药敏试验营养琼脂的制作

神九研究所

药敏试验

营养琼脂的制作



       1、用高压锅。一般 31或45克加1000ml蒸馏水于锥形瓶中，121℃15分钟。要注意过121℃则放气，不能等到自放，温度就太高了，有可能将营养琼脂破坏。

        2、放气后维持相近温度，可断电再加电。

        3、到时间后，将液状的营养琼脂倒入已消好毒的平皿中，将其底铺全，加厚至3~4cm厚，静置，待其凝固，放入冰箱冷藏备用。注意往平皿中倒琼脂时，平皿盖打开时，口应留小一些，尽量避免空气中的细菌进入。

        4、一般每100ml做5个左右的琼脂平皿。

        5、做法氏囊、鸡白痢琼扩试验时，在打孔后，要将平皿底上烤 一下，让其下部都融合。

        6、正式程序是：

（1）用铂丝（先用酒精灯烧一下）接种棒直接从病禽肝脏提取细菌，放到肉汤培养基中24~48小时

（2）从肉汤中提取液体划线到平皿上，要多划一些线，将药敏片贴在已划线的平皿上，放入37℃培养箱中24小时3）看结果，抑菌圈越大该药效果越好。

      7、现在的步骤是用病禽的肝脏直接做。先将手术剪在酒精灯上烧一下，用剪子剪开肝脏，使其切面直接接触平皿上的琼脂，再切再涂。然而后用镊子将药敏片放上去，24小时后看结果，判定同上。

         8、体外试验与体内试验不完全一致

         9、厌氧菌问题，培养基问题。鸡白痢沙门氏菌问题（要用一些特殊的培养基，如SS琼脂、亚硝酸铋琼脂等）。要注意不同的培养基和不同厂子的琼脂可能操作要求不同，要注意产品说明。