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体液(血清、血浆、胸水和尿液等)中抗菌素浓度的测定,是了解抗菌素用量是否合适的较好的方法。一般浓度均应为感染菌敏感性的2—10倍。由于本方法操作复杂,需要时间较长,因此,使用的不如细菌对药物的敏感试验广泛。 一、试验材料 1.检样 取含抗菌素最高或下次用药前2份体液,如有细菌污染,可用细菌过滤器滤过。 2.菌株和菌液 选择对被测抗菌素敏感的菌株。将菌株接种在普通肉汤培养基中,37度,培养6—18h后,稀释成10[sup]-3[/sup]备用。 3.试管架、灭菌试管和吸管等。 4.抗菌素 用灭菌蒸馏水将抗菌素稀释成所需要的浓度。 二、试验方法 1.取灭菌试管36支,于试管架上排成3列,每列12支。 2.每列的第1管各加入培养基1.5ml,其余各管分别加入1ml。 3.于第1列第1管中各加入抗菌素稀释液0.5ml;第2列的第1管中加入体液0.5ml,第3列的第1管中加入下次用药前的体液0.5ml,加完后混合均匀。 4.从各列第1管中吸出1ml移入同列第2管,依次类推,至第11管,弃去1ml,第12管不加抗菌素或体液,作为对照。 5.向各管内加入幼龄敏感菌液0.05ml,37度培养18h后,观察第2、3列抑菌情况,记录两列仍能抑菌生长的最高稀释管号及稀释倍数并计算体液中含菌量。如下表: 根据表9的结果,说明抑制细菌生长的抗菌素最高稀释倍数为1:128,高浓度体液为1:64,低浓度体液为1:16按下列公式计算:
体液中抗菌素含量= 试验用抗菌素原液(u/ml)*抑制的体液滴度倒数 抑菌的抗菌素滴度的倒数 如,试验用抗菌素原液为1单位/ml,则高浓度体液抗菌素含量为: 1*64 =0.5单位/ml。[sub]
[/sub] 128 低浓度体液抗菌素含量为:1 *16 =0.0125单位/ml。 128 如果体液在低倍稀释管中细菌仍能生长,说明抗菌素含量过低,考虑增加用量。 表9 体液中抗菌素浓度的测定 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
| 稀释倍数 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 2048 4096 对照
|
第
一
列
| 培养基 1.5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
抗菌素 0.5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
幼龄菌 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
生长情况 ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ++ ++ ++ +++ ++++
|
第
二
列
| 培养基 1.5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
体液 0.5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
幼龄菌 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
生长情况 ─ ─ ─ ─ ─ ─ ++ ++ ++ +++ +++ ++++
|
第
三
列
| 培养基 1.5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
体液(下 0.5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
次用药前)
幼龄菌 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
生长情况 ─ ─ ─ ++ ++ ++ ++ ++ +++ +++ +++ ++++
|
注:表中培养基、抗菌素(体液)、幼龄菌、生长情况的单位分别为:ml、ml、ml、例。 |