H120和Ma5疫苗对QX毒株有效果吗？

共享精神 · 发表于 2022-7-25 13:47:00

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实验验证结果情况说明：

传染性支气管炎（IB）是一种传染性很强的禽类病原体，它影响所有日龄鸡的呼吸道、肠道、生殖系统和肾脏。识别出许多不同血清型的 IB 病毒 (IBV)，它们会导致不同的临床表现。根据抗原性差异，不同血清型的病毒不具有交叉保护作用。马萨诸塞州血清型诱导针对其他血清型的最佳交叉保护。

最近，在伊朗发现了 IBV QX 毒株。如果 QX 菌株发生在生命周期的早期，它会对输卵管造成永久性损伤，并且是蛋鸡和种鸡群中的一个重要因素。

在这项研究中，我们比较了 H120 和 Ma5 疫苗与 QX 毒株对商业雏鸡早期攻击的保护作用。一天大的商业雏鸡被分成六组。第 1 组和第 2 组是未接种组。第 3 组和第 5 组接种 H120 疫苗（滴眼剂），第 4 组和第 6 组在第 6 天（接种后 5 天）接种 Ma5（滴眼剂）。第 2、3 和 4 组用 QX 菌株 (10^4 EID50）。纤毛停滞测试、组织病理学和定量实时 RT-PCR 在 11 天大时进行。

结果表明，H120和Ma5均不能对QX早期攻击产生适当的交叉保护作用，但接种组的病毒载量和不良病理记录均低于未接种组。可以得出结论，在小鸡出生后的第一天接种疫苗并不能完全预防 IBV QX 毒株，但可以减少接种鸡的病毒载量和病理损伤。建议对一天大的小鸡应用其他形式的疫苗接种和不同的基因型。

如果 QX IBV 在前 10 天内感染鸡，对输卵管有永久性影响并导致假母鸡。

传染性支气管炎病毒（IBV）是家禽最相关的传染病之一，造成严重的经济损失，主要与呼吸系统和生殖系统综合症、生产性能下降和死亡率增加有关。即使生物安全和良好的管理实践是疾病控制的基础，广泛的疫苗接种对于控制疾病也是必不可少的。

IBV 属于巢状病毒目、冠状病毒科和伽玛冠状病毒属。世界范围内报告了不同的血清型，并且不断发现新的变异血清型。

1997 年 9 月，中国青岛的鸡群发生了一次以 25-70 日龄鸡的胃肿胀（前脑室炎）、腹泻和体重下降为主要特征的疾病暴发（QX 暴发）。根据主要分析，在伊朗分离的 IBV 毒株的基因分型分为 7 个不同的系统发育组（Mass、793/B like IS/1494 like、IS/720-like、QX-like、IR-1 和 IR-2） S1 基因的 HVR 。Bozorgmehri-Fard 等人。（2014 年）已经证明伊朗商业鸡群中存在 QX 病毒，在这次爆发之后，我们在伊朗有许多假层。如果 QX 在 10 天前进入鸡群，它会对输卵管和盲层造成永久性影响。由于 QX 疫苗没有在伊朗鸡群中使用的许可，只有马萨诸塞州和 793/B 之类的疫苗正在使用。然而，如果 QX 在 10 天前进入鸡群，尚未进行交叉保护研究，这是怎么回事？该研究的目的是比较马萨诸塞州的两种类型的商业禽传染性支气管炎 (IB) 疫苗，以在商业鸡中对 IBV QX 毒株进行早期攻击。

从商业孵化场获得具有 IBV 母源抗体 (MDA) 的 90 日龄商业肉鸡。小鸡被关在一个带有负压过滤空气的隔离单元中。1 日龄的商业雏鸡被分成六组。小鸡被分成六组，每组 15 只鸡（表 1）。第 1 组和第 2 组是未接种组。第 3 组和第 5 组接种 H120 疫苗（滴眼剂），第 4 组和第 6 组在第 6 天（接种后 5 天）接种 Ma5（滴眼剂）。在第 6 天（接种后 5 天），第 2、3 和 4 组用 QX 样基因型（10^ 4 EID50)。在11日龄纤毛停滞试验中，进行了组织病理学和定量实时RT-PCR。QX 样 IBV 分离物（第 5 次卵子传代）选自德黑兰大学兽医学院病毒库。挑战病毒的S1序列已提交给NCBI（登录号：KT583570.1）。使用 ELISA (IDEXX) 测量攻击前测试的实验小鸡的抗体水平。攻击五天后，对每只鸡的 10 个气管环外植体进行纤毛抑制试验，检查气管的保护水平。取出后立即将气管储存在 DMEM 中。纤毛停滞水平由低倍显微镜确定，评分如下：0 = 所有纤毛跳动，1 = 75% 跳动，2 = 50% 跳动，3 = 25% 跳动，4 = 无跳动（100% 纤毛停滞）。使用供应商推荐的 Cinna Pure RNA 提取试剂盒（Sinaclone，Iran）从气管样品中分离病毒 RNA。使用 RevertAid 第一链 cDNA 合成试剂盒（Thermo Scientific，加拿大）合成 cDNA。为了扩增 IBV 基因组 5'-UTR 内的保守序列和 28 s 核糖体-RNA 作为参考基因，使用了实时 PCR 分析。下游引物 IBV5'GU391 (5'-GCTTTTGAGCCTAGCGTT-3', nt 391-408)、上游引物 IBV5'GL533 (5'GCCATGTTGTCACTGTCTATTG-3', nt 512-533) 和 Taqman?双标记探针 IBV5 'G (5'-FAMCACCACCAGAACCTGTCACCTC-BHQ1-3', nt 473-494) 用于扩增 5'-UTR 的 143-bp 片段。为了扩增 28 s rRNA 基因的 61-bp 片段，我们使用了正向引物 (5'-GGCGAAGCCAGAGGAAACT-3')、反向引物 (5'-GACGACCGATTTGCACGTC-3')和探针(FAM-AGGACCGCTACGGACCTCCACCA-TAMRA) 。20 μl 实时 PCR 反应包含 2 μl AMS 10X PCR 缓冲液（Sinaclon，伊朗）、1 μl dNTP mix（Sinaclon，伊朗）、0.8 μl Mgcl2 (50 mM)（Sinaclon，伊朗）、0.2 μl CinnaGen Taq DNA 聚合酶（Sinaclon，伊朗），5 μl 模板 cDNA，引物至终浓度为 0.1 μM，探针至终浓度为 0.1 μM 和无核酸酶水。反应在 QIAGEN Rotor-Gene Q (Corbett Rotor-Gene 6000) (USA, CA) 中进行。PCR 循环参数为 95 °C 2 分钟，然后是 95 °C 15 秒和 60 °C 1 分钟的 40 个循环。由于无法获得用于 QX 检测的特异性引物，并且无法区分攻击型和质量型病毒，因此我们使用第 5 组和第 6 组（接种组和未攻击组）病毒载量对攻击病毒载量进行标准化。取自小鸡气管的组织样本并固定在缓冲福尔马林 (10%) 中，处理、切片并用苏木精和伊红 (H & E) 染色以进行组织病理学评估。使用 SPSS 12.1 软件评估和比较各组之间的气管病理评分和纤毛停滞情况，采用 Mann-Whitney 检验。显着性水平被认为是0.02。最后，使用显着性水平为 0.05 的单因素方差分析来比较病毒载量。表 1 商品鸡 IBV QX 毒株早期攻击各组的特征，包括（纤毛停滞评分；保护；病毒载量平均值（Log10））

根据ELISA试剂盒的血清学结果，鸡的抗体滴度约为42,150，cv 32%，表明抗体滴度均一。接种组和对照组之间的气管病毒载量存在显着差异（ANOVA 测试）（表 1）。尽管 H120 接种组的病毒载量低于 Ma5 接种组，但差异不显着（表 1）。根据病理性气管病变评分，接种组病变低于对照组。H120接种组由于其效率存在显着差异。两组气管纤毛停滞评分无显着差异（表 1）。本次试验中，H120接种组的保护率为74%，另一组为71%，两者无差异（表 1）。

如果 QX IBV 在前 10 天内感染鸡，对输卵管有永久性影响并导致假母鸡。所有交叉保护研究均根据鸡在接种后 14-21 天后肱骨抗体水平不足时的评估进行。商业 793/B 血清型疫苗可从多家公司获得，包括 4/91 (Intervet)、IB88 (Merial)、Ibird (CEVA Sante animale)。此外，一些公司已经生产了一些 QX 型 IBV 疫苗（L1148（Zeotis）和 D388（Intervet））。然而，主要问题是目前的疫苗可以预防 QX IBV 循环株还是需要 QX 特异性疫苗？萨鲁恩等人。做了一项关于活 IBV 程序对像 IBV 一样的 QX 感染的功效的研究。实验组分为5组。第 1 组肉鸡在 1 日龄时给予 Poulvac IB QX-like。第 2 组肉鸡在 1 日龄和 14 日龄时给予 Poulvac IB QX-like。第 3 组肉鸡分别在 1 日龄和 14 日龄时给予 Nobilis IB H120 和 Poulvac IB QX-like。第 4 组肉鸡分别在 1 日龄和 14 日龄时给予 Nobilis IB H120 和 Nobilis IB 4-91。第5组作为阳性对照组。所有组均接受 IBV THA80151 攻击。尽管在本研究中使用了不同的疫苗接种程序，但所有接种疫苗的组在用活 IB QX 样病毒攻击后都表现出对损伤的保护作用。疫苗能够减少气管啰音，与阳性对照组相比，接种组的纤毛活动和组织学病变评分，但接种计划不能预防感染，因为IB QX样病毒仍然从一些感染的器官中重新分离出来。具有异源毒株的加强疫苗能够增加对 IBV QX 样攻击的交叉保护。在 De Wit 等人对商业肉种鸡进行的一项研究中，据报道，Mass（第 0 天）+793/B（第 14 天）疫苗组合在用 D388（QX 毒株）攻击 5 天后的纤毛抑制试验中产生了 %51 的保护作用) 在第 28 天，而在攻击后第 7 天保护提高到 %74 [ 7]。Hawk和Jones研究了完全冲洗气管后IBV诱导的膜性免疫反应。提示气管液IgA水平在6 h内较高，9 h后逐渐下降，最后明显下降。Fredrick 通过在第 1 天、第 7 天和第 14 天接种疫苗研究了对 IBV 的保护水平，并发现在第 1 天接种疫苗的小鸡的血清和泪液分泌 IgA 和 IgG 水平低于第 7 天接种疫苗诱导的水平尤其是 14 天大的小鸡，因为免疫系统不成熟。因此，接种 1 天的小鸡上皮细胞和杯状细胞的炎症和清除水平高于 7 天和 4 天接种 IB 野毒后接种的小鸡。据此，由于免疫系统的不成熟和 IgY 母体抗体的可用性，建议在孵化后 7 天接种疫苗。此外，De Wit 的研究表明，接种 IB 的 1 日龄小鸡的 IgM 抗体水平低于年龄较大的小鸡。Faez (2015) 研究了 SPF 雏鸡在接种 ND、IB 和 aMPV 的 3 种活疫苗后的免疫反应和反应。结果表明，所有组的所有 HI 抗体滴度都具有保护性，并且当与其他疫苗一起施用时，aMPV 疫苗抑制了 aMPV ELISA 滴度。与未接种组相比，接种组气管样本中含有 IgA 的 CD4+、CD8+ 和 B 细胞单次或联合接种 ND、IB 和 aMPV 疫苗诱导的细胞和膜免疫显着增加。接种组之间差异不显着。同时接种 ND、IB 和 aMPS 活疫苗对 aMPV 和 IBV 的诱导保护没有影响。在 Chhabra 和 Ganapathy 关于预测 IBV 强度和趋向性的宿主反应的研究中，表明与 M41 菌株相比，IS-885 肾病和 QX 菌株在以色列首次发现，在肾细胞培养基中诱导更多的细胞凋亡。

然而，M41 菌株在气管组织培养基中比肾病 IS-885 和 QX 菌株可诱导更多的细胞凋亡。还表明，增强先天免疫系统的反应导致各种 IBV 毒株的组织趋向性。Okino 对一日龄小鸡接种各种剂量的减毒活疫苗后针对 IBV 的细胞和体液免疫反应的研究表明了这一点。结果显示，接种疫苗后 5 天，泪液和气管中的 IgG 和 IgA 抗体水平显着增加（连同表达的细胞免疫基因，如干扰素、CD8+淋巴细胞 T 标志物和同源颗粒酶 A）。然而，当疫苗没有以全剂量给药时，会记录到不完全的免疫反应。本研究表明，在膜中全剂量 IB 疫苗接种后诱导的 IgA、IgG 和 CD8+T 细胞反应与抗病毒保护性免疫密切相关。这项研究强调了疫苗的全剂量，因为与以前的研究一样。在 Faez 和 Ganapathy 的研究中，当一组肉鸡在 1 日龄接种 H120 疫苗，然后在 14 日龄接种 CR88 疫苗时，对中东 885 和 1494 中东 IBV 毒株的纤毛抑制率分别为 80 和 60。然而，当1日龄接种H120和CR88疫苗，14日龄接种CR88疫苗时，中东885和1494 IBV毒株对气管纤毛停滞的保护率超过80%，而100%的保护率则为100%。即使疫苗标准株的 S1 基因与受攻击的野生变体之间存在 19-21% 的遗传差异，在出现临床体征和气管和肾脏病变时也注意到了这一点。 Kahya 的研究表明，对 1 日龄小鸡接种一次 H120 疫苗不能使它们免疫中东 885 和 1494 IBV 毒株，从而导致发现肾脏和呼吸道病变。Jackwood 还指出，制作这两种 IBV 变种的疫苗既费时又昂贵。酷等人。表明仅用一种血清型进行疫苗接种不能诱导对异源 IBV 毒株的完全免疫，但可以使用各种 IBV 活疫苗株的组合来实现更高的免疫力，原型，针对急性异源 IBV 变体。尚未进行任何研究来研究早期挑战中的局部免疫。在常规交叉保护方法中，小鸡在最后一次 IB 疫苗接种后 3 周在表达抗体时受到攻击，但这可能不是适合田间条件的试验。研究结果表明，如果田间 IBV 在雏鸡出生后的第一周感染了雏鸡，并且雏鸡在一天大时使用 H120 或马萨诸塞州 IB 疫苗接种，雏鸡无法达到完全保护水平，但病毒载量可以减少病理损害，从而对 IBV 产生相对保护。建议遵循与 793/B 或 793/B+ Mass 疫苗相同的研究计划，并为一日龄雏鸡接种疫苗，以评估对 QX 株和其他常见 IBV 基因型的保护作用。

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