【分享】2023—2024年鸡传染性贫血病的流行病学调查及防控策略

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■  摘要：为探究鸡传染性贫血病毒（CIAV）在我国的流行规律，本研究采用PCR方法对2023—2024年来自不同省份的疑似感染样本进行病原检测。研究结果显示：2023年62份样本中阳性检出率为22.6%，而2024年112份样本中阳性检出率为35.7%，表明CIAV在国内鸡群中感染呈上升趋势，此外，对2024年阳性样本进行VP1基因测序分型，发现基因A型占比85%，基因C型占比15%。因此，我国CIAV防控面临严峻压力与挑战，迫切需要加强生物安全防范措施及疫苗研发工作。

■ 关键词：鸡传染性贫血病；流行病学调查；防控策略

■ 鸡传染性贫血病毒（chicken infectious anemia virus，CIAV）是一种主要感染1～3周龄雏鸡的免疫抑制性病原体，感染后可诱发再生障碍性贫血和系统性淋巴耗竭，造成宿主免疫机能严重降低并阻碍其生长，显著增加继发感染（病毒、细菌、真菌）的风险[1]。发病率和易感性随着日龄增加而降低，有母源抗体保护的雏鸡或大于3周龄的鸡群感染后往往无明显临床症状。自1992年以来，鸡传染性贫血（CIA）在我国多个省份广泛存在且感染率较高，尽管其致死率较低，但导致的免疫抑制对鸡群的健康构成了双重威胁：一方面增加其他疾病的易感性；另一方面也降低对马立克氏病、传染性法氏囊等疫苗的保护水平。这两种效应的协同作用使鸡群在面临同时或继发感染时死亡率明显增加，给养禽业带来重大经济损失。本研究旨在通过流行病学调查，掌握CIAV在我国的流行规律，为制定科学有效的防控策略提供依据。

1.材料

第一，检测样品。

本研究收集了2023年和2024年来自15个省市的疑似CIAV感染的病料，包括肝、脾、法氏囊、肾脏等组织。

第二，试剂与来源。

核酸提取试剂盒、PCR试剂盒、DNA Marker DL2000、GelStain核酸染料：北京全式金生物技术有限公司；

琼脂糖：Biowest Agarose琼脂糖（西班牙产）；

50×TAE buffer：索莱宝公司。

第三，主要仪器与厂家。

超净工作台：苏州净化设备有限公司；

生物安全柜：北京东联哈尔仪器制造有限公司；

高速组织研磨机：上海净信实业发展有限公司；

离心机：Thermo Fisher；

水浴锅：北京陆希科技有限公司；

PCR仪：BIORAD；

电泳仪：北京六一生物科技有限公司；

凝胶成像仪：BIORAD；

电子天平：赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；

移液器：eppendorf。

第四，引物设计与合成。

根据《出口禽组织中兽药残留检测方法液相色谱—质谱/质谱法》（SN/T 4053-2014）鸡传染性贫血检疫技术规范，合成了用于样本检测的鉴定引物，引物序列如下：

上游引物

5'-AATGAACGCTCTCCAAGAAG-3'，

下游引物

5'-AGCGGATAGTCATAGTAGAT-3'，

预期片段大小为582 bp。

2.方法

2.1病料处理

取疑似CIAV感染的患病鸡的肝脏、肾脏、脾脏、法氏囊等组织病料放入平皿内，用无菌PBS（含4 000 IU双抗）清洗。然后，将组织样本剪碎，按照病料和PBS 1:5的比例，加入含无菌PBS（含4 000 IU双抗）的研磨管中，设置频率为60 Hz，研磨120 s，待研磨结束后将离心管放置在4 ℃环境下离心，时间为15 min，离心结束后吸取上清液保存在4 ℃环境下以备后续实验。

2.2样本处理（以1个样本为例，步骤同说明书）

第一：加入20 μLProteinase K在一个无菌的1.5 mL离心管中。加入200 μLBB5，涡旋混合15 s。

第二：在离心管中加入200 μL样本，涡旋混合15 s。

第三：在56 ℃环境下孵育15 min。

第四：加入250 μL无水乙醇，涡旋15 s，室温放置5 min。

2.3样本提取（以1个样本为例，步骤同说明书）

第一：将离心管中内容物倒入离心柱中，12 000 g离心1 min，弃掉流出液。

第二：加入500 μLWB5，12 000 g离心1 min，弃掉流出液。

第三：加入500 μLWB5，12 000 g离心1 min，弃掉流出液。

第四：室温12 000 g离心1 min，彻底去除残留的乙醇。

第五：将离心柱转入一个新的1.5 mL无酶离心管中，打开离心柱的盖子，并向离心柱中央加入30 μL的RNase-free Water，室温静置1 min。

第六：室温12 000g离心1 min，洗脱DNA。

第七：将DNA放置-20 ℃环境中保存，备用。

2.4PCR检测

对提取的DNA进行扩增，扩增条件为95 ℃环境下预变性3 min；95 ℃环境下变性30 s，55 ℃环境下退火30 s，72 ℃环境下延伸45 s，共30个循环；最后72 ℃环境下延伸7 min。将扩增产物进行1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定，电泳条件为150 V，30 min。结束后用凝胶成像系统观察并记录结果。

3.结果与分析

3.1PCR检测结果

检测结束后，扩增得到了582 bp大小的条带，符合预期大小。

在2023年62份疑似样品中检出14份CIAV阳性样品(见图1)，阳性检出率为22.6%（见图4）；在2024年112份疑似样品中检出40份CIAV阳性样本（见图2、图3），阳性检出率为35.7%（见图4）。CIAV感染率年度增幅达13.1%。检测结果表明CIAV在国内鸡群中普遍存在，感染率呈现上升趋势。


图1  2023年CIAV阳性样本核酸电泳图


图2  2024年1-6月份CIAV阳性样本核酸电泳图


图3  2024年7-12月份CIAV阳性样本核酸电泳图


图4  2023年和2024年CIAV阳性检出率变化

3.2VP1基因测序分型结果

根据VP1基因设计测序引物，并应用CIAV测序引物扩增2024年检出的40份阳性样本，经电泳确定，获得的目的片段大小与结果一致。将扩增产物送苏州金唯智生物科技有限公司测序。

将测序结果与NCBI下载的鸡传染性贫血核酸序列进行比较，绘制如下进化树（见图5、图6）：


图5  2024年1-6月份进化树
（红色▲代表标准毒株）


图6  2024年7—12月份进化树
（红色▲代表标准毒株）

3.3 总结分析

通过以上分析，对2024年检出的40份阳性样本进行VP1基因测序分型，结果显示基因A型占比较高，占比85%，基因C型占比15%（见图7）。这一结果有助于了解CIAV在我国流行的基因型分布特征。

从宿主来源看，2024年CIAV阳性样本中，蛋鸡样本共计15份，肉鸡（含黄鸡和白鸡）样本共计25份（见图7），由此可见，蛋鸡和肉鸡均存在高感染的压力。


图7 2024年CIAV的VP1分型比例及
不同宿主间分布

4.预防与控制

自2021年鸡传染性贫血病（CIA）在我国鸡群中的检出率逐年上升，阳性检出地区和阳性宿主范围持续扩大，覆盖了白羽鸡、黄羽鸡和蛋鸡的主要饲养地区。虽发病率和致死率不高，但该病引起的免疫抑制、并发或继发感染，以及对马立克、法氏囊等疫苗免疫效果的抑制，已经给我国家禽养殖业生产效益造成严重损失。为了防控其流行，必须强化生物安全防治措施，预防鸡群CIAV的感染至关重要。

4.1加强生物安全

鸡群对CIAV的易感性具有明显的年龄特征，低日龄鸡易感性高，随日龄增长其易感性和发病率均下降。因此，针对易感高峰期的育雏前期和产蛋前期的鸡群，实施严格的生物安全措施和科学的饲养管理，是防控CIAV感染和发病的有效途径。

CIAV粒子小，对理化处理有较强抵抗力，对酚、酸性消毒剂比较敏感。因此要注意日常管理和卫生消毒措施，严格隔离生活区和饲养区，增加消杀频次，加大消杀强度，减少或消灭环境中的病毒。落实日常饲养管理制度（如分区饲养、区域隔离、物流控制），阻断传播途径，避免雏鸡早期感染。严格控制引种检疫工作，特别是产蛋鸡群的引种和混群，避免该病毒传入健康鸡群。同时关注活疫苗的外源病毒污染风险，加强对禽用活疫苗的检测工作。

4.2疫苗研发与应用

有效的母源抗体可保护雏鸡抵抗CIAV的感染和传播，因此疫苗免疫是控制CIAV感染的有效手段。通过疫苗免疫种鸡以避免CIAV在雏鸡间的垂直和水平传播，降低雏鸡CIA的发生率。目前商品化疫苗有两种，第一种是鸡胚生产的有毒力活疫苗，通过种鸡饮水免疫有效防控子代发病；第二种是弱毒活疫苗，通过肌肉、皮下和刺翅对种鸡免疫有效控制子代发病。如果后备种鸡血清学抗体呈阳性反应，则不宜免疫接种。CIAV防控的两个关键阶段分别为避免雏鸡早期感染和种鸡产蛋期感染。充分利用有效母源抗体和日龄抗性这两个有利因素。

4.3监测与隔离

鉴于CIAV可以垂直传播导致后代雏鸡感染，必须实施严格的净化和防控措施。应定期开展鸡群抽样检测，一旦检出阳性个体应立即淘汰，并加强卫生管理，预防继发感染和经济损失[2]。引进种鸡时，必须选择专业正规的祖代鸡场。养殖场须强化进出管理制度，原则上禁止外来人员（特别是同行兽医、其他养殖者及畜禽交易从业人员）和车辆进入。确需进入者，须严格执行消毒程序，严防相关人员带入外来病原[3]。加强检测种鸡群中CIAV抗体水平，避免经垂直传播而导致子代禽体的疾病暴发，也可以检验疫苗免疫接种的效果。

■  结语：本研究通过流行病学调查和VP1基因测序分型，了解了CIAV在我国的流行规律和基因型分布特征。结果表明CIAV在国内鸡群中普遍存在，以基因A型感染为主，不同品种的鸡群感染率均较高，且呈逐年上升的趋势。因此，需要加强生物安全防范及疫苗研发力度，重点做好鸡群CIAV防控工作，以减少经济损失并保障家禽产业的健康发展。

作者简介：谢妍(1988一)，女，汉族，河北雄安新区，本科。
研究方向：家禽病原检测、抗体检测等方面。

参考文献：
[1]冯笑艳，胡明雪，林雨萌，刘长军，李凯，祁小乐，崔红玉，高立，王素艳，陈运通，王笑梅，张艳萍，高玉龙.鸡群中鸡传染性贫血病原与抗体检测及分离株VP1基因序列分析[J].中国家禽，2024,46 (02): 52-58.
[2]冯杰. CIAV流行病学与河南分离株的生物学特性研究[D]. 导师：王新卫. 河南农业大学, 2020.
[3]周云. 鸡传染性贫血病毒病的科学防控[J]. 当代畜牧, 2023,(10): 92-93.

来源：乾元浩之友