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柔嘉

血清学和组织病理学检测的方法

常用的血清学检验方法包括：

平板凝集法(SPA)：优点是快速、易操作、敏感性高，缺点是特异性低；

琼脂扩散法(AGP)：优点是容易操作，但缺点是敏感性和特异性都低；

血凝抑制法(HI)：优点是快速、容易操作、敏感性和特异性好，缺点是只适用于有血凝性的病毒；

酶标法(ELISA)：优点是快速、敏感性高、容易操作，缺点是需要设备和试剂盒，检测成本高；

病毒中和法(VN)：检测中和抗体，敏感性好，缺点是检测时间长，操作要求高。

前三种检测方法的检测成本都相对较低。但琼扩和SPA的检测受抗原质量影响较大，容易出现一些假阳性和假阴性。

一、样品要求

• 采样时间点：对于免疫抗体监测，通常在灭活苗免疫后3-4周进行采样；对于发病鸡群的疾病诊断，通常要在发病初期和恢复期进行双样本的采样检测(恢复期：通常发病2周以上)；
• 采样点分布要均匀，通常可采取对角线式在鸡舍对称的几个方位随机抓取鸡只采血。要针对大群鸡随机采样，不要仅采发病鸡只的血样；
• 样品数量要有一定的代表性，通常一个鸡群血清有效样本在15-30个之间；
• 血清量充足。ELISA每个检测项目最少需要10微升血清，HI每个检测项目最低需要25微升；
• 避免溶血。血液凝固后越早分离出血清越好，便于获得合格血清(合格血清应淡黄色，清亮且无红细胞)。析出的血清要尽快用于检测；如果不能及时进行检测，要将血清样本做好标记并置于-20℃冰箱冷冻保存。
  

二、采样步骤

翅静脉采血法：固定鸡只，展开翅膀，在翅下选一粗大静脉，用酒精棉消毒，以指压迫静脉的回心端，使静脉努张，然后用一次性注射器抽取血样1.5-2ML，再用无菌棉按压止血，然后将采集到的血样沿着管壁缓慢注入(注入前将针头取下)到离心管中。每采一只鸡要更换注射器。

心脏采血法：胸腔进口采血：使鸡仰卧，胸骨朝上，用手指将嗦囊及其内容物压离局部，暴露出胸前口，将针头放在沿着进口腹角的位置上，顺着体中线水平方向刺入，直至穿进心脏，若针头在心脏中，抽拉注射器管芯可将血液吸入，若未见血液吸入针管中，可前后移动注射器和针头，至刺入心脏为止，抽取血液1ML，然后将采集到的血样沿着管壁缓慢注入(注入前将针头取下)到离心管中。每采一只鸡要更换注射器。此方法常用于雏鸡采血。

三、样品标记

每栋鸡舍采血完毕且血液凝固后，将血样放入单独的封口袋中，封口袋上用记号笔做好标记(场名、舍号、日龄、采样日期)。

四、样品处理

将全血样本送到实验室后，放入37℃恒温箱中静置30分钟左右，待血清析出，可直接用移液器吸出上层的血清到洁净的离心管中。吸出上清的血清入离心管中，封盖。将该栋舍的血清样本放入之前已做标记的封口袋内封口保存或更换新的封口袋内标记、保存。如无条件及时离心，可将针管中全血倾斜静止至血清析出。析出血清一一对应转至EP管中，封盖，标记、保存。

五、样品保存

如在24小时内能进行检测，将血清存放在冰箱2-8℃保存，如不能在24小时内进行检测，或需邮寄样品，要冷冻保存。注意血清样品不可反复冻融。

六、样品包装

包装前仔细检查每个EP管的盖子，确保密封完好。

七、血清采集送检的SOP


工具


翅静脉窦采血


血液分装


样品标记


酒精棉擦拭


心脏采血


血清析出/离心


样品保存


绑定


血液分装


样品标记


样品包装

组织病理学检测方法及采样流程

组织病理学作为一种传统的、经典的诊断方法，目前在家禽肿瘤性疾病等方面仍然是一种重要的诊断方法。同时，对一些营养性、病毒性和寄生虫疾病直接和间接诊断具有重要意义和价值。组织病理学常用于对马立克氏病(MD)，网状内皮增殖综合症(REV)，淋巴白血病(ALV)及戊型肝炎(HEV)等不同肿瘤性疾病的鉴别诊断，也可对法氏囊发病所引造成的法氏囊损伤程度进行评估，也是诊断包涵体肝炎的一种有效方法。

一、样品要求

依据不同家禽疾病的致病特点，按要求采取相应的组织脏器进行组织病理学检查。详情请参考下表。



送检样品必须新鲜，通常可选择濒死期或刚死亡(夏季在4-6小时内死亡，冬季在12小时内死亡)的家禽进行采集。选择具有典型症状的鸡只进行采样。样本数量满足检测需求即可，不必过多。一般一个发病群体建议选择3只具有典型病变的鸡只组织进行采集。样品体积一般要求1cm3左右大小，厚度一般不超过5mm。同一样品上应既有病灶部分，又有正常部分，且结构完整。

二、采样步骤

剖检过程中对病变组织进行记录和拍照。然后使用镊子和剪刀采集病变组织，并将其修剪成体积为1cm3左右大小的组织块，样本过大不利于样品固定。取样过程操作力度要轻微，避免过度拉伸和压迫导致组织结构改变而影响读片结果。同一组织样品上应既有病灶部分，又有正常部分，且结构完整。将采集的组织浸泡于其10倍体积的10%中性福尔马林溶液密闭塑料瓶中进行固定，同时做好信息标注(农场，鸡舍名，日龄，采样日期，组织名称)。也可根据实际检测项目采集混样将采样后的病禽无害化处理，现场做好消毒工作，避免病原扩散。

三、样品保存

采集的组织样品使用10倍体积10%福尔马林溶液固定24小时后，更换10%福尔马林溶液再固定。整个固定过程最少需要耗时3天。如现场无大容器，可选用等量福尔马林溶液进行固定且将全部组织浸入液体中。邮寄前，要求将大部分(约90%)10%福尔马林溶液倒掉并保存少量10%福尔马林溶液。

中性福尔马林配方见下表。



注意事项

• 固定组织样品一般15-20℃室温即可，最好不要在低温条件下固定。样品组织需要在10%福尔马林固定液中常温保存；
  

• 要求使用分析纯的福尔马林溶液配制固定液；
  

• 固定的样品切勿挤压，刮抹或用水清洗。
  

四、样品标记

直接在盛有样品的容器上标识必要的样品信息，如农场名，鸡舍名，日龄，采样日期，组织名称等。

五、 包装与运输

泡沫/纸箱内无需放入冰块。包装前需确保容器密封良好，无泄露风险。

六、用于组织病理学检测样品采集送检的SOP


工具


修剪组织样品


标记


包装/运输


采集组织样品


盛装/固定于福尔马林


送检单填写


包装/运输
来源：勃林格家禽

剪刀客

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程祥

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