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【分享】家禽肠球菌型脊椎炎导致的跛行

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鸡病专业网编辑

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发表于 2 小时前 | 显示全部楼层 |阅读模式 来自: 中国河南

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在很多鸡场里,“跛行”、“瘫鸡”、“脊椎问题”往往是最让人头疼、也最难快速定位原因的一类情况。

近二十多年来,一种原本常被视为肠道共生菌的细菌——盲肠球菌(Enterococcus cecorum,EC)——越来越频繁地与这些问题联系在一起:

从较大日龄肉鸡的典型脊椎病变,到近几年更小日龄肉鸡出现的临床败血症。

下面分享的一篇论文把EC感染在家禽中的发生、诊断、传播与防控难点进行了梳理总结。

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自21世纪初以来,肉鸡群中与致病性盲肠球菌(Enterococcus cecorum,EC)相关的骨骼问题逐渐成为生产中的重要关注点。最典型的表现是肠球菌性脊椎炎(enterococcal spondylitis),常与游离胸椎(free thoracic vertebrae,FTV)的持续感染相关,严重时可发展为瘫痪

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病鸡瘫痪,屁股着地,脚尖朝前。注:图片来源于poultryworld官网

近几年出现了新的情况:更具毒力的EC在日龄更小的肉鸡群中引发临床败血症

与此同时,EC在商业化养殖体系中的传播动态仍不清晰,种鸡到后代的垂直传播目前缺乏确证;发病日龄前移提示暴露很可能发生在入场之前,例如胚胎后期或孵化阶段

再叠加生产体系中抗生素使用的变化、缺乏成熟有效疫苗以及EC可能存在免疫逃逸等因素,使防控更具挑战。

鸡中EC的致病过程

EC相关疾病常呈现两个阶段:

第1阶段(早期,通常在生后前3周内):以败血过程为主;


第2阶段(后期,数周龄后至出栏前):以骨骼系统损伤为主。

在整体路径上,常见的逻辑是:先在肠道建立定植 → 随后发生细菌移位/菌血症 → 进入肠外组织并在骨骼结构持续存在。

机制层面仍有不少空白,但肠道定植与菌血症被视为关键前提。

与共栖株相比,致病株可在更早日龄就建立肠道定植:共栖EC往往在较晚日龄才在胃肠道稳定检出,而致病EC可在更早阶段出现,并可在随后从卵黄囊、脾脏等部位分离到,提示存在早期播散。

更进一步的观察显示,出雏时即可在椎体分离到EC,使胚胎期或孵化期暴露与雏鸡早期发病之间的关联更值得重视。

先锋定植(pioneer colonization)这一概念也因此被提出:如果在生命最早期就被非共栖、具致病潜力的细菌抢先定植,后续风险可能显著上升。

鸡中EC相关疾病的诊断

诊断通常综合群史与临床表现、剖检肉眼病变以及细菌分离培养。

一个高度提示性的发现是:在FTV水平出现典型的脊椎炎与骨髓炎性病变。

需要强调的是,早期败血阶段可能表现轻微甚至亚临床,仅凭“看起来没问题”并不能排除感染。

败血阶段可见精神沉郁、羽毛蓬乱、生长迟缓等非特异表现,并伴随生产性能下降与死亡率升高。

剖检中常见心包炎(纤维素性渗出)、肝脏肿大与坏死灶、脾肿大及坏死样改变等。

组织学可见以异嗜性粒细胞、组织细胞与淋巴细胞为主的炎症反应

由于这些表现与其他机会致病菌(例如大肠杆菌)导致的败血症可能重叠,鉴别诊断往往不可避免

为提高分离到EC的概率,建议在不同阶段从多个易感部位取样(如关节、心包、骨髓等)。

骨骼阶段通常以跛行作为起点,可进展为共济失调、严重跛行直至瘫痪;可见典型蹲坐姿势、双腿前伸。死亡高峰可出现在生产中后期。

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这只鸡呈后肢瘫痪或麻痹的典型姿势,即后肢摇晃姿势,这是由肠球菌性脊椎炎引起的。这只鸡用后肢支撑身体,前腿伸直,通常用翅膀来移动。注:图片来源于默克兽医官网

病灶常位于FTV及股骨头等处,能够从这些炎性病灶中分离到EC。

股骨头区域的微裂隙更容易被机会致病菌定植,可能导致骨髓炎、软骨坏死,进一步引起严重跛行甚至骨折风险。

除脊柱与股骨头外,也可出现关节炎(显著影响动物福利)以及心内膜炎等情况。
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A. 肉眼可见致病性盲肠球菌感染表现为游离胸椎的球状肿大(箭头所示)。B. 脊柱纵切面显示游离胸椎内有棕褐色至白色的干酪样渗出物(黑色箭头所示),并压迫其上方的脊髓(白色箭头所示)。注:图片来源于默克兽医官网

EC的潜在传播途径

在商业化养殖体系中,EC的传播途径尚未完全界定

现阶段更符合实际的情形是:具更强致病性的优势克隆在鸡群内外发生水平传播;至于垂直传播,目前缺乏一致且明确的证据支持。

发病日龄前移使一个关键窗口更加突出:胚胎后期与孵化阶段。

一方面,低日龄肉鸡群的快速发病提示暴露可能发生在入场之前;另一方面,EC具有较强环境生存能力。

群内传播被认为以粪—口途径为主,因为肠道定植往往先于其他系统病变出现。

卵内暴露的实验现象也支持这一思路:在胚胎后期接触高毒力EC可促进其早期肠道定植,并推动其在椎体等肠外组织的持续存在,同时影响一定日龄的生产表现。

环境方面,EC对温度与干燥等胁迫具备一定耐受性;在不同基质中存活时间差异明显,例如在垫料中存活可显著延长,而毒力更强的菌株在不利条件下往往更“抗造”。

即便实施清洗与消毒,环境中仍可能存在持续污染并造成批次间交叉污染。

若其他肠球菌同时存在,分离鉴定会更困难。

降低传播与交叉污染的核心仍在于:严格生物安全、彻底清洗消毒,以及水与饲料质量管理

EC的表型与基因型评估

常见的鉴定路径包括:分离培养与表型观察之后,结合基因分型进一步确认,例如多位点序列分型、PFGE、16S rRNA测序或者特异性PCR等。

在培养表现上,EC菌落可呈灰色黏液样,边缘可见轻度α溶血;革兰氏染色多为成对或短链排列的革兰阳性球菌。菌落大小通常为2–3 mm,但也可能出现小于1 mm的小菌落。

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盲肠球菌 CCUG 9997 菌株在牛血琼脂平板上于 37°C 培养 24 小时后的菌落。图 A 显示整个平板,图 B 为图 A 的放大图。比例尺总长度分别为 10 mm 和 3 mm。注:图片来源于www.vetbact.org

血琼脂等培养基在适当气体环境下37℃培养18–24小时可用于分离。


显色培养基可以加快初筛,但EC并不能在显色平板上与其他肠球菌可靠区分,因此仍需进一步确认(如MALDI-TOF MS或PCR等)。

此外,禽源分离株的表现可能与用于建立鉴定数据库的人源分离株不同,仅凭表型识别往往更费时、更具挑战。

致病株与共栖株的区分

肠球菌多为机会致病菌。

当EC从肠外器官分离到时,通常更倾向被视为致病相关株

鸡胚致死试验(ELA)常被用于评估菌株毒力:肠外来源分离株往往造成更高的胚胎死亡率。

需要注意的是,不同模型之间可能出现不一致:在ELA中表现为高毒力的菌株,经口暴露并不一定稳定复制出疾病。

在一些对比中,致病相关分离株的胚胎致死率高于共栖株,同时在代谢表型上也存在差异。

例如,脊柱病灶来源分离株更常表现为D-甘露醇利用能力较弱,而甘露醇代谢相关基因更常见于非致病株;该特征可作为区分线索之一。

PFGE与基因组分析也提示:肠外分离株与肠道分离株在遗传背景上存在分化,且不同地区临床株之间可能具有一定相似性。

另一个不可忽视的因素是小菌落变异体(SCV)。


SCV生长缓慢、表型特殊,可能与持续感染、复发以及抗菌药敏感性变化有关。

EC的SCV既有低致病性描述,也有在年轻肉鸡中与败血症和明显心脏病变相关的致病性报道,提示其真实流行频率与致病潜力仍需进一步厘清。

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(a) 高毒力 EC 的小菌落变异体(SCV)在血琼脂上的菌落形态(左),与典型菌落形态(右)对比。(b) 在胚胎发育第18天进行胚内接种高毒力 EC SCV 后,于14日龄肉鸡中观察到的心脏灶性坏死,或 (c) 伴有明显细胞浸润的心包积液(hydropericardium)。注:图片来源于论文原文。

毒力因子


不同EC分离株之间的毒力差异很大。


具致病性的菌株能够更有效地黏附宿主细胞、侵入组织并逃避宿主免疫反应。

毒力评估可从基因层面入手(PCR或基因组分析筛查相关位点),也可通过表型试验验证功能,并结合体内模型综合判断

基因存在并不意味着一定表达或一定有功能,基因型与表型不一致并不少见。

在被关注的结构与位点中,多糖荚膜与毒力增强的关联尤为突出:它有助于抵抗宿主免疫防御并提高环境耐受能力,且在临床株中更常见。

除荚膜外,既往也关注过多种肠球菌属常见毒力基因(如与黏附、组织破坏、生物被膜等相关的基因),但不同研究之间检出谱差异较大,提示决定EC致病性的关键因素可能并不完全等同于其他肠球菌物种的“经典毒力基因”。

在表型层面,共栖株更常表现出甘露醇利用能力,而高毒力株更常缺乏;生物被膜形成、胶原黏附、在鸡血清中存活等特征可能与毒力有关,但并非所有临床株都稳定呈现。

还有观察提示,高毒力EC对溶菌酶耐受性更强;溶菌酶是蛋清与黏液分泌物中的关键抗菌成分,这一特性可能有利于其在胚胎发育阶段存活。

抗菌药物耐药性


在不允许使用抗生素的生产体系中,抗菌治疗无法实施;在常规体系中,早期发现的EC感染曾尝试使用抗菌药物治疗,但在已出现明显临床问题的鸡群中效果可能有限。

原因可能包括:EC对软骨与心包等组织具有趋向性,这些部位药物到达浓度不足易导致感染持续;同时肠球菌属既有固有耐药机制,也可获得耐药性。

耐药性评估可采用基因型与表型方法。

在EC药敏评估中,纸片扩散法被认为更适用。

已有报道显示,部分致病相关EC对四环素、土霉素、红霉素等耐药更常见;也有资料显示某些地区的临床株仍对多种关键药物保持敏感。

关于万古霉素耐药,不同研究与地区结果并不一致

多重耐药在致病相关株中更常出现,但耐药谱差异很大;甚至在未使用某些药物的情况下也可出现相应耐药,提示可能存在共选择现象。

围绕禽源EC的耐药监测,对于识别趋势与评估风险非常关键。

对家禽产业的意义与结论

EC已成为鸡群中不可忽视的病原之一,尤其是年轻肉鸡群中败血症的出现增多

传播与持续存在方式仍缺乏清晰答案,毒力相关特征在不同分离株与不同地区之间并不完全一致

要建立更有效的控制措施,需要进一步梳理水平传播动力学,并锁定更可靠的毒力决定因素

生产端的防控更应突出预防:强化生物安全,减少污染输入并降低批次间交叉污染,同时探索替代治疗手段以降低传播风险。

免疫防控方面,灭活菌苗用于种鸡并不能有效阻断子代的临床问题;同时,致病EC可能具备逃避抗体介导免疫反应的能力,使疫苗研发更复杂。

制定控制策略时,应同时兼顾直接与间接传播途径,并把胚胎后期这一关键阶段纳入整体防控框架。

来源:poultry times
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