【分享】从外分泌体角度探讨禽偏肺病毒致病机制

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禽偏肺病毒感染Vero细胞的外泌体蛋白质组学分析

王  丹1*，侯  磊2*，宋江伟1，王  菁1，全  荣1**，刘  爵2**
（1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所，畜禽疫病防控技术北京市重点实验室，北京100097；2.扬州大学兽医学院，江苏扬州225009）
基金项目
北京市农林科学院科技创新能力建设专项（KJCX201914）
· 作  者·
第一作者：
王丹（1986-），女，博士，助理研究员，主要从事动物病毒病研究，E-mail：wangdananne@163.com；
侯磊（1982-），男，博士，副教授，主要从事动物病毒病研究，E-mail：hlbj09@163.com
通讯作者：
全荣（1986-），女，博士，副研究员，主要从事动物病毒病研究，E-mail：qrcau@126.com；
刘爵（1966-），男，博士，教授，主要从事动物病毒病研究，E-mail：liujue@263.net

目 的

外泌体是直径约30~150 nm的细胞外囊泡，具有脂质双分子层结构，呈现“茶托状”。外泌体广泛存在于各种体液（血液、尿液、乳汁等）和细胞培养物中，携带蛋白质、脂类、核酸等生物活性物质，参与细胞间通讯，病毒可通过外泌体调节宿主的免疫应答。C亚型禽偏肺病毒（Avian metapneumovirus，aMPV）最早出现于美国，随后在法国、韩国、中国等国家和地区相继出现。2012年，中国首次分离到aMPV/C，经适应性传代培养后，获得能够引起细胞病变的分离株。目前从细胞外泌体角度评估aMPV/C感染对宿主的影响未见报道。本试验采用蛋白质组学方法，首次分析了aMPV/C感染后Vero细胞外泌体中蛋白质组分的变化，为进一步了解aMPV/C致病机制提供参考。

方 法

试验收集感染aMPV/C JC株后48 h的Vero细胞培养液，采用超速离心法分离外泌体。经透射电镜观察、纳米颗粒跟踪技术分析、蛋白质印迹法（Western blot）鉴定后，对外泌体进行示踪试验；利用非标记定量液相色谱-质谱联用（Lable-free LC-MS/MS）技术和生物信息学方法分析外泌体的蛋白质组成和功能。

结 果

分离的外泌体为杯状双层膜囊泡，具有特征性膜蛋白CD63、CD81、Tsg101，能够进入未感染的Vero细胞；aMPV/C感染组中170个蛋白表达上调，11个蛋白表达下调；差异表达蛋白大多来源于细胞器和细胞膜，主要参与细胞过程、生物调节、代谢过程等生物学过程，执行受体结合、酶催化、分子调节等功能，集中于内吞作用、病毒感染、细胞衰老等通路。

结 论

aMPV/C感染使Vero细胞外泌体蛋白质组分发生明显变化，差异表达蛋白主要集中于细胞膜信号传导通路、病毒感染相关信号通路、细胞增殖相关信号通路，被aMPV/C感染的Vero细胞能以外泌体形式向未感染细胞进行物质或信息传递。

引用本文
王丹，侯磊，宋江伟，等. 禽偏肺病毒感染Vero细胞的外泌体蛋白质组学分析[J].中国家禽，2022，44（10）：24-30. doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2022.10.005.

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