药敏实验

一方论道 · 发表于 2009-7-1 08:12:57

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近年来，随着养殖环境的不断恶化，养殖规模的不断扩大以及抗生素的不规范滥用，细菌的耐药性越来越强，甚至出现了超级细菌。现今已知的抗生素对它没有一点效果，细菌的耐药性问题也成为了悬在每位畜牧工作者头上的达摩克利斯之剑，不知道何时降临到自己头上。据2009年最新统计，中国每年因为滥用抗生素造成的损失多达800亿元人民币！
药敏实验作为一种检测某种细菌对某种药物敏感程度的实验，近年来在防治动物疾病的过程中得到了广泛的推广和应用，为用抗生素的科学应用提供了指导。
在鸡病专业网看到有一些人经常问关于药敏实验的问题，各位网友的回答虽然很好，但不够全面。今天我把自己做药敏实验的体会以及一些注意事项写下来，希望对需要的人有所帮助。
一：药敏实验需要的器材
1：高压锅：主要用于实验器材的高压灭菌
2：电磁炉：用于溶解培养基
3：酒精灯：接种时的无菌操作
4：天平：用于称量培养基
5：培养基：用于培养细菌。各大兽药市场有专门配制好的各种培养基出售
6：三角瓶：用于加热溶解培养基
7：剪子：用于病料的采集
8：镊子：接种时用于夹捏病料
9：培养皿：用于细菌的培养
10：药敏片：最好用自己做的，可以按照治疗量的10倍配制药液（现在很多公司的标示成分与实际成分有很大出入）
11：恒温培养箱
二：病料的采集
用于大肠杆菌的药敏实验，可以采集病死畜禽的肝脏、肺脏、心脏等器官或者粪便，但所采集的病料要新鲜，死亡时间不能过长
三：培养基的制备及高压灭菌
1：首先按照实验所需用量称取一定量的培养基
2：将培养基置于三角瓶内，加入一定量的蒸馏水（没用的话也可以用白开水代替）
3：将三角瓶放于电磁炉上加热，加热时候要不断摇晃，直到培养基完全溶解（注意在加热时会有一部分水蒸发掉，要重新加水至原来的刻度），然后将三角瓶取下，使其自然降温到约50——60度
4：将三角瓶内培养基在无菌环境下倒入培养皿中约2——3mm厚，使其自然凝固，备用
四：病料的接种
在大学里学到的都是用吊环勾取一点做划线，在现实中这种方法太多繁琐。现实中可以在酒精灯方圆5cm无菌范围内，用手术剪剪下一小块，用镊子夹住在培养基上均匀涂抹，备用
五：药敏片的放置及实验结果的观察
1:首先在接种好细菌的培养皿背面用彩色水笔将培养皿均匀分成几份，分的数量可以根据所做药物的数量来分，我一般分成4份，可以做五种药物的敏感实验
2：用镊子夹住做好的药敏片，轻轻放置于培养皿上（放置时也要在酒精灯附近，培养皿的盖子不能开太大口）
3：将培养皿放于恒温培养箱中37摄氏度培养18——24小时，观察实验结果
4：药敏结果的判定：抑菌圈直径大于20 mm为极敏；15～20 mm为高敏；10～14 mm为中敏；10 mm以下为低敏