。
2．分析步骤
　　所有操作按照欧洲官方指定程序进行，称为“欧洲悬浮实验”（EST ，European Suspension Test）
3．试验用菌株
　　1.金黄色葡萄球菌ATCC 6538；2.粪链球菌DVG 8582；3.绿脓杆菌ATCC 15442；4.奇异变形杆菌ATCC 14153；5.大肠杆菌ATCC 10536；6.耻垢分枝杆菌CNCM 7326；7.啤酒酵母菌ATCC 9763;；8.白色念球菌ATCC 10231
4．杀灭微生物效力的计算
　　溶液杀灭微生物的效力可依照下列公式进行计划（作用时间：5分钟；温度20℃）
　　　　　　　　　M．E．（20℃/5min）=log Nc – log Nd
　　公式中：M．E．（20℃/5min）：在标准条件下（温度，时间）杀灭微生物的效力。
　　　　　　　　　　　　　　　Nc：消毒前每亳升活菌数量
　　　　　　　　　　　　　　　Nd：消毒后每毫升活菌数量
5．结果和结论
　　实验的结果见表1和表2。由表中结果可知，用于检测的菌株与喜爱迪20接触后菌落数都减少了5个数量级（5log）以上。

表1：1%喜爱迪20溶液的灭菌效力结果　　　　　　　　　　　表2：1%喜爱迪20溶液的灭菌效力结果
　·温度：20 ℃·接触时间：5分钟·牛血清白蛋白浓度0.03%　·温度：20 ℃·接触时间：5分钟·牛血清白蛋白浓度：1%



二、喜爱迪20杀灭口蹄疫病毒、猪水泡病病毒的试验（由中国农业科学院兰州兽医所执行）
1．试验材料
1．1喜爱迪20消毒剂：比利时CID LINES公司出品，由沈阳佳盛禾畜牧有限公司提供。
1．2病毒：O型口蹄疫强毒（OPMF11LD508.0以上）种毒和猪水泡病强毒（SCHP/77MF8LD507.0以上）种毒由中国农业科学院兰州兽医研究所提供。将病毒分别研制成O型口蹄疫强毒1∶10悬液、猪水泡病病毒1∶5悬液，各加入双抗置4℃24小时，取出后以4000转/分钟离心15分钟，吸取上清液，用磷酸盐缓冲液稀释成口蹄疫病毒为1∶500倍，猪水泡病病毒1∶25倍，待用。
1．3试剂：磷酸盐缓冲液（pH7.6）、灭菌去离子水、健康犊牛血清（已灭能）。
1． 4试验动物：成年小白鼠、2-6日龄乳鼠、大兔、300-500g豚鼠均由兰州兽医所实验动物场提供；断奶仔猪从非疫区购入。
2．试验方法及判定标准
2．1喜爱迪20的安全性
2．1．1方法：用去离子水将喜爱迪20消毒剂稀释成1∶100、1∶200、1∶300、1∶400、1∶500等溶液，分别注射2—6日龄乳鼠，每组4只；灌服成年鼠每组4只，设生理盐水对照组和空白对照组，均观察7天。将上述各浓度消毒液，分别用大兔2只，做斑贴皮肤试验，观察7天。
2．1．2判定标准：接种部位及斑贴部位无炎症或坏死，灌服不引起死亡，判为安全；反之，判为不安全。
2．2喜爱迪20的消毒效力
2．2．1方法：用灭菌去离子水将喜爱迪20消毒剂稀释成1∶25、1∶50、1∶75、1∶100、1∶150、1∶200、1∶250、1∶300等浓度的消毒液，分别与等量的1∶500倍O型口蹄疫病毒、1∶25倍的猪水泡病病毒充分混合，并设加10%健康犊牛血清的组别，模拟有机物存在的环境。将混合液置18℃作用30分钟后加入中止液中止作用，再分别注射2—6日龄乳鼠，豚鼠脚掌注射，断奶仔猪蹄叉注射，并设病毒对照组（阳性对照），药物对照组，血清对照组，健康对照组（空白），观察7天。
2．2．2判定标准：①口蹄疫病毒和猪水泡病病毒的阳性对照组，动物应于接种后规定时间内发病或死亡，经检验诊断，确定为口蹄疫或水泡病所致；②试验组动物在观察期内无异常表现，与健康（空白）对照组动物一样全部健活；③以100%杀灭口蹄疫病毒或水泡病病毒的最大稀释倍数为该消毒剂的最大有效浓度。
3．试验结果
3．1安全性试验结果
表1：喜爱迪20注射2—6日龄鼠、灌服成年鼠以及大兔斑贴试验的结果



为了进一步准确判定喜爱迪20消毒剂的安全性，用1∶200、1∶300等浓度的消毒剂重复了试验，证实对小鼠、大兔的安全性良好。
3．2消毒效力的试验
3．2．1喜爱迪20对口蹄疫强毒的杀灭试验经过5次重复，试验结果见表2。
表2：



3．2．2喜爱迪20水泡病强毒的杀灭试验经过5次重复，结果见表3。
表3：



4．结论
4．1喜爱迪20以1∶100倍稀释对动物安全，可以用于畜禽体表消毒。
4．2喜爱迪20以1∶400倍稀释在室温下作用30分钟，能100%的杀灭口蹄疫强毒；用1∶100倍稀释能100%杀灭猪水泡病病毒。所以，喜爱迪20可用于口蹄疫病毒、猪水泡病病毒污染的动物栏舍、运载工具等环境消毒。

三、喜爱迪20对禽流感病毒的灭活试验（由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所执行）
1．材料
1．1喜爱迪20：由比利时CID LINES公司出品，由沈阳佳盛禾畜牧有限公司提供。
1．2H5亚型禽流感病毒：由中国农科院哈尔滨兽医研究所动物流感中心提供。
1．3SPF鸡胚：9-10日龄，由中国家科院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供。
2．方法
2．1病毒灭活试验：采用克利恩—得福雷斯特的悬浮试验进行灭活，采用稀释法去除消毒剂。
2．2病毒悬浮液的制备：将H5亚型禽流感病毒接种10日龄SPF鸡胚的尿囊腔，测定鸡胚半数感染剂量（EID50）。
2．3喜爱迪20溶液的制备：取喜爱迪溶液1ml溶于99ml的灭菌生理盐水中，即得浓度为1∶100的溶液。以此类推，试验时将消毒剂稀释到所需浓度。
2．4喜爱迪溶液对鸡胚的最大无毒剂量：将1∶20、1∶40、1∶80、1∶100、1∶120、1∶150浓度的喜爱迪20溶液分别接种到10日龄鸡胚尿囊腔内，每个稀释度接种4个鸡胚（0.2ml/只）。将接种的鸡胚放置在温箱中培养96小时，每日观察鸡胚死亡情况，24小时内死亡的鸡胚弃之。
2．5克利恩—得福雷斯特悬浮灭活试验
　　取H5亚型禽流感病毒悬液与浓度为1∶200、1∶400、1∶800、1∶1000、1∶2000、1∶3000的消毒剂溶液以1∶10混合，在20±1℃条件下作用5、10分钟，然后用生理盐水做10倍梯度稀释。对照组用灭菌盐水代替消毒剂，同法处理。稀释液接种10日龄鸡胚的尿囊腔，每个稀释度接种4个鸡胚（0.2ml/只）。将接种的鸡胚置37℃温箱中培养。24小时内死亡的鸡胚弃之，24小时后死亡的鸡胚及时取出，并逐个取胚液进行血凝试验，直到孵化至96小时。血凝呈阳性为鸡胚受感染，说明仍然有禽流感病毒存在。
　　按照鸡胚感染的结果，按下列公式分别计算试验组对照组鸡胚感染的阳性率、样本含EID50量与流感病毒的灭活率。
　　阳性率=发病鸡胚数/接种鸡胚数
　　样本含EID50量的对数=L—d(S—0.5)
　　（L为最低稀释倍数的对数；d为稀释度间差；S为各稀释列阳性率之和）
　　病毒灭活率=（对照样本含EID50量—试验样本含EID50量）/对照样本含EID50量×100%
3．结果
3．1喜爱迪20在1∶200、1∶400、1∶800、1∶1000、1∶2000、1∶3000的浓度下与H5亚型禽流感病毒作用5分钟，其灭活率为：100%、100%、100%、100%、100%、99.92%；以上浓度的喜爱迪20与H5亚型禽流感病毒作用10分钟后，其灭活率为：100%、100%、100%、100%、100%、99.95%。
3．2喜爱迪20溶液对鸡胚的最大无毒剂量为1∶120。
4．结论
　　1∶200、1∶400、1∶800、1∶1000、1∶2000、1∶3000浓度的喜爱迪20对H5亚型禽流感病毒均有效，而完全灭活浓度为1∶200、1∶400、1∶800、1∶1000、1∶2000。故建议对H5亚型禽流感临床使用浓度为1∶2000，但同时也要根据具体情况具体分析，适当提高使用浓度。

                                      总代理：黑龙江 雅贝克生物科技有限公司
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许崇波

我是黑龙江汤原县人，从事肉鸡养植的，很高兴来到这里认识大家，愿和大家多联系和交流。

许崇波

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