【分享】家禽坏死性肠炎的鉴别诊断及防治措施浅析（下）

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作者：刘兴波、聂伟等

往期回顾：家禽坏死性肠炎的鉴别诊断及防治措施浅析（上）

（四）、实验室诊断

实验室诊断主要包括：微生物学、免疫学和分子生物学等诊断方法。

目前坏死性肠炎的诊断尚没有单一明确的指标，坏死性肠炎会引起动物稀便带血，个体差异性可能导致一些患病动物症状表现不明显，患病动物需结合组织病理学辅助手段，坏死性肠炎典型病变特点，并结合产气荚膜梭菌菌株或其毒素的鉴定，进行最终确诊。

传统微生物检测方法是将分离培养后的可疑菌落做涂片染色实验、镜检形态、生化实验等确诊为产气荚膜梭菌。传统的微生物学检测周期长，费时耗力，且不能区分菌株是否产毒。分离产气荚膜梭菌，然后检测α-毒素(plc基因)、NetB毒素(NetB基因)或编码毒素的基因，可证实动物肠道存在产毒菌株或毒素。细胞中和实验和产毒素培养被认为是检测艰难梭菌(Clostridium difficile)的金标准参考实验，亦可被用来检测同为梭菌属的产气荚膜梭菌的产毒能力。

目前，酶联免疫吸附试验常用于坏死性肠炎感染肉鸡的毒素水平检测，因其操作简单、特异性强、检测周期快等特点，得到广泛应用。分子诊断技术[如聚合酶链式反应(PCR)、核酸扩增检测(NAAT)等]已成为快速检测厌氧菌的新型检测方法。Fach等首先报告了PCR检测产气荚膜梭菌α-毒素的方法。至此，PCR技术被广泛用于产气荚膜梭菌毒素基因的检测。

（五）、防治措施浅析

1、饲养管理：

良好的饲养管理是预防和管控坏死性肠炎的有效工具。

在家禽饲料原料品质管理上，高含量的非淀粉多糖易引起坏死性肠炎，高水平的动物蛋白、脂肪和谷物也会改变肠道食糜的理化性质，影响肠道菌群，加速肠道产气荚膜梭菌的繁殖。

精氨酸也可以预防产气荚膜梭菌诱导的精氨酸缺乏症，促使肠道精氨酸转运和分解代谢正常化，下调JAK-STAT信号通路，降低炎症反应，改善肉鸡肠道健康。

此外，有研究表明，肉鸡限饲可控制坏死性肠炎病变的严重程度，减少盲肠产气荚膜梭菌的数量；限饲可改善肠黏膜微循环，防止黏膜坏死。

在生物安全管理上，需及时给肉鸡接种疫苗、避免球虫感染、防治霉菌毒素的危害。黄曲霉毒素会降低肉鸡的平均日增重和平均日采食量，导致饲料质量下降，最终导致肉鸡肠道损伤评分升高和死亡率增加。此外，黄曲霉毒素也是肉鸡生长抑制剂和免疫抑制剂。日粮中2 mg/kg 和4mg/kg黄曲霉毒素会导致肉鸡细胞免疫和体液免疫水平显著降低，2 mg/kg的黄曲霉毒素还会引起肝脏显著肿大。饲料中呕吐毒素在3000~4000 ug/kg 的污染水平，会使患亚临床坏死性肠炎的肉鸡百分比从(20±2.6)%增加到(47±3.0)%，呕吐毒素还会通过降低十二指肠跨上皮电阻和十二指肠绒毛高度，破坏肠道屏障结构与功能，从而引起肠上皮损伤。

在禽舍管理上，控制合理的饲养密度，饲养密度过高，密度应激会对家禽的体液免疫和垫料质量产生负面影响，加速垫料中产气荚膜梭菌和肠道有害菌繁殖；

舍内温湿度也是管理的重要内容，冷、热应激增加禽类患坏死性肠炎的风险，加重坏死性肠炎感染肉鸡的病症。

2、接种疫苗：

机体对产气荚膜梭菌的特异性和非特异性免疫力是控制坏死性肠炎的重要因素。

疫苗免疫是预防坏死性肠炎的有效措施。产气荚膜梭菌减毒活疫苗、常规福尔马林灭活疫苗、免疫原性蛋白及相关毒素成分制成的疫苗等已被用于家禽坏死性肠炎的预防。

3、抗生素治疗：

根据体外药敏试验结果，目前用于控制坏死性肠炎的抗生素一般包括阿莫西林、氨苄青霉素、亚甲基水杨酸杆菌肽、林可霉素、阿维霉素、四环素(金四环素和土四环素)、泰乐菌素和维吉尼亚霉素。

研究表明，与对照组肉鸡相比，日粮中添加抗菌肽Sublancin 的肉鸡十二指肠和空肠的绒毛高度与隐窝深度增加，回肠白细胞介素-13(IL-13)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平降低。与未接受林可霉素药物治疗的肉鸡相比，接受含活性为75mg/L 水的林可霉素肉鸡盲肠内产气荚膜梭菌计数比感染对照组显著降低。Paradis等研究发现，阿维霉素不仅可以控制肉鸡坏死性肠炎的发病率和死亡率，与对照组公鸡相比，阿维霉素还可以提高肉鸡的平均日增重和料重比。在确定药物治疗坏死性肠炎方案时，要考虑其他重要因素(如前期饲养管理、药物耐受性等)，规范用药，谨慎合理使用抗生素。

4、采用饲料添加剂预防：

饲用抗生素的滥用对动物和人类的健康和食品安全等带来了重大隐患。无抗时代，实现畜牧业绿色可持续发展，寻找替抗方案已成为行业热点问题。当前研究较深的替抗产品有益生菌、益生元、植物提取物、酶制剂、酸化剂等。这些替抗产品主要通过以下途径缓解或预防肉鸡坏死性肠炎。

● 调节肠道微生物菌群平衡。

据报道，口服地衣芽孢杆菌可调节肝脏基因表达，抑制免疫反应，促进肠道微生物群的生长和代谢。

● 保护肠道屏障结构和功能。

Song等研究表明，黄芪多糖可降低空肠隐窝深度，提高绒毛高度与隐窝深度比值，降低肠道炎性细胞浸润，提高紧密连接蛋白表达水平，改善肠道屏障结构与功能。此外，许多植物化合物对降低坏死性肠炎的发病率和严重程度的有效性已经得到研究。姜黄粉、丝兰花提取物、薄荷油、精油混合物已被证明可以成功预防坏死性肠炎。

● 激活和增强机体免疫能力。

补充含有罗伊氏乳杆菌、屎肠球菌、双歧杆菌、乳酸菌和低聚果糖的合生元增加了抗产气荚膜梭菌特异性抗体免疫球蛋白A(IgA)，并降低了鸡肠道中产气荚膜梭菌感染引起的肠炎的严重程度，改善了宿主对坏死性肠炎感染的防御能力。

● 抑制炎症因子及相关信号。

肉鸡日粮中添加有机酸(25.0%柠檬酸和16.7%山梨酸)和植物药(1.7%百里酚和1.0%香兰素)的微囊化混合物可以通过调节T细胞受体，肿瘤坏死因子(TNF)和核转录因子-kB(NF-kB)信号通路的变化以及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和y干扰素(IFN-y)细胞因子反应来降低肉鸡临床型坏死性肠炎相关的死亡率和肠道病变评分等症状。

（六）、小结与展望

坏死性肠炎是家禽常见的肠道细菌性疾病，结合流行病学调查、临床表现和肠道病变特征可初步诊断，结合病理学和细菌学诊断，可最终确诊。此外，本文浅析了坏死性肠炎防治措施，加强饲养管理，尽量避免动物应激；健全生物安全管理，做好严格的疫苗接种工作；做好饲料品质管理，防止霉变污染，以及添加使用绿色添加剂产品等措施，多种防治手段联合应用可有效改善动物肠道健康，减少家禽肠道疾病的发生。

来源：谭谈球虫，作者：谭校长