科学客观的探讨鸡肝破裂血水综合征病

张彭蒲南 · 发表于 2021-5-16 12:13:02

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科学客观的探讨鸡肝破裂血水综合征病

刘　东刘红祥等鸡保姆 20210515

近年来，我国养鸡业出现了一种以鸡肝脏肿大出血、质地变脆、腹腔血水为主要特征的疾病，暂命名为鸡肝破裂血水综合征。临床发病所涉品种宽泛，白羽肉种鸡、商品蛋鸡、蛋种鸡等均有发病，但黄羽系列未见发病。在所有种鸡发病案例中，均为母系，父系正常；同一鸡场不同品种，在饲养条件相同情况下，有的品种发病，有的正常；发病阶段集中在育成中后期（7-20周）、产蛋上升期（20-35周），个别高峰期后也偶有发病；发病无地域差别，也无明显季节性，全年均可发病，其中在秋冬或春秋季节因应激反应，发病率相对较高；高强度免疫（特别是菌苗免疫）、产前加光等应激因素等可加重或促进发病，对养殖生产造成较大损失。

临床发病鸡肝破裂图片

该病在临床上不同于以往引起鸡肝脏病变的疾病，如禽戊型肝炎（HE）、脂肪肝综合征（FLS）、禽白血病（AL）、禽腺病毒病和霉菌毒素毒等。近期，国内学者关于该病的发病原因也做了大量工作，对可引发鸡肝脏问题的传染性疫病进行了初步筛查，认为该病主要由禽戊型肝炎病毒或禽白血病病毒引起，但样本数量和调查范围仅局限于个别地区的单一品种，而缺乏系统全面的检测分析。
本研究通过对11省区市的 9 种品系鸡共计458 份临床肝破裂样本进行检测分析，发现鸡肝破裂血水综合征与鸡体本身存在遗传性自身免疫性缺陷因素有关，其他如病原、应激等因素可进一步加重病情，但非该病的直接原因。本研究为该病的有效防控和进一步深入研究指明了方向。

1、材料 2、方法（略）
3　结果与分析
3.1　病原分离
3.1.1　细菌分离　
11 省区市送检的 458 份肝脏样本细菌分离结果（表4）显示，检测到大肠杆菌14份，占 2.8%；沙门氏菌 7 份，占 1.5%；弯曲杆菌 0 份。
结果表明，发生肝破裂血水综合征样本中的细菌以大肠杆菌为主，零星有沙门氏菌，但分离率均较低，分离检测没有共性，提示肝破裂血水综合征的发生与细菌感染无明显相关性。
3.1.2　病毒分离　选择典型代表性样本 33 份，采用鸡胚和细胞进行病毒分离。结果显示，F1—F3 代鸡胚无死亡、胚体无变化，F1—F3 代细胞无明显病变；采用PCR 方法检测 FAd V、CIAV、MDV，结果均为阴性；采用 RT-PCR 方法检测HEV，结果为阴性；采用 ELISA 方法检测 ALV P27 蛋白，结果为阴性。
结果表明，可排除 HEV、FAd V、CIAV、MDV、ALV 为肝破裂血水综合征原发病原的可能性。
3.2　分子生物学检测
3.2.1　PCR、RT-PCR
　对11省区市 458 份样本采用 PCR 和 RT-PCR 方法检测送检样本。结果（表5）显示，检测到 FAd V 3 份，占 0.66%；HEV 1 份，占 0.22%；CIAV、MDV、ALV 均为0份。结果表明，虽然极少样品有 FAd V、HEV 等核酸阳性检出，但其感染与肝破裂血水综合征临床表征不一致，且检测结果不具有共性，故可排除原发病原的可能性。
3.2.2　Random PCR
　分别按照 DNA 和 RNA病毒两种途径进行 Random PCR，结果发现，经1.0% 琼脂糖凝胶电泳后，按照 RNA 病毒途径的产物电泳未见清晰条带，按照 DNA 病毒途径的产物电泳在 200-2 000 bp 之间有明显核酸条带（图 2），提示原始病料中不存在核酸类型为 RNA 的病毒，可能有核酸类型为 DNA 的病毒。将按照 DNA 病毒途径扩增出的 PCR 产物酶切鉴定，挑选 200 个阳性克隆测序，经 Blast 分析比对，发现所有插入片段均为鸡的基因，即原始病料中不存在 DNA 病毒。检测结果表明疑似发生肝破裂血水综合征的样本中不存在 RNA、DNA 病毒。
3.3　病理学诊断
选取 99 份经福尔马林固定的组织样本，进行病理切片观察。结果（表 6、图3）显示，疑似髓样白血病/白血病病理变化 0 份；疑似细菌造成的坏死性肝炎 4 份，占比 4.04%；疑似网状内皮细胞增生病并发血管瘤病理变化 2 份，占比 2.02%；其余多数样本均有淀粉样渗出，未发现明显病理变化，占比 93.94%。
结果表明，送检的肝破裂血水综合征样本多数以淀粉样变为主，零星有细菌感染，与病原检测结果具有高度一致性，可进一步排除病毒感染的可能性。
3.4　内毒素检测
检测结果（表 7）显示，15 份样本内毒素超标，占比 3.3%。肝脏破裂样本中采集血水、肝脏、个别注射部位肌肉等，通过内毒素含量对比检测发现没有显著共性联系。此外内毒素含量偏高的样本，肝脏检测显示有细菌感染，故内毒素含量偏高，但与造成肝脏破裂出血病因没有直接关联。
3.5　动物试验
SPF鸡腹腔注射后观察 12 d，发现鸡群精神、采食正常，鸡群无死亡。人为致死鸡只后解剖观察发现，攻毒组鸡只内脏无特征表现，个别肝脏出现片状出血斑，颜色暗红，有区域性淤血，对照组鸡只显示肝脏质地良好，颜色均匀一致，两组差异不明显（图 4）。采用 PCR 和 RT-PCR 方法对两组肝脏样本分别进行 ALV、FADV、HEV 检测，结果均为阴性，不能复制肝破裂血水的临床表征，进一步说明 ALV、FADV、HEV 等病原不是造成肝破裂血水综合征的原发病原。
3.6　流行病学调查
3.6.1　发病品种　白羽肉种鸡、商品蛋鸡、蛋种鸡等均有发病，但黄羽系列未见发病。白羽肉种鸡以 A、B 品种发病较重，D 品种发病轻，C 品种未发病；蛋鸡系列 A、B、C 品种发病较重，E 品种发病轻，D 品种正常。在所有种鸡发病案例中，均为母系发病，父系正常。
3.6.2　高发日龄　发病阶段集中在育成中后期（7-20 周）、产蛋上升期（20-35 周），个别高峰期后也偶有发病。
3.6.3　发病区域及季节　发病无地域差别；该病无明显季节性，全年均可发病，其中在秋冬或春秋季节因应激反应，发病率相对较高。
3.6.4　其他情况　高强度免疫（特别是菌苗免疫）、产前加光等应激因素可加重或促进发病。
4　讨论
国外很早就有关于鸡肝脏问题的报道，Nesheim 等在 1970 年前后通过对 39 例鸡脂肪肝出血综合征（FLHS）病鸡进行遗传分析，发现11 只母鸡是同一公鸡的后代，证明了该病具有很强的遗传相关性。
Carlich 等对在相同条件下饲养的鸡群随机取样并进行脂肪肝含量分析发现，脂肪肝含量因鸡的品种、品系不同而有很大差异。
以上研究表明，FLHS 具有遗传性。
本研究通过流行病学调查分析，发现鸡肝破裂血水综合征发生区域广、损失大，与特定品种和品系存在相关性，同一鸡场饲养不同品种，在条件相同的情况下，有的品种发病，有的不发病。另外与品系也有相关性，同一来源品种出现母系发病，父系正常，祖代也出现肝破裂情况，多表现在 D 系慢羽，其他 A、B、C正常，D 系快羽也轻，反映到下游父母代具有一致相关性。通过上游了解与种源换羽无相关性，也不存在四系配套混乱情况。
应激因素可以加重鸡的肝脏疾病相关研究表明：油苗免疫期尤其是细菌苗的免疫对鸡体刺激非常大，常常引起肝硬化、出血等临床表现；在流行病学调查过程中发现，一些肝破裂出血病例鸡群往往在免疫灭活苗后发生，其严重程度要比未免疫鸡群高，死亡率上升明显。
相关研究表明，HEV、空肠弯曲杆菌、ALV、FAd V 等病原可以引起鸡肝脏的一系列病理变化。本研究中部分样品零星检测到 HEV、FADV等相关病原，但病原检测不具有一致性，而且通过临床诊断与肝破裂出血没有直接相关性；部分样品检测到大肠杆菌、沙门氏菌等细菌，通过临床判断为应激条件下激发所致，与肝破裂出血没有直接相关性；内毒素检测有少部分超标，且超标样品临床有细菌感染，内毒素与肝破裂出血没有直接相关性；病理诊断显示部分样品有禽网状内皮组织增生症病变，但核酸检测和病毒培养均未有检出。另外在病理切片观察中，93.94% 样本均有淀粉样和纤维样渗出，提示鸡体出现炎性反应过度。
临床发生肝破裂血水综合征，首先以肉种鸡特定品种为主，逐渐过渡到蛋鸡品系，鸡流行范围广、持续时间长、所涉品种多，全国不同实验室广泛采样、利用不同检测方法等均无特定病原检出，提示造成此次肝破裂血水综合征的原发病原可能为非传染性因素；疫病流行期间国内种源相对匮乏且疫苗免疫频次繁多，加速了肝破裂血水临床表征出现，造成此疫病为传染性病原的假象。
根据实验室病原检测结果并结合流行病学调查，初步认为是机体本身存在遗传性自身免疫性疾病，造成机体反应过度，出现细胞因子风暴综合征导致鸡肝脏淀粉样出血。该病主要由外源性物质（病原性与物理性病因）致机体发生持续性慢性炎症，从而导致过多酶解形成的错误折叠蛋白链凝集成不溶性纤丝。这种分子构成使淀粉样蛋白极度不溶，并几乎可完全抵抗蛋白酶作用，因而淀粉样蛋白一旦在细胞和组织中沉积就几乎不可能清除，淀粉样浸润最后导致细胞消亡和组织破坏、死亡，最后使得肝细胞产生淀粉样蛋白，肝脏堆积而使肝脏形态与功能受损，肝脏内堆积的淀粉样蛋白纤维原一旦形成很难被消除，从而导致肝脏破裂出血。
目前对该病尚无有效解决方案最重要的方式是引种时选择优良品种，其次是减少应激。特别要加强疫苗免疫操作的规范性，尤其注意油乳剂疫苗的预温和摇匀；科学设计免疫程序，避免大剂量、多种疫苗同时或免疫间隔过短；最后注意开产前减少多重应激，加光时避免其他应激因素等。

本文原题目：鸡肝破裂血水综合征病因初探
致敬本文作者：
刘　东，刘红祥，李　彬，王群义，刘　平，刘丰波，任衍倍，张　翔，张玉杰，栾栋祖，宋姗姗，杜元钊。

张彭蒲南 · 发表于 2021-5-16 12:22:13

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张彭蒲南 · 发表于 2021-5-16 12:22:58

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张彭蒲南 · 发表于 2021-5-16 12:47:40

关于肝破裂出血，最近炒的比较热，脂肪肝的可能性比较少，大家都集中于戊肝、弧菌性肝炎、白血病等与临床相近似的疾病，这个文章一出，有实验室PCR试验、回归试验、病理组织学图片，我相信这是目前最权威的，希望给各位网友以参考，最起码在以后的临床中重视实验室的数据和临床相结合，过去一把剪刀打天下的时代已经过去了。