对商品肉鸡高死亡率病原的研究及对策

问心无愧

          研究背景：很多商品肉鸡在20日龄之后陆续出现零星死亡、呼吸道、粪便稀薄等症状。解剖发现，气管充血、出血，严重的整个气管发红。支气管和气管交叉处堵塞，随后气囊炎、大肠杆菌心包炎肝周炎，死亡率开始陆续上升。使用任何药物没有明显作用。也更是因为发生了零星死亡与呼吸道等疾病，导致养殖户应该在21日龄使用的新城疫疫苗不断的向后推迟，结果，不但没有使疾病减轻，反而越来越严重，直至30日龄之后才有所减轻。还有的鸡群是在30日龄之前一切正常，一到30日龄之后便开始出现陆续死亡，且呈现上升趋势，用药无效。这个时候很多兽医就把关注点集中在鸡舍的通风与保温的问题等管理上，但不能解决根本问题。多年以来，从上层的专家学者和基层兽医普遍认为诱因是禽流感弱毒H9病毒的感染导致。但是，从研究发现，H9的抗原变化并没有太大。病毒进化缓慢，不至于导致疫苗没有作用。之后又说，是因为H9感染之后出现了大肠杆菌的混合感染导致死亡率增加。但是，不管是H9还是大肠杆菌都应该用药后有明显作用。目前的事实是几乎都没有明显作用。在这种背景下，笔者就开始了对这种症状的研究----问题到底出现在那里。

         商品肉鸡的发病现状：根据从青岛易邦对商品肉鸡的病毒鉴定结果统计得知，对高死亡率的商品肉鸡鸡群病毒鉴定的统计结果看：新城疫最多，H9次之，H5罕见。这个统计结果显示了对于商品肉鸡的新城疫方面的关注。尽管商品肉鸡的免疫应答能力比商品蛋鸡差很多，同样的疫苗同样的剂量在肉鸡鸡群产生的抗体要比商品蛋鸡产生的抗体差两个滴度，但是，也不至于导致新城疫和H9的抗体显现的没有一点保护力。到底是商品肉鸡养殖户的鸡舍存在问题，还是养殖户的管理技术出现问题，还是新城疫和H9疫苗效果不好，等等。带着这些疑问本人开始排除法的逐步研究。最后确定了诱因之一--新城疫病毒的抗原变异。

         研究的前提概述：导致商品肉鸡高死亡现状的病因已经耳熟能详，人人皆知，就是H9引起的气囊炎和新城疫导致的死亡率。从多个科研院所的专家学者对病毒的分离情况来看，新城疫和H9混合感染的几率不能说没有，但是较少见到。多数鸡群属于前期H9弱毒感染，随着大肠杆菌等疾病的混合感染之后不能及时治愈导致了后期新城疫的爆发，这个时候H9退出，以新城疫为主。在个别时候也有新城疫和H9的混合感染，但是，不管什么病毒混合感染，都会有一个以强毒为主，弱毒为辅的原则。比如新城疫和H9混合感染，就需要先处理新城疫问题。H5和新城疫混合感染就需要先处理H5问题。对于商品肉鸡前期发现H9导致了发病死亡后能否紧急接种问题，笔者认为，在刚开始发病时，大群还没有发展开来的时候尽快新城疫IV  4倍量紧急接种。否则，不等H9治愈紧跟着就是新城疫的爆发。因为病毒常常是弱毒逐步被强毒所代替。
       那么，目前的高死亡鸡群如果以新城疫为主，但是很多鸡群刚免疫了新城疫疫苗怎么也未见效果，这次的实验的结论是：目前的新城疫疫苗IV、C30已经使用近70年，在不断的免疫压力下，尽管新城疫血清型没有根本变化，但是抗原变化的不断积累已经导致了目前传统的疫苗已经不能全面保护鸡群不发生新城疫。商品蛋鸡的表现是，传统疫苗IV、C30可以确保鸡群不死亡，但是不能保证不减蛋；商品肉鸡可以有一定的保护效果，但是不能保证不死亡。从实验室研究数据来看，LaSota株免疫后攻毒保护率为85%，免疫后攻毒带毒排毒率及排毒时间较长。
       对于目前中国各地的新城疫强毒基因型统计结果看，重点集中于基因VII型。多年以来，尽管基因VII型已被广大同行所认可，但一直没有合适的生物产品达到替代目前传统基因II型疫苗的地步。根据刘秀梵院士的统计结果，目前，新城疫基因VII型已经占据新城疫强毒的95% ，且传统疫苗的效果越来越差，于是开始了对于新城疫新型毒株的制作实验和对比。

        疫苗的制作过程：
        毒种来源：鸡新城疫Lasota株、H9F株、均有某生物制品厂购自中国兽药监察所。新城疫基VII型，这个基因VII毒株不是来自于自然的全病毒毒株。是利用反向遗传技术构建的国际唯一的基因VII型弱毒疫苗株。这一技术目前在人用疫苗上使用较为广泛和成熟。例如，人的乙型肝炎疫苗、人流感疫苗等，其基本原理及过程如下：
     1、筛选1株毒力强、血凝性高的基因VII型强毒株做为靶病毒。（筛选）
     2、利用反向遗传技术将靶病毒F-蛋白基因进行多位点突变，使编码的氨基酸序列与弱毒序列完全一致；（致弱）
     3、采用反向遗传技术更换HN蛋白，提高靶病毒的HA和EID50效价；（置换）病毒的拯救、筛选和克隆，获得基因Ⅶ型ND致弱株(代号：YBⅦ株)。（拯救、克隆）       该基因VII型毒株以LaSota基因组作为背景，将VII型流行毒株KBNP-4152的F和HN基因替换LaSota基因组上的相应部分，并对基因组进行了一系列的致弱突变，进而成功获得重组了基因VII型F和HN基因的致弱毒株。这个毒株的来源不言而喻，只有刘秀梵院士有。
       实验室：某生物制品厂实验室。
    （  疫苗制作过程属于简述） 抗原的制备都按照常规方法，接种适龄鸡胚37°孵育48--120h后，收获鸡胚尿囊液。无菌检验后4°保存。然后将收集的三种尿囊液分别用无菌纱布过滤，应用中空纤维超滤器浓缩2--4倍。各个病毒液对1%鸡红细胞HA大于10Log2为合格。然后分别用0.2%福尔马林灭活。随后进行无菌和灭活检验。使用7号白油、司班-80硬脂铝酸混合后灭菌。把各个浓缩后的病毒液按照比例混合后加入4%的吐温--80搅拌均匀。油水按2:1乳化后分别制成LaSota+H9(F株）二联灭活疫苗和新城疫（VII）+H9（F株）二联灭活疫苗。
          以上实验过程和中试产品均有青岛易邦生物工程有限公司提供。

       田间试验：购买40只淘汰蛋鸡进行直接注射，没有检测抗体，主要是安全试验，观察20天后鸡只正常，于是开始针对河北邢台几个小养殖户（一批1500--200０只）商品肉鸡开始直接注射测试。实验鸡群分为两组。第一组：2000只7日龄鸡群，其中1000只注射LaSota+H9每只0.35ml，另外1000只注射VII（暂时这样命名）+H9每只0。35ml .第二组，选择两家养殖户，第一户使用LaSota+H9;第二户使用VII+H9，分别于7日龄注射0.35ml。20天之后使用IV抗原检测抗体发现，使用IV系组抗体大约4--6之间，比VII型毒株组低0.5--1个滴度。使用VII抗原检测抗体，结果，IV组比VII型组低1-2个滴度。
          发病情况：这三户鸡群都集中在一个村庄，距离200米之外不等。鸡舍条件简易。第一组于26日龄出现呼吸道症状，陆续出现死亡。死亡先从IV组开始，陆续发展到VII型组。最终，IV系组死亡率比VII型组多一倍左右。第二组的第一户于20日龄开始出现支气管堵塞气囊炎，随后肾脏肿胀，大肠杆菌心包炎肝周炎等症状，直至30日龄每天死亡平均20只左右。这批鸡怀疑H9混合其他疾病感染，基本没有试验价值。第二户几乎也是在20日龄开始出现症状，陆续出现死亡。相对第一户死亡率少一半左右。
         具体其他试验不再赘述。因为占据的篇幅太大没有意义。

        结论：商品肉鸡主要以新城疫为主。目前的传统毒株已经不能有效保护鸡群不发生死亡。因为新城疫的临界值在4Log2以上才不死亡，但是多数鸡群7日龄IV+H120 和新流油苗注射，20日龄IV饮水之后检测抗体，很多都在3--6之间。这样的鸡群如果感染新城疫，就会导致3--4Ｌｏｇ２之间的鸡出现死亡。一旦出现发病死亡就会陆续感染其他鸡只。
        第一：商品肉鸡在30日龄之后发病多为新城疫。原因：传统的免疫程序7日龄新支多价活疫苗2倍点眼滴鼻，同时新流油苗注射，21日龄IV 3倍饮水。27日龄检测抗体，新城疫抗体和H9抗体很多都是在3--6之间，这个结果保护效果很差，很容易被感染。
        第二：20日龄前后出现呼吸道随后出现支气管堵塞等混合感染多为H9感染。从使用VII型新城疫疫苗的结果来看，发生H9之后死亡率增加并难以控制的原因是新城疫抗体较低。容易出现混合感染，或H9过后的新城疫感染发病，导致死亡率增加。
       第三：新城疫传统毒株已经不能有效完全保护鸡群新城疫问题，使用的新的流行基因疫苗势在必行。
       建议：商品肉鸡的免疫程序：1日龄：IV+H120+491   2倍点眼滴鼻；7日龄IV+H120+491  2倍量点眼，同时ＶＩＩ＋Ｈ９灭活疫苗注射０.３５ｍｌ。２０日龄ＩＶ３倍量饮水，２８日龄ＩＶ４倍量饮水。

风雨中

第一个学习了！期待你以后的文章！！！

风中云

好文章，期待下篇。

日照莒州龙

期待下篇。 。。。。。。

问心无愧

日照莒州龙:期待下篇。 。。。。。。 (2012-10-31 16:14)

不再另起一篇，还是这篇文章接着叙述，直到满了之后另起一篇

福财运

期待后续。。。。

阚俊涛

继续！！！！！！

平淡不平凡

好文章，期待下篇。

鸡鸣天下。。

请尽快往下续。

山东小王

欲知后事如何，请听下回分解。呵呵

问心无愧

鸡鸣天下舞:请尽快往下续。 (2012-10-31 16:37)

叙述过程中不断有事，不断打断，可能过程需要几天时间。抱歉

护航保驾

继续期待中。。。。。。。。。。。。。。。。
     青岛易邦已经有新的产品上市了  新城疫（基因Ⅷ型）

萧瑟秋风

H5大有流行之趋势

问心无愧

护航保驾:继续期待中。。。。。。。。。。。。。。。。
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(2012-10-31 16:45)

刘院士的这个毒株目前还处于试验阶段，不合适直接说易邦生产这个产品。耐心等待，会有公开生产的时候

山前必有路

期待中...  ...