临床病理制片常见问题及解决办法

少林寺

在病理外检工作中常规石蜡切片及染色的质量是保证病理诊断及时、准确的关键。我们在从事病理组织学制片和对病理组织切片的会诊中常常发现，由于切片和染色质量不佳，难以做出准确的病理诊断甚至出现错误的诊断结论。多年来，我们在病理组织制片技术上积累了丰富的经验。现将临床病理制片中常见的问题及解决的办法总结如下。?
1  切片不完整或切片困难?
　　1.1  实质性器官，如淋巴结、肝、脾组织细胞丰富，细胞间纤维组织含量少，脱水透明时间过长导致细胞严重脱水；浸蜡温度过高导致组织收缩变硬变脆，使制片不完整形成破碎。
　　1.2  纤维瘤，脂肪结缔组织等取材过厚，有时未将小淋巴结剖成切面，淋巴结纤维组织膜阻止了脱水透明和浸蜡试剂与组织内部的渗透交换，导致组织脱水不彻底、石蜡不易浸透、组织过软，切片困难。?
　　1.3  处理方法  根据组织来源将标本分为大小两类，分别进行脱水、透明、浸蜡，避免组织过硬或过软。
　　(1)胃、肠、子宫等大标本，取材后固定脱水、透明时间和浸蜡时间均不少于10 h。
　　(2)胃、支气管、宫颈内膜等小标本脱水透明浸蜡一般6 h完成。取材厚度小于0.2 cm的淋巴结、甲状腺按小标本处理。
　　(3)如?出现组织过硬无法制片，可将蜡块放到95%乙醇甘油1∶1混合液中软化再行切片。出现组织过软，将蜡块重新浸蜡后包埋切片。
　　(4)新鲜组织及时固定。脱水、透明试剂要保持最后一缸的纯度。浸蜡温度不超过65℃，包埋用蜡温度应高于浸蜡温度。夏季气温高可用熔点60～62℃切片石蜡；冬天气温低，可用56～58℃切片石蜡。?
2  切片皱缩、折叠、破碎、裂纹?
　　2.1  刀锋变钝、刀锋上粘有蜡屑、切片刀角度太小、组织浸蜡时间不够，切片时组织会被皱缩在一起。?
　　2.2  漂片水温过高，如淋巴结、脑组织及含黏液成分较多的组织切片，放到过高水温中未及时展片，就易粘在一起形成折叠，还可能将含脂肪的组织烫碎。?
　　2.3 切片刀有小缺口，组织中有钙化、异物、包埋蜡温过低、蜡块中出现小白点等，都可造成切片的裂纹。?
　　2.4  处理方法  
　　(1)注意检查刀具，及时移换刀口，及时磨刀，保持刀的锋利，注意切片刀的清洁并及时清除刀和蜡块上的蜡屑，防止切片的污染。
　　(2)调整好刀与蜡块的角度，双平面刀倾斜角为12～15度。
　　(3)包埋组织及修蜡块应完全，组织周围应留有0.2 cm余蜡。
　　(4)用酒精灯加温漂片，水温应控制在45～50℃之间。
　　(5)取材时避免组织中钙化、线头及异物。?
3  切片脱落?
　　3.1  组织内含过多的坏死物，细胞崩解后，有形成分减少，附着力下降，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定水分逸出，坏死物质失去细胞的支撑作用，染色时组织易脱落。?
　　3.2  漂片水温过低，切片的微细皱折未展平，造成与载片附贴不牢固。?
　　3.3  烤片温度低时间短，载片不干净，切片太厚放置室温太久都能造成切片脱落。?
　　3.4  处理办法  取材时避免组织内带有坏死组织，调整好漂片水温，烤片温度在65℃不少于30 min，保持载片清洁，防止灰尘污染。切片厚度应在4 μm。?
4  切片厚薄不均，切片上有横纹?
　　4.1  切片机微动部分失灵，齿轮跳格。?
　　4.2  切片机上的组织块夹持器或夹刀螺丝未旋紧，刀的斜度太大或太小。?
　　4.3  蜡块太硬过大，转动时刀刃受到震动。?
　　4.4  切片时用力、速度不均匀。
5  切片染色对比不佳及染色污染?
　　5.1  切片脱蜡不彻底，细胞不易着色；切片过厚导致细胞重叠；苏木素染色时间过长，分化时间不够，胞核着色深，核仁分辨不清。?
　　5.2  表面有氧化金属膜的苏木素染液易污染切片，其染液使用超过半年以上，成分及浓度都发生了变化，染色力下降，延长时间易造成核浆共染。?
　　5.3  处理办法  脱蜡入水后切片成云雾状，应延长脱蜡时间或更换脱蜡用试剂。分化后肉眼观查切片呈淡蓝色为良好。新配苏木素易产生氧化金属膜应及时过滤。苏木素染色超过5 min，染色效果不佳应及时更换

dy小董

谢谢，辛苦了

hz春欢

实验室的东西，我不懂。

可兽医

上学的时候在实验室做过鸡血涂片和小肠切片，到现在我还保存着呢，呵呵