【名家讲坛】 血凝及血凝抑制实验的影响因素

问心无愧

                                                    河南省新乡市动物疫病防控中心      马健  刘海林  朱方兵   吴学贵


           前言：
           血凝和血凝抑制试验是检测禽类新城疫和禽流感抗体常用的方法，试验操作简单，结果容易观察，对养殖户制定防疫程序具有重要的参考价值，但在实际操作中，影响检测结果的因素很多，本文就实际情况中经常遇到的影响血凝及血凝抑制试验的因素进行分析与总结。

           材料与方法：
           中国兽医药品监察所生产的新城疫病毒抗原，中国农科院哈尔滨兽医研究所生产的禽流感H5N1及H5N1re4株病毒抗原，磷酸盐缓冲液，1%的新鲜青年公鸡红细胞悬液，检测用的鸡血清样品。试验参照GB/T 18936--2003进行检测。

           结果与分析
           根据实际操作中遇到的情况发现影响血凝及血凝抑制试验的因素主要有以下几点：1，试验温度，2，4倍抗原存放条件。3，PBS液的PH值。4，红血球悬液的配制。5，血液样品的采集。6，抗原抗体的反应时间。7，抗原反复冻融次数。

           分析
           1，实验反应温度直接影响实验结果的时间。按照国家标准要求室温。夏天温度高，必须在有空调的实验室进行试验，温度过高，按照标准反应30分钟抗原很容易失效，导致实验失败。
           2，4倍抗原存放条件，配好的4倍抗原一般需要现用现配，冬天无需特殊存放，夏季气温高，抗原易失效，需特殊保存。如检验样品多，抗原添加时间长最好放在冰块上，以免抗原失效，导致后面的实验失败。
           3，PBS液的PH值对实验结果也有影响，按照实验标准PBS液的PH值要求在7.2---7.4之间，PBS液的PH值低，影响鸡的红细胞悬液和抗原的保存，直接影响实验结果。
           4，红细胞悬液要求现用现配，按照标准最好三只未免健康青年公鸡的红细胞悬液；根据实际情况及对比试验，配制好的1%的红细胞开始破裂变形，严重影响实验结果，不能使用。
           5，血液样品的采集，在实际检测中经常遇到同一批鸡两次复检结果不一致，可能跟养殖户采血时间有关。按照血液采集标准，动物在采集血液样品前需禁食8小时，采食前和采食后血液浓稠度不一样，抗体水平肯定有差异。
           6，抗原抗体反应时间也直接影响实验结果，尤其是夏天，反应时间过长，4倍抗原直接失效，导致实验结果失败，即使在有空调的房间抗原抗体反应10--15分钟即可，时间长抗原易失效，影响实验结果，冬天可按照实验标准反应30分钟。
           7，抗原反复冻融次数影响抗原效价。也会影响监测结果，新抗原效价可能是1：512，反复冻融几次可能就将为1：256或更低，所以每次4倍抗原之前检测抗原效价，根据效价才能准确配制4倍抗原。

lps870311

谢谢，学习了

洪哥1988

学习了。想不到抗原效价降低那么快。

赵海婷

现在新城疫抗体不均匀离散度大。流感的更是

mmm

还有：移液器的正确使用和移液器的灵敏性。
每次用过移液器后应将其调至最大量程，以保持其弹簧的灵敏性。

小绒毛

多谢了,学到很多

诸葛

不是吧  不会有那么快吧

医者

为什么现在的技术贴关注都这么少呢！