禽流感（H5亚型）免疫程序的试验研究及推广

风雨阳光

为了有效预防和控制高致病禽流感H5亚型的发生和流行，2002－2003年我们与中国农业大学试验动物研究所病毒室合作，开展了疫苗免疫程序的实验室研究和技术推广工作。主要工作内容有：不同来源疫苗对鸡、鸭免疫效果的对比试验；鸡、鸭母源抗体及免后抗体消长规律；保护性抗体滴度的研究；实地禽流感发生和流行情况的调查等；在此基础上，制定了我市禽流感类免疫程序，并进行广泛推广免疫程序及抗体监测工作，使我市很快有效地控制了高致病性禽流感的发生，取得了很好效果。
一、不同来源疫苗的免疫效果的对比试验研究
㈠材料
1. SPF鸡：来自山东农科院SPF种鸡场
2. AA肉鸡：来自北京市某鸡场
3. 樱桃谷鸭：北京某商品代鸭场
4. H5亚型疫苗：分别来自哈尔滨兽医研究所，中牧集团，华南农业大学，山东1号，山东2号，北京1号，共七种灭活油佐剂 苗。
5. HI诊断试剂：哈尔滨兽医研究所研制
6. 隔离器：中国农业大学试验动物所，SPF鸡隔离器动物房
㈡、方法
1. SPF鸡免疫效果研究：10日龄SPF鸡70只，分成20只、20只、10只、10只、10只组。分养在不同隔离器内。按各自疫苗说明规定，分别免疫哈兽研疫苗、中牧集团苗山东1号、山东2号及对照组。在0天及免疫后7天14天23天采血，常规进行血清HI抗体检测，评定免疫效果。
2. AA肉鸡免疫效果研究：经由检测H5亚型抗体为0的17日龄肉鸡14只分成7只、7只两组，隔离器分开饲养，分别接种中牧集团、山东1号，接种后7天、14三天同上进行HI检测。
3. 18日龄樱桃谷鸭20只经由检查，H5亚型抗体＜2，普通鸭舍饲养，分成6只、6只、5只、3只四组，分别免疫中牧集团、哈兽研、山东1号及对照组每5天进行HI抗体监测。
4. 流行病学调查：根据北京畜牧兽医总站和中国农业大学试验动物所2001-2002年2年的流行病学调查结果，应用不同种H5亚型苗，以首免后21天HI抗体监测结果为依据，进行疫苗免疫效果的对比分析。
㈢结果
1．、SPF鸡免疫效果对比试验结果表1
           表1 SPF鸡不同疫苗免疫后HI抗体变化(log2)



上述结果表明：宰隔离器饲养的SPF鸡上，本次试验的各组疫苗免疫后14日龄基本可达免疫效果
2、肉鸡免疫效果对比试验结果表2



4、H5疫苗生产实际调查结果
经2002年-2003年上半年超过1400分血清样本的免后21天HI检测，可以得出如下结果：
哈兽研苗：≤24占60％、24-640％
山东2号：23-6均值25
华南农大：22-6均值24
北京1号、2号：结果同哈兽研苗
总之，首免后，全部实验鸡21-100天HI抗体离散度较大且很难达到2以上，大部分鸡群可测到免疫抗体，但在23以下的鸡只占比例10-50％不等。两次用苗，HI抗体通常可达214-6，最高可达28第三次接种后可达24.4，有良好的保护性。
二、保护性抗原滴度的测定
㈠、 材料
1、 SPF鸡：经免疫后测得不同滴度HI抗体
2、 鸭：直接从鸭场选不同HI抗体滴度的樱桃谷鸭
3、 商品蛋、肉鸡：由北京市某鸡场选取不同滴度HI抗体鸡
4、 H5亚型病毒：中国农业大学试验动物研究所病毒室保存，禽毒尿囊液其HA为29。
5、 隔离器：中国农业大学试验动物所，SPF鸡隔离器动物房。
㈡、 方法
不同HI抗体的SPF鸡、20-40日龄商品蛋、肉鸡分别按＜23、24、25、26分组饲养于隔离器中。成年鸭分别按20、22-3、24-5分组饲养。通过滴鼻点眼，肌肉注射等不同方式攻毒，攻毒量0.2-0.5ml/只不等。攻毒后每日观察结果，并对死亡鸡进行剖检，攻毒8天后全部剖杀。
1、 SPF鸡
试验组：20只，HI抗体为26-8。肌肉注射、滴鼻点眼攻毒10只，每只0.5ml
对照组：4只，HI抗体为20，肌肉注射，滴鼻点眼攻毒2只，每只0.2ml
2、 商品蛋鸡
210日龄蛋鸡组：10只。HI为2026
420日龄蛋鸡组：13只。HI抗体为20-25，其中23以下鸡10只，HI＝2的3只。
对照组：210日龄鸡420日龄SPF鸡各4只，HI为20
3、 商品雏鸡
16日龄商品雏鸡3组，每组取2只对照，7-8只攻毒，分别命名为1-9组，2-8组、2-9组，其父母代种鸡日龄分别为529、324、270日龄，全饲养于隔离器内，16日龄测得HI抗体效价后攻毒，每只滴鼻点眼0.2ml，2日后部分鸡剖杀，部分鸡再肌注0.2ml首次攻毒9天后剖杀。
4、 肉鸡
14只，1只HI抗体为20只，其余均为26-8。经滴鼻点眼攻毒：每鸡0.5ml，攻毒后4天剖杀。
5、 樱桃谷鸭
11只，HI抗体为21-53只、22-3的3只，20的5只，分为3组隔离饲养，攻毒方法为滴鼻点眼0.4ml，肌注0.2ml。
㈢结果
1、 SPF鸡
SPF鸡肌注对照组：攻毒后24小时鸡发呆，萎缩不动，36-48小时先后死去，剖检可见，以全身出血性变换为主，典型H5亚型禽流感病变。攻毒后48-72小时SPF鸡滴鼻点眼
对照组：鸡萎缩不动，沉郁，72-96h死亡，剖检可见典型病变。
SPF鸡试验组：攻毒后，HI＞2614只，HI＝25，3只，HI＝24，3只，经肌肉注射和滴鼻点眼攻毒，各试验组均未见死亡，HI＝24抗体组可见肝脏有少量出血点。
2、 商品蛋鸡
210日龄蛋鸡组：每只鸡滴鼻点眼0.2ML，48H后出现精神委顿鸡7只，48-420H共有10只鸡发生不同程度闭目，甩头，精神委顿，至第7天供试鸡全部恢复正常。剖检可见，210日龄组，喉头5只，其他部位出血6只，肝脏颜色变浅或淤血，出血6只。
对照SPF组：4只SPF鸡全部死亡，呈典型病变。
420日龄组：喉头出血6只，其他部位出血7只，肝脏颜色变浅或淤血、出血8之。
对照SPF组：4只SPF鸡全部死亡，呈典型病变。
经复合，无论210组还是420组蛋鸡，有病理变化的鸡绝大多数为HI抗体≤2的鸡只。
3、 商品雏鸡
4、 16日龄雏鸡3组，1-9组，2-8组，2-9组，其父母代种鸡日龄分别为529日龄，324日龄和270日龄。攻毒9天后抗体变化及剖杀结果如下表4:
表4  攻毒前后HI抗体变化（LOG2）




表5  攻毒后9天剖检情况







4、 肉鸡
HI为20鸡，腿部肌肉盲肠扁桃体、肝脏、泄殖腔及十二指肠有出血点。其余鸡基本正常。
5、 樱桃谷鸭
攻毒后，出个别见拉稀和精神稍差外，多数鸭均未见明显变化。
三、母源抗体消长规律研究
㈠、 材料与方法
1、 某鸡场不同日龄种鸡血清20份，其日龄分别为529、324、270，编号分别为1-9、2-8、2-9，测其HI效价。3组鸡均已免疫H5亚型苗4次。最后一次免疫为双价苗(H9-H5)采血时间距最后一次免疫分别为64天，104天，63天。
2、 1日龄肉雏鸡90只，来自上述种鸡采血当日入孵所产雏鸡，每个日龄30只。立即入隔离期饲养，1日龄、8日龄、15日龄，随机采血10只测其HI效价。
3、 商品代樱桃谷鸭10只，1日龄进入隔离器饲养，分别于1日龄、5日龄、10日龄、15日龄、18日龄采血测HI效价。
4、 2002年北京畜牧兽医总站和中国农业大学试验动物研究所病毒室对某鸡场的H5效价跟踪调查资料。

风雨阳光

㈡、 结果
1、 父母代及其1日龄雏鸡母源抗体HI效价的关系及变化间见表6



2、 雏鸡母源JI抗体消长规律见表7

4、 流行血清HI抗体追踪调查10个场检测1000份血清，其HI抗体多数都可测得，并在26以上，其HI抗体效价的下降至少2个月不会下降，有些场可维持更长时间。
四、小结与讨论
（一） 综上所述，雏鸡抗体效价的下降到HI≤24时，很容易被感染。
（二） 推荐的H5亚型禽流感苗的免疫程序为7~10日龄做第一次，30日龄左右做第二次，开产前（20周左右）追加一次，这是以选择质量可靠的疫苗为前提的。
（三） 保护性抗体水平达到HI≥26是安全的。实际上，当抗体滴度≥24即不会实验发病。
（四） 有时即使母源抗体下降，如16日龄攻毒也不会有太明显的危害，因为此时抗体还是逐步下降阶段，尚未消失，攻毒实验以证实产生高抗体可能很快。但临床用不良疫苗进行免疫反而效果更不好，常导致育成鸡及以后的再感染发病。
（五） 提倡进行定期的HI抗体监测，尤其是在初免前、二免前、二免后21～30天，用监测结果进行免疫程序的修正才是正确的免疫。
（六） 根据高致病性禽流感流行特点，经过实验室免疫攻毒试验和部分养殖场推广观察，我们制定出以下试验性免疫程序在全市应用推广：10～14日龄首免；28～30日龄二免；18周龄三免。在春秋防期间，全市对本辖区的家禽进行一次禽流感H5亚型疫苗免疫情况进行检测，共检禽流感H5亚型5万羽份；其中H5亚型免疫抗体均在1：32到1：512之间，说明免疫效果比较确实。通过推广以上免疫接种程序，我市很好的控制了禽流感，规模化鸡场没有禽流感的发生和流行。

老蒋

太专业了，没看明白

兵王一代

过程没看明白，结果知道了。多谢

流川风

引用第3楼兵王一代于2010-01-06 20:19发表的  :
过程没看明白，结果知道了。多谢