鸡H7N9亚型禽流感一免与二免抗体监测报告

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禽流感是由A型流感病毒引起鸡、鸭、火鸡、鹅等多种禽类感染发病的流行性传染病。病毒主要通过接触感染禽及其分泌物、排泄物、受污染的饲料、水、垫草等媒介，经呼吸道、消化道感染传播。目前仍无特效药物治疗，防控措施主要依靠预防接种。在广西，农户都有饲养鸡自食或出售的习惯，养殖分散、面广，禽流感防控主要依靠村兽医对所辖村屯于春、秋两季重大动物疫病预防接种时，免费入户为农户接种一次禽流感疫苗。村兽医技术水平参差不齐，常有免疫后抗体合格率及抗体效价不高等情况。笔者对村兽医为农村散养鸡进行一免和一免后第30天二次免疫，注射疫苗后第20天采样，进行禽流感病毒H7亚型（Re-4株）血凝抑制试验，经监测对比，二免比一免抗体合格率及抗体效价均有提高。

一、材料与方法

1、 材料

一免、二免血清，禽流感病毒H7亚型（Re-4)血凝抑制试验抗原（哈尔滨国生生物科技股份有限公司，批号：20240318），被检血清，禽流感病毒H7亚型（Re-4）血凝抑制试验阳性血清（哈尔滨国生生物科技股份有限公司，批号：20240522，有效期至：20260521），1%（体积分数）鲜SPF无特定病原）公鸡红细胞悬液，微量移液器，PBS缓冲液，水槽，96孔微量反应板，实验室温度：25 ℃。

2、方法

（1）试验设计

从广西农村散养鸡的实际免疫注射情况出发，试验选择在秋季重大动物疫病防控疫苗注射期间。试验鸡统一注射同一厂家同一批号重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N8 H5-Re-14株+H5N6 H5-Re13株+H7N9 H7-Re4株，生产日期：20240306，批号：24368031，厂家：辽宁益康生物股份有限公司）。根据广西秋季重大动物疫病防疫统一接种工作安排，在兴安县10个乡镇中各选取一个自然村，由各村兽医按疫苗使用说明给农户散养的鸡进行接种HPAI疫苗，2~5周龄皮下注射0.3 mL/只，5周龄以上肌注0.5 mL/只。一免30天后进行二次免疫，于一免、二免后第20天每个自然村随机抽样30只鸡采血1 mL/只，离心提取血清并编号（见表1）。

表1    样品来源及编号



（2）血凝抑制试验（微量法）

进行抗原血凝试验（HA）并依据试验结果配制4HAU的病毒抗原，在微量反应板的1～11孔加入0.025 mL PBS，第12孔加入0.05 mL PBS。取0.025 mL被检血清加入第1，充分混匀后吸0.025 mL于第2孔，依次2倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025 mL弃去。1孔～11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液0.025 mL，静置30 min。每孔加入0.025 mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液，震荡混匀，静置40 min。结果判定以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。只有阴性对照孔血清滴度不大于2 1og2，阳性对照孔血清与已知效价误差不超过1个滴度，试验结果有效。HI价小于或等于2 log2判定HI试验阴性；禽流感HI价等于3 log2为可疑，需重复试验；HI价大于或等于4 1og2为阳性。

二、试验数据与结果

实验阴性对照孔血清滴度小于2 log2，抗原对照孔（第11孔）完全凝集，阳性血清对照孔滴度为7log2，误差不超过1个滴度。红细胞对照孔（第12孔）红细胞沉于孔底，试验成立（见表2）。

表2    各样品禽流感H7血凝抑制试验数据



农村散养户的鸡经村兽医HPAI三价灭活苗一免后20天采样检测，样品H7平均HI滴度4.62 log2，平均抗体合格率73.3%。二免后样品平均HI滴度6.14 log2，平均抗体合格率93.3%。

三、讨论与结论

因各乡村兽医专业技术水平不同，对比样本来自兴安县10个不同乡镇，由所辖区村兽医进行同一厂家同一批号疫苗注射，样品的采集和禽流感H7血凝抑制（HI）试验由笔者完成，试验真实反映农村鸡禽流感免疫情况。农村散养鸡经疫苗免疫后，一免与二免对比结果：禽流感H7平均HI滴度二免比一免高1.52 log2，二免后比一免平均抗体合格率高20%。说明二免样品比一免样品HI滴度和抗体合格率均有大幅提高。

在农村，兽医待遇低，春、秋防到一个村一般只安排上门免疫一次，有部分村民因约定接种当日临时有事、新买回来新孵出的新增小鸡，没接到通知或其他原因出现漏免，应适当提高村防疫员防疫补助并要求对鸡禽流感进行二免，第一次漏免的农户有机会在第二次入村免疫时进行免疫接种，可大幅提高抗体效价、抗体合格率和免疫强度，从而提高农村散养户鸡对禽流感H7的免疫效果。

来源：中国禽业导刊，作者：刘根林1，黄鑫慧2
作者单位：1.兴安县动物疫病预防控制中心；2.柳州市动物疫病预防控制中心