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华中农业大学的一种发明专利:
禽流感疫苗免疫与病毒野毒感染胶体金鉴别诊断试纸条
近年来,用灭活疫苗免疫接种已成为我国控制禽流感的一种主要策略,但免疫禽类不能与自然野毒感染的禽类从血清学水平上进行鉴别,并常导致贸易安全性障碍,而在生产实践中为了控制禽流感,更要进行血清学监测。本产品的研发是不仅要区分禽流感疫苗感染和和野毒感染, 更重要的是必须鉴别疫苗接种的动物是否感染了禽流感。
本发明属于免疫应用领域,涉及动物分子生物学、免疫学等相关领域。具体地讲是一种借助胶体金标记显色的免疫层析反应,用于鸡禽流感疫苗免疫与病毒野毒感染的快速鉴别诊断。
胶体金免疫层析分析(GICA)是20世纪80年代发展起来的一项新的免疫分析方式,是应用胶体金标记技术,以胶体金作为示踪物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。它具有简便,快速,特异性强,费用低的优点。依据胶体金免疫层析技术,在国内外无论人医应用方面,还是兽医应用方面,都已经研制出了多种胶体金免疫层析快速检测试纸条。
国内公开了几种检测禽流感病毒抗原或抗体的检测的制备方法,但未涉及胶体金免疫层析技术鉴别诊断禽流感疫苗免疫与病毒野毒感染。本产品利用胶体金免疫层析技术及禽流感病毒非结构蛋白NSl和一种抗鸡IgG Fc单克隆抗体制备了一种鸡禽流感疫苗免疫与病毒野毒感染的胶体金免疫层析快速鉴别诊断试剂盒,该试剂盒能特异灵敏地检测出禽流感病毒野毒感染抗体,而疫苗免疫抗体检测不出,从而实现鸡禽流感病毒野毒感染和疫苗免疫的鉴别诊断。而且本产品检测结果不受禽流感血清型的限制,适于所有禽流感亚型,直接通过肉眼观察判断结果,试纸条出现2条红色线即可判定为阳性结果,即表明禽流感病毒正在感染或感染不到3周;若试纸条仅质控线出现1条红色线即可判定为阴性结果。
本发明优点:
1)本发明的优点之一是生物安全性高。本发明中的试纸条检测线包被的是本发明制备的禽流感病毒重组非结构蛋白,制备过程中不涉及禽流感活病毒,因此没有生物危险性,没有禽流感活病毒逃逸、扩散的潜在危险。
2)与已公开的用于禽流感疫苗免疫与病毒野毒感染的鉴别诊断的ELISA方法相比,本发明的禽流感疫苗免疫与病毒野毒感染的胶体金免疫层析快速鉴别诊断方法具有许多ELISA方法所不能比拟的优点,如检测快速(10分钟);不需要任何特殊仪器、设备,可用于现场操作;操作简便,只需一步反应,不需由专业人员操作;检测成本低;检测过程中只需一种试剂(8%NaCl),对人体无危害,对环境无污染;储存方便,对温度要求不高,在4~8℃下有效保存期可达一年;在室温下可保存六个月
1. 动物试验
分别于第11天、第18天、第30天翅静脉收集活毒感染血清(56份)、灭活H9N2免疫血清(15份)和商品灭活疫苗免疫血清(15份),阴性对照血清(20份)以及标准的鸡新城疫(ND)阳性血清(2份)、鸡传染性支气管炎(IB)阳性血清(2份)、鸡传染性法氏囊(IBD)阳性血清(2份)、SPF鸡阴性血清(2份)(以上各标准血清均购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所)用本产品进行检测。结果显示用本产品检测禽流感野毒感染鸡血清时,质控线及检测线出现明显的紫红色条带;而与生理盐水(空白)、SPF鸡阴性血清、标准鸡新城疫病毒(ND)、鸡传染性法氏囊病毒(IBD)、鸡传染性支气管炎病毒(IB)等阳性血清及禽流感疫苗免疫鸡血清试验后,检测线不出现紫红色条带。这表明本产品特异性高,与鸡的其他呼吸道疫病病毒抗体无任何交叉反应。
2. 送检样本检测
从河南及湖北2省共10个鸡场采集300份血清,2个活禽市场随机采集50份血清,同时进行琼脂扩散试验、血凝抑制试验和本产品(GICA)检测,结果53/300和5/50 GICA结果呈阳性,说明其中的3个鸡场和1个活禽市场存在禽流感感染。经回访证实3个鸡场在采样前1-3周曾出现呼吸异常。而所有的样品在血凝抑制试验中均呈阳性,滴度为32-256;部分样品琼脂扩散试验检测不到抗体。 |
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