鸡新城疫红细胞凝集试验和红细胞凝集抑制试验

共享精神

引起家禽传染病的某些病毒，例如鸡新城疫病毒、A型禽流感病毒，由于具有血凝素，可以使鸡或其他一些动物的红细胞发生凝集，称为红细胞凝集现象。如果在这些病毒悬液中先加入特异性的免疫血清，则病毒凝集红细胞的作用被抑制，称为红细胞凝集抑制现象。红细胞凝集试验常用于测定病毒的含量，例如测定新城疫活毒疫苗的滴度，及用于病毒的鉴定、流行病学调查和免疫接种效果的监测。
1%鸡红细胞制备　　心脏采取未经新城疫疫苗免疫注射的健康鸡血5～10ml，加入含抗凝集的试管中。平衡后，以2500r／min离心10min，吸去上清液，注意要将血细胞泥表面的一层薄膜吸净。然后用血细胞泥5～10倍的生理盐水洗红细胞，离心10min，弃上清，如此反复洗3～5次，末次用生理盐水将血细胞泥稀释成1%浓度备用。
红细胞凝集试验（HA）　　1.取一块洁净的96孔V型微量血清反应板，用微量吸液器在一列孔中加生理盐水，每孔加50μl。
　　2.取待检病毒液50μl加入第1孔中，充分混合后取50μl加入第2孔中，如此直至第11孔，混合后吸取50μl丢弃，第12孔不加病毒为对照孔。
　　3.更换吸液器前端的塑料吸头，每孔加1%鸡红细胞各50μl。
　　4.将反应板置微型混合器上，振动混合3min，取下置室温15min开始观察，每5min观察一次，直至60min，判断并记录结果（表1-7-1）。“#”红细胞全部凝集，均匀分布于孔底。“＋＋”红细胞部分凝集，沉积于孔底呈小圆点状。“－”红细胞全不凝集，沉积于孔底呈圆点状。以上红细胞全部凝集的病毒最高稀释倍数为该病毒的凝集效价（表1-7-1中病毒血凝效价为256倍）。?
血凝抑制试验（HI）　　1.取清洁的96孔V型微量血清学反应板，在每孔中加生理盐水50μl（每一份血清加一列）
　　2.将被检血清50μl加入第一孔中，充分混合后，取50μl加入第2孔中，如此稀释直至第11孔，第12孔不加血清作为对照。
　　3.根据血凝试验测定的病毒（如新城疫Ⅳ系）效价，配制4个血凝单位的病 毒稀释液。例如上述血凝效价为256倍时，将病毒原液稀释至64倍（256/4＝64），即为4单位病毒稀释液。在每孔中加入4单位病毒稀释液50μl。
　　4.将反应板置混合器上振荡3min，取下放室温10min。
　　5.在每孔中加入1%鸡红细胞各50μl。
　　6.置微型混合器上振荡3min，取下放室温15min开始观察，至60min 判定记录结果（见表1-7-2）。?以使红细胞凝集全部被抑制的血清最高稀释倍数为该血清的血凝抑制效价（例如表1-7-2中的血凝集抑制效价为128倍）。