反馈家禽肠道健康状况的便捷采样方法

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　　家禽肠道健康与营养吸收和疾病状况息息相关，肠道微生物组成情况可以在一定程度上提供相关信息。对家禽机体无损伤且能确定肠道微生物真实情况的采样方法在科研和生产中都是优先之选。荷兰科研人员的最新研究显示，盲肠粪便(Cecal droppings)和靴袜采样(Boot socks sampling)可以保持采样的持续性且不损伤机体，并且能够在一定时间内准确反馈肉鸡病理和生理状况。



　　众所周知，家禽肠道微生物组成与机体健康和生长性能息息相关。深入了解家禽肠道微生物变化机制及其影响因素，有助于从营养和管理途径保障肠道健康，从而改善生产性能。对于家禽来说，尤其是生长期较短的商品肉鸡在8周左右的时间内肠道微生物组成持续发生变化。通常来说，刚出壳的雏鸡肠道菌群组成极不稳定，至1～3日龄，包括链球菌和大肠杆菌在内的兼性厌氧菌在肠道快速定居，瘤胃球菌、毛螺菌等厚壁门的厌氧菌逐渐占据优势地位。在10日龄，随着慢速生长型厌氧菌逐渐增多，更加多样、均衡的微生物组成结构开始形成。对于成年鸡，乳酸杆菌是嗉囊和肌胃的优势菌，乳酸杆菌、肠球菌和梭菌则是十二指肠和空肠的常在菌;在结肠定居的微生物密度位居小肠各肠道之首，主要包括乳酸杆菌、肠球菌、梭菌、Turicibacter等属;盲肠内的微生物组成最为复杂，密度也最大，优势菌属有梭菌、肠球菌、芽孢杆菌、瘤胃球菌(见图1)。除了日龄外，家禽的品种、日粮类型、饲养环境等都会影响肠道微生物组成。

　　在试验或生产中，通常从采集样品中获取的肠道微生物组成信息来了解肠道营养吸收和健康状。采样方法对肠道菌群的分析结果有很大影响，加上肠道菌群组成的多样性和功能性会随着肠道区段发生变化，需要根据研究目的选择适合的采样方法。目前，最为常用的方法是采集盲肠内容物，因为盲肠中微生物密度和多样性最为显著，具有一定的代表性，但这种采样方法需要解剖鸡只，不利于针对个体的连续采样。除此以外，粪便样品也常用来指示肠道健康状态，虽然这类样品可以连续收集但无法准确反映盲肠微生物真实情况。另外，家禽个体或群体之间也会存在肠道微生物组成的差异。因此，无论是科学研究还是生产应用，都需要既不损伤家禽机体，又能持续采样且真实反映肠道微生物组成状态的无创式采样方法。目前用于家禽肠道健康研究的无创式采样方法有泄殖腔拭子、盲肠粪便采样、靴袜采样。

　　为了解这3种采样方法用于分析肉鸡肠道微生物组成的可行性，荷兰科研人员选择了两个实施无抗生产的肉鸡场用于采样。试验肉鸡0～28日龄饲喂添加尼卡巴嗪和那拉霉素的小麦-豆粕型日粮，28日龄到出栏饲喂添加那拉霉素的日粮。研究人员在鸡舍四个角落和中心位置各选取1只肉鸡，分别在0、2、7、14、35日龄采集泄殖腔拭子以及盲肠和回肠内容物。与此同时，在上述5个位置分别放置一个铁丝网用于收集盲肠粪便，研究人员脚套上靴袜在相同的位置行走以收集垫料及黏附的粪便样品。收集的247份样品在提取DNA后进行微生物16S rRNA分析。结果显示：从微生物系统发育多样性来看，7日龄盲肠内容物样品与盲肠粪便和靴袜样品并无显著差异，但14日龄盲肠内容物样品显著高于盲肠粪便样品;从细菌相对丰度来看，2日龄盲肠粪便中乳酸杆菌属相对丰度高于盲肠内容物，而泄殖腔拭子中的大肠杆菌-志贺氏菌属相对丰度则高于盲肠内容物，而靴袜样品与盲肠内容物无差异。基于以上结果，研究人员认为盲肠粪便采样能够很好地反映盲肠微生物组成变化，靴袜采样适合用于分析生长早期的肠道微生物变化和生长后期的垫料微生物情况。

　　参考文章：

　　Joel J. Maki, CassidyL. Klima, Matthew J. Sylte, et al. The microbial pecking order: Utilization of intestinalmicrobiota for poultry health[J]. Microorganisms, 2019, 7: 376.

　　Jannigje G. Kers, EgilA.J. Fischer, J. Arjan Stegeman, et al.Comparison of differentinvasive and non-invasive methods to characterize intestinal microbiota throughouta production cycle of boiler chickens[J]. Microorganisms, 2019, 7: 431.

　　来源:吕玲 编译 中禽传媒

南山道士

本文的采样和监测方法，特别是靴袜无损采样检测，如能用于常规生产，对于提高我们的肉鸡生产性能会有极大的提高。