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普莱柯生物制品研究所所长 荣骏弓（研究员）
鸡新城疫也称亚洲鸡瘟、伪鸡瘟或非典型鸡瘟，是由新城疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染疾病。其主要特征是呼吸困难、严重下痢、黏膜和浆膜出血，病程稍长的伴有神经症状。
本病于1926年首先发现于印度尼西亚的爪哇，同年英国的新城（Newcastle）也发生了本病。经Doyle（1927）研究证明，它是一种由滤过性病毒引起的疾病，并根据发现的地名，称为新城疫。以后本病传播到亚洲各地，现在几乎世界上绝大部分国家都有本病流行的报告，是危害鸡和火鸡饲养业最严重的疫病之一。
1935年我国曾有“鸡瘟”流行的报告，但直到1946～1948年才证实我国流行的所谓鸡瘟实际是新城疫。本病在我国是所有鸡病中危害最严重的一种。过去我国许多地区每年都有本病流行，病死率很高，造成较大损失。现在全国各地普遍开展免疫接种，已很少流行，许多省区已基本控制了这种疫病。
【病原】 新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）是副粘病毒科（Paramyxoviridae）腮腺炎病毒属（Rubulavirus）的成员。
鸡新城疫病毒存在于病鸡的所有组织器官、体液、分泌物和排泄物中，以脑、脾、肺含毒量最高，骨髓含毒时间最长。因此分离病毒时多采用脾、肺或脑乳剂为接种材料。
本病毒经负染电镜观察，其颗粒异常多形性。一般呈圆形，直径100～500nm，也常见横断面100nm左右的不同长度的细丝。病毒颗粒表面覆有8nm长的纤突。裂解的纯化病毒颗粒经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）揭示，至少有7种多肽。NDV基因组编码的蛋白质有6种：L蛋白——RNA指导的与核衣壳关联的RNA聚合酶；HN蛋白——决定血凝素和神经氨酸酶的活性，形成病毒颗粒表面两种较大纤突；F融合蛋白——形成较小的表面纤突；NP核衣壳蛋白；P磷酸化蛋白；M蛋白质。
鸡新城疫病毒在鸡胚内很容易生长，无论是接种在卵黄囊内、羊囊内、尿囊内或绒毛尿膜上及胎儿的任何部位都能迅速繁殖。通常多采用孵育10～11d的鸡胚作尿囊腔注射。鸡胚接种病毒后的死亡时间，随病毒毒力的强弱和注射剂量而不同，一般在注射强毒后30～72h即死亡，大多数死于38～48h；注射弱毒的死亡时间可延长至5～6d，甚至更长。病毒通过鸡胚继代后，其毒力稍有增强，一般多在38h使鸡胚死亡。死亡胎儿全身充血，绝大多数头顶部出血，足趾常有出血，胸、背、翅膀等处也有小出血点或出血斑。卵黄囊常有出血。胚膜湿润且稍厚，并有由细胞浸润而形成的浊斑。
鸡新城疫病毒具有一种血凝素，可与红细胞表面的受体连结，使红细胞凝集。鸡、火鸡、鸭、鹅、鸽等禽类以及哺乳动物中豚鼠、小鼠和人的红细胞都能被凝集。这种凝集红细胞的特性被慢性病鸡、病愈鸡或人工免疫鸡血清中的血凝抑制抗体所抑制。因此可用血凝抑制试验鉴定分离出的病毒，并用于诊断或进行流行病学调查。此外，新城疫病毒具有溶血素，在高浓度时还能溶解它所凝集的红细胞。
本病毒对外界环境，对热和光等物理因素的抵抗力较其他病毒稍强，在PH2～12的环境下1h不被破坏。在密闭的鸡舍内可存活8个月，在粪便中72h死亡。病料中的病毒煮沸1min即死，经巴氏消毒法或紫外线照射即毁灭。常用消毒药如2％氢氧化钠、1％来苏儿、10％碘酊、70％酒精等在30min内即可将病毒杀死。
鸡新城疫病毒只有1个血清型，由自然发病鸡分离出来的不同毒株，其毒力有很大差异，这主要取决于HN及F的裂解及活化。有的毒株只能使雏鸡发病而不能致死成年鸡。有的病毒株甚至对雏鸡也不能引起严重症状。欧洲及亚洲鸡新城疫病毒比美国的病毒毒力强。在我国分离出的病毒一般都很强，以10-6～10-8稀释的鸡胚毒液1ml就可使鸡发病死亡，0.1ml可致死鸡胚。根据毒力的大小，可将病毒分为低毒力株、中等毒力株和强毒力株三大类。用HinfⅠ等三种内切酶对F基因的334～1682位核苷酸的片断的RT-PCR产物进行分析，可将NDV毒株分为10个基因型，尚无充分的证据表明NDV的基因型之间具有根本性的抗原性差异。
【流行病学】 鸡、火鸡、珠鸡、鹌鹑及野鸡对本病都有易感性，其中以鸡的易感性最高，野鸡次之。不同品种的鸡易感性稍有差异，以来航鸡的易感性较高。各种年龄的鸡，其易感性有差异，幼雏和中雏易感性最高，2a以上的老鸡感受性较低。水禽如鸭、鹅等也能感染新城疫。麻雀、鸽、乌鸦等野禽，大部分也能自然感染本病或伴有临诊症状或取隐性经过。哺乳动物对本病有强大抵抗力。人对本病有抵抗力，偶有因感染而引起眼结膜炎的。
病鸡是本病的主要传染源。感染鸡在出现症状前24h，其口鼻分泌物和粪便中已开始排出病毒，污染饲料、饮水、垫草、用具和地面等环境。潜伏期的病鸡所生的蛋，大部分也含有病毒。痊愈鸡在症状消失后5～7d停止排毒，少数病例在恢复后2周，甚至到2～3个月后还能从蛋中分离到病毒。在流行停止后的带毒鸡，常有精神不振，咳嗽和轻度神经症状。这些鸡也都是传染源。病鸡和带毒鸡也从呼吸道向空气中排毒。野禽、鹦鹉类的鸟类常为远距离的传染媒介。
本病的传染主要是通过病鸡也健康鸡的直接接触。在自然感染的情况下，主要是经呼吸道和消化道感染。创伤及交配也可引起传染。病死鸡的血、肉、内脏、羽毛、消化道的内容物和洗涤水等，如不加以妥善处理，也是主要的传染源。带有病毒的飞沫和灰尘，对本病也有一定的传播作用。非易感的野禽、外寄生虫、人、畜均可机械地传播本病毒。
本病一年四季均可发生，但春秋两季较多。鸡舍内通风不良，亦可使鸡群抵抗力下降而利于本病的流行。购入病鸡或带毒鸡，将其合群饲养和宰杀，可使病毒远距离扩散。本病在易感鸡群中常呈毁灭性流行，发病率和病死率可达95％或更高。
【发病机制】 新城疫病毒一般经呼吸道、消化道或眼结膜侵入机体，最初24h在入侵处的上皮内复制，随后释入血流。病毒损伤血管壁，改变其渗透性，导致充血、水肿、出血和各器官的变性坏死等病变。消化道首先表现为黏膜的急性卡他，随即发展为出血性纤维素性坏死性炎症，引起严重的消化障碍而下痢。由于循环障碍引起肺充血和呼吸中枢紊乱，呼吸道黏膜的急性卡他和出血，由于气管常为黏液所阻塞而导致咳嗽和呼吸困难。大多数病毒株都是嗜神经的，在病的后期侵入中枢神经系统引起非化脓性脑脊髓炎，因而出现神经机能紊乱；病鸡瘫痪，呈昏睡状态，终至死亡。
病毒在血液中的最高滴度约出现在感染后的第4天，以后显著降低。感染后的3～4d鸡血清中出现抗体，3～4周时达最高峰，以后开始下降。在体液抗体形成的同时，鼻、气管和肠道渗出物中也开始分泌抗体。
【症状】 潜伏期的长短，随病毒毒力的强弱、进入机体内的病毒量、感染途径以及个体抵抗力的大小而有所不同。自然感染潜伏期2～14d，平均5d。最短的潜伏期见于2日龄的幼雏。人工接种多在4d以内发病。根据临诊表现和病程长短可分为最急性、急性和亚急性、慢性、非典型等四型。
最急性型 此型多见于雏鸡和流行初期。常突然发病，除精神萎顿外，常看不到明显的症状而很快死亡。
急性型 病鸡在发病初期体温升高达43～44℃，食欲减退或突然不吃。精神萎顿，垂头缩颈，眼半闭或全闭，似昏睡状态。母鸡停止产蛋或产软皮蛋。排黄绿色或黄白色水样稀便，有时混有少量血液。口腔和鼻腔分泌物增加。病鸡咳嗽，呼吸困难，有时伸头，张口呼吸。部分病鸡还出现翅和腿麻痹，站立不稳。病鸡在后期体温下降至常温以下，不久在昏迷中死亡。死亡率90﹪～100﹪。病程2～9d。1月龄内的雏鸡病程短，症状不明显，死亡率高。
慢性型 多发生于流行后期的成鸡，常由急性转化而来，以神经症状为主。初期症状与急性期相似，不久渐有好转，但出现翅和腿麻痹、跛行或站立不稳，头颈向后或向一侧扭转、伏地旋转等神经症状，且呈反复发作。最后可变为瘫痪或半瘫痪。或者逐渐消瘦，陷于恶病质而死亡。病程一般10～20d，死亡率较低。
非典型 病鸡衰弱无力，精神萎靡，伴有轻微呼吸道症状，也常见无明显症状，而发生连续死亡。产蛋鸡常突然发病，产蛋下降，有的下降20﹪～30﹪，有的下降50﹪左右，一般经7～10日降到谷底，回升极为缓慢。蛋壳质量差，表现为软皮蛋、白壳蛋等。死亡率一般较低。
【病理变化】 本病的特征性变化为败血性变化，尤以消化道和呼吸道最为明显。
最急性型 尸体变化比较轻，仅在胸骨内面及心外膜有出血点，或可能完全没有变化。
急性型 全身黏膜和浆膜出血，淋巴系统肿胀。出血和坏死尤以消化道和呼吸道明显。口腔及咽喉附有黏液。咽部黏膜充血，并偶有大小不等的出血点，间或被覆有浅黄色污秽假膜。食道黏膜间有小出血点。嗉囊壁水肿，嗉囊内充满酸臭的液体和气体。腺胃黏膜和乳头肿胀，乳头顶端或乳头间出血，或有溃疡坏死。在腺胃与食道或腺胃与肌胃的交界处常有条状或不规则的出血斑。肌胃角质层下常有轻微的出血点及出血斑，有时也形成粟粒大小、圆形或不规则的溃疡。从十二指肠到盲肠和直肠可能发生从充血到出血的各种变化。肠黏膜上有纤维素性坏死性病灶，呈岛屿状凸出于黏膜表面，上有坏死性假膜覆盖，假膜脱落即露出粗糙、红色的溃疡。溃疡大小不等，大的可达15mm或更长，溃疡可深达黏膜下层组织，以致从肠壁浆膜面即可清晰地看到有隆起的大小不等的黑红色斑块。盲肠和直肠黏膜的皱褶常呈条状出血。盲肠扁桃体肿大、出血和坏死。
鼻腔和喉头充满污浊的黏液，黏膜充血，并有小出血点，偶有纤维素性坏死点。气管内积有大量黏液，黏膜充血和出血。肺有时可见淤血或水肿，偶有小而坚硬的灰红色坏死灶。心外膜、心冠状沟和胸骨都可见到小出血点和淤斑。产蛋母鸡的卵黄膜和输卵管显著充血。脑膜充血或出血。
慢性型 变化不明显，仅见肠卡他或盲肠根部黏膜轻度溃疡，或以神经系统的原发性病变为主。
非典型 大多病例肉眼变化不明显，可见喉头、气管黏膜充血、出血，小肠卡他性炎症，又是可见泄殖腔黏膜充血、出血等。
【诊断】 根据流行病学的特点，如本病只发生于鸡，发病率和死亡率都很高，常呈毁灭性流行；结合临床上呈严重下痢，呼吸困难，死亡较慢者常出现神经症状；病理剖检见有消化道的弥漫性点状出血和溃疡以及脂肪组织的针尖状出血点等，根据这些综合征候，一般可以作出初步诊断。确诊则须依靠实验室的病毒分离鉴定，以及检测与血清中特异性抗体的升高。
血清学试验 采集在鸡群暴发疑似新城疫急性期（10d内）及康复后期的双份血清，用血凝抑制试验证明抗体滴度增高，即可确诊。
血凝抑制（HI）试验 按常规先用已知病毒做血凝试验，测定病毒的血凝价，再做血凝抑制试验，检测血清的凝集抑制抗体的高低。血凝抑制试验灵敏度高，迄今所知，除火鸡副流感外，鸡的其他病毒病不含产生与新城疫病毒发生交叉反应的抗体。
空斑减少中和试验 将连续稀释的血清与定量的已知病毒（50～100个空斑形成单位）混合，孵育，接种于鸡胚成纤维细胞单层上，加覆盖层进行培养。设对照组。一般于72h加上第二层带有中性红的覆盖层。24h～48h在适当的光线下观察。根据一定稀释度的血清所减少的空斑数，即可获得血清的中和抗体滴度。此方法是检测中和抗体最敏感的方法。
荧光抗体技术 用免疫母鸡的丙种球蛋白制备荧光抗体，以病鸡的肺、肝、肾和脾等组织压印片进行荧光抗体染色，发现嗜伊红白细胞、假嗜伊红白细胞和浆细胞的颗粒、细胞核及细胞浆中出现明显的黄绿荧光，即可确诊。此法比血凝抑制试验和常规的鸡胚接种法能更快、更灵敏地做出诊断。
鉴别诊断 在病初或症状不典型时，可能与禽霍乱、鸡传染性喉气管炎、禽流感等病混淆，应注意鉴别。
【免疫】 患新城疫痊愈的鸡具有坚强的免疫力，不仅与病鸡接触不再感染，即使注射大剂量病毒也不再发病。而且这种免疫力可以持续终身。
体液免疫 中和试验可以测定保护性抗体。中和抗体反应似乎与HI抗体反应相平行，后者更常用于测定保护性抗体，特别是免疫接种之后。抗功能性表面糖蛋白HN和F多肽的抗体均可中和新城疫病毒。体内和体外试验表明，抗F多肽上特异性表位的单克隆抗体的中和作用比抗HN的强，所以依靠简单的HI试验来评估保护作用的做法可能会出现意外。
感染新城疫后存活时间较长的鸡，一般在6～10d内可检测到血清中的抗体。抗体水平很大程度上取决于感染的毒株，但一般在3～4周出现高峰。抗体水平的下降与其所达到的抗体水平有关，但比抗体产生速度慢。中发型毒株感染或经一系列免疫后，血凝抑制抗体可持续1年。抗体效价开始下降后几周再感染或免疫可引起二次应答。
局部免疫 鸡大约在首次检测到体液抗体之时，在上呼吸道和肠道分泌物中出现抗体。上呼吸道的免疫球蛋白主要是IgA 和部分IgG。眼内感染，哈德氏腺也有类似的分泌物。虽然不需依赖于体液免疫，局部免疫对呼吸道有一定的保护作用，但其确切保护作用仍不清楚。眼内接种HitchnerB1，病毒可以在哈德氏腺复制，泪液中母源IgG可以阻断病毒增殖。病毒在哈德氏腺增殖可刺激产生泪液IgG、IgA和IgM。尤其是哈德氏腺成为鸡分泌IgA抗体细胞的主要部位。Russell和Ezeifeka强调IgM是清除眼内感染病毒的主要抗体类型。
被动免疫 母鸡可通过卵黄将其抗NDV抗体传给子代。1日龄雏鸡的抗体水平与其亲代的抗体效价直接相关。Allan等估计母源抗体HI效价半衰期约为4.5d。母源抗体有保护作用，因此在确定雏鸡首次免疫接种时间时必须加以考虑。高免血清或高免蛋黄对早期病例有一定的治疗作用。
免疫抑制 免疫抑制对NDV的致病性及免疫接种的保护作用均有很大影响。自然条件下，感染其他病毒，如传染性法氏囊病病毒可以引起免疫抑制。免疫缺陷使某些NDV感染发病更为严重，而且对免疫接种不能产生充分的免疫反应。鸡传染性贫血因子引起的免疫抑制可导致灭活的新城疫疫苗二次免疫失败。
【预防和控制】
新城疫是OIE规定的A类传染病，许多国家都有相应的立法。控制措施包括良好的卫生和免疫。
新城疫免疫接种
早期研究证明，鸡接种灭活的感染材料可以产生保护，但在生产和标准化中遇到难题，使其未能大规模应用。30年代Iyer和Dobson致弱强毒NDV研制出中发型疫苗株，至今仍有部分地区在使用。
美国确诊ND后首先使用灭活疫苗。后来发现某些流行毒株仅引起轻度疾病，结果研制出中发型活疫苗Roakin株，再后来便是更弱的Hitchntr B1和La Sota株。这些是现在使用最广的疫苗。
灭活疫苗一般是铝胶吸附病毒，在欧洲1970～1974年大流行中使用最广，但效果不好。结果大多数国家使用B1和La Sota活疫苗免疫接种。这些大流行也促使人们研制出油佐剂灭活苗，已证明非常有效。
弱毒疫苗 一般将NDV弱毒疫苗分为两类：缓发型和中发型。中发型由于毒力较强，仅适用于二次免疫。使用弱毒疫苗的目的是建立鸡群感染，最好是在使用时每只鸡均感染。缓发型疫苗常常进行逐个接种如滴鼻、点眼和浸喙。中发型疫苗一般需要刺羽或肌注。
偏好弱毒疫苗是因为可以进行大规模使用，较经济。最常用的方法可能是饮水免疫。通常家禽禁水若干小时，然后将计算好的疫苗加入到新鲜的饮水中，保证每只可以获得足够的剂量。饮水免疫时，必须进行认真的监测，因为室温过高、水不纯甚至输水管道质量等都有可能杀灭病毒。在饮水中加入脱脂奶粉可以在一定程度上稳定病毒活性。
弱毒疫苗大规模喷雾或气雾也很普遍，因为这样可以在短时间内免疫大量鸡。控制雾滴大小很重要。为了避免严重的疫苗反应，气雾常常限用于二次免疫。大颗粒喷雾不易穿透禽的深部呼吸道，因此反应较少，适合于雏禽的大规模免疫。尽管有母源抗体，但1日龄雏鸡喷雾仍可以使鸡群建立疫苗毒感染。
一种由澳大利亚V4病毒制备的疫苗专门用于热带国家农村的鸡群。建议包被在鸡的颗粒料上饲喂。当初进行实验室和田间试验，这种方法有效。后来研究发现与用作载体的饲料有关。
弱毒疫苗接种的优缺点：弱毒疫苗一般是由感染胚尿囊液冻干而成，相对便宜，易于大规模使用。弱毒感染可能刺激产生局部免疫，免疫后很快产生保护。疫苗毒还可从免疫鸡传播给未免疫鸡。但也有几个缺点。最重要的是疫苗可能引发疾病，这取决于环境条件及是否有并发感染。因此，初次免疫接种应选用毒力极弱的疫苗，一般需要多次接种。母源抗体可能影响弱毒疫苗的初次免疫。疫苗毒在鸡群中散布可能是一优点，但传播到易感鸡群，特别是不同日龄混养的地方可能会引起严重的疾病，尤其是有促发性病原并发感染时。在疫苗生产过程中如果控制不当，弱毒疫苗很容易被药剂和热杀灭，并且可能含有污染的病毒。
灭活疫苗
生产方法：灭活疫苗一般是感染性尿囊液用β—丙内酯或福尔马林杀死病毒，并与载体佐剂混合。早期灭活苗用铝胶佐剂，油佐剂疫苗的研制是一大进步。不同的油乳剂疫苗的乳化剂、抗原及水－油比不同，大多数使用矿物油。
生产油乳剂疫苗的毒种包括Ulster2C、B1、La Sota、Roakin及几种强毒。选择的标准是在鸡胚中增殖的抗原量。无致病力的病毒滴度最高。所以，没有必要冒险使用强毒。可加入一种或更多的其他抗原与NDV一起乳化制成二联或多联疫苗，包括传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、产蛋下降综合征病毒和呼肠孤病毒等。我公司先后开发出鸡新城疫病毒（La Sota株）、传染性支气管炎病毒（M41株）、禽流感病毒（H9亚型，HL株）三联灭活疫苗，鸡新城疫病毒（La Sota株）、传染性支气管炎病毒（M41株）二联灭活疫苗等在生产实践中广泛应用。
灭活苗的应用：灭活苗经肌肉或皮下注射接种。
灭活苗的优缺点：灭活苗的贮存比活苗容易得多，但生产成本较高，使用比较费劳力。使用多联苗可以节省部分劳力。灭活苗与弱毒疫苗不同，1日龄鸡免疫不受母源抗体影响。灭活苗的质量控制较难，而且接种人员被意外注射后矿物油可能引起严重反应。灭活苗的主要优点是免疫鸡副反应小，可用于不适合接种弱毒疫苗，特别是有并发病原感染的鸡。另外可产生很高水平的保护性抗体并可持续较长时间。
免疫程序 疫苗和免疫程序可能受政府政策的控制。应根据流行情况、疫苗种类、母源免疫、其他疫苗的使用、其他病原的存在、鸡群大小、鸡群饲养期、劳力、气候条件、免疫接种史及成本等因地制宜地确定。肉鸡因为有母源抗体，免疫接种时间更难确定。由于肉鸡生长时间短，在ND威胁较小的国家有时不进行免疫预防。
为了保持产蛋鸡终生的免疫力，往往需要多次免疫，建议用弱毒疫苗和灭活疫苗同时接种免疫或先用弱毒疫苗局部免疫，间隔14～21日后再用灭活疫苗加强免疫，实际免疫程序依当地情况而定。
免疫反应监测 对于NDV一般采用HI试验评定免疫反应。易感禽缓发型弱毒疫苗一次免疫后，免疫反应可达24～26。油乳剂灭活疫苗免疫后HI效价可达211或更高。
未来发展 近年来分子生物学技术的发展，大大地促进了对NDV致病性、抗原性的了解及与之紧密相关的基因的克隆。已报道了在重组禽痘病毒、重组禽细胞中表达的HN基因以及在重组禽痘病毒、痘苗病毒、鸽痘病毒及火鸡疱疹病毒中表达F基因的保护性免疫。
可以检测NDV毒株之间抗原性差异的单克隆抗体在评价野毒与疫苗毒之间的抗原相关性、保证二者抗原性密切相关方面具有重要意义。
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发表于 2010-4-13 08:30:57
