【分享】你是否能准确无疑的诊断坏死性肠炎？（中）

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接上篇：你是否能准确无疑的诊断坏死性肠炎（上）

从家禽小肠分离出产气荚膜梭菌的意义

产气荚膜梭菌既可以从正常小肠中分离到，也可以从受NE以外疾病影响的肠道中分离到。而且，即使在单个禽体内，正如脉冲场凝胶电泳（PFGE）所显示的那样，这些菌株通常也是多种类型的。在一项对死于NE以外疾病的肉鸡的研究中，91只鸡的56%的小肠内分离到了产气荚膜梭菌（Smyth & Martin, 未发表的观察结果）。因此，仅从小肠分离出产气荚膜梭菌并不能保证诊断为NE。但是，结合NE的特征性病理变化分离出产气荚膜梭菌，则能够做出诊断。

从鸡小肠中以纯培养或近乎纯培养的方式分离到netB阳性产气荚膜梭菌菌株，应高度怀疑NE。如果剖检者未检测到NE病变，则应对肠道进行组织学评估。证明产气荚膜梭菌分离株具有克隆性，同样应引起对NE的怀疑。

准确识别坏死性肠炎（NE）病变

要能够准确识别由产气荚膜梭菌引起的NE病变，必须熟悉家禽刚死亡时以及死亡数小时或数天后正常肠道的外观。由于自溶作用的影响，肠道是剖检检查中最难判读的器官之一，自溶可呈现多种多样的外观。在显微镜水平，自溶引起的变化在死亡后几分钟内就很明显，这给判读带来困难，并且可能被缺乏经验者误诊为病理变化。

正常肠道，包括自溶性和人为假象变化

宏观（大体）外观：与体型相似的哺乳动物相比，刚死亡鸡的正常肠道壁较厚，并且具有良好的平滑肌张力。在死后立即解剖的鸡中，十二指肠由于其血液供应丰富，通常颜色相当红，这可能被误认为是病理变化。这种红色会迅速消退，尤其是在死后立即采集样本的情况下。

平滑肌张力和收缩在死后几分钟内仍然明显，因此死后立即沿肠道纵向剪开时，肠道往往会外翻，甚至可能形成黏膜面朝外的管状结构。肠道黏膜面呈淡乳白色-粉红色，质地略有起伏。它很柔软，尤其是在十二指肠，用解剖器械很容易造成人为的凹陷和裂缝。

肠黏膜没有环状或纵行皱襞，表面是平坦的。偶尔可见红色和/或隆起的病灶（0.5–1厘米）（图1(a)），这些代表肠道相关淋巴组织（GALT）。随着死亡后时间的延长，由于自溶和气体积累使肠壁扩张和拉伸，肠壁会变薄。死亡后时间间隔增加，平滑肌张力常常会丧失。肠道可能因分解而呈现绿色变色，其分布可能呈斑片状。

图1. (a) 正常肉鸡回肠纵向剪开片段。组织边缘卷曲证明了良好的平滑肌张力。可见一个隆起的发红病灶，代表肠道相关淋巴组织（GALT）。任何此类发红病灶的边缘都应仔细检查是否有坏死的证据，例如本图后面所见。(b) 空肠近端至中段的纵向组织学切片。绒毛非常长，构成了肠壁厚度的大部分。(c) 十二指肠组织学切片。绒毛的表面上皮正从固有层分离，肠腔内有脱落的单个上皮细胞、上皮细胞团块和无定形的嗜酸性物质（箭头所示）。

这些变化都是自溶的结果；样本取自一只正常鸡，在安乐死后5至10分钟内收集并立即固定。

(d) 自然发生NE的鸡的空肠纵向剪开片段。黏膜弥漫性地呈现棕褐色颗粒状外观（坏死）；坏死组织牢固附着。(e) 鸡空肠纵向剪开片段。部分区域黏膜非常湿润、柔软且呈棕褐色。也有些区域，这种纤维蛋白坏死性物质已从表面脱落，暴露出相对平滑、有光泽的表面，组织学评估显示该区域已重新上皮化。(f) 多灶性坏死、溃疡和黏膜脱落。坏死黏膜呈棕褐色变色（黑色箭头）。溃疡基底发红（例如右上角），而重新上皮化的"火山口"样病变基底平滑有光泽（白色箭头）。在"火山口"和溃疡的边缘均可见明显的坏死。(g) 空肠组织学切片，NE。黏膜浅层呈显著嗜酸性（凝固性坏死），并通过一个密集的嗜异性粒细胞炎症带（箭头所示）与存活黏膜分离。坏死凝固物表面覆盖着一层厚厚的细菌（产气荚膜梭菌）（染成蓝色）。(h) 空肠一处薄壁区域的组织学切片。切片右半部分绒毛长度显著缩短，左半部分绒毛完全消失。隐窝拉长。



显微镜下（组织学）外观：组织学检查显示，禽类肠道壁的厚度主要源于非常发达的黏膜层。与哺乳动物相比，禽类肠道具有非常长的绒毛（图1(b)）。十二指肠的绒毛最长，沿着肠道向远端逐渐变短。在纵切面上，绒毛呈现经典的细长指状轮廓；而在横切面上，轮廓则更宽（这反映了绒毛，尤其是空肠和回肠的绒毛，呈叶片形状的事实），并且表面上皮可能呈现复层外观，特别是在切片略呈斜切时。上皮的这种复层外观是人为假象，不应判读为上皮增生。虽然制备横切片进行显微镜检查非常容易且因此颇具吸引力，但纵切片更佳。

肠道的显微镜下外观在死亡后几分钟内即发生非常快速的变化。上皮下间隙的形成是可检测到的最早变化，在颈动脉被切断后短短三分钟即可观察到。自溶性变化在近端小肠最为严重，在七分钟时已非常明显，包括绒毛裸露、上皮条带脱落和上皮细胞解离。图1(c)展示了鸡十二指肠的自溶性变化。即使是通过手术采集的（人类）黏膜活检组织中，绒毛表面上皮与固有层人为分离或局灶性上皮裸露也并非罕见，这归因于活检操作本身。

同样，在剖检采样过程中对肠道的粗暴处理会加剧这些必将发生的人为假象，并导致绒毛断裂。

在采集过程中不应触碰黏膜表面。自溶性变化在近端小肠（尤其是十二指肠）发生最为迅速；远端小肠似乎抵抗力更强。在试图从显微镜水平判读黏膜变化时，缺乏炎症性变化（例如纤维蛋白积聚或异嗜性粒细胞浸润/渗出）是证明这些变化属于人为假象的证据。至关重要的是，要采集（并检查！）在与实验组完全相同的条件下采集和处理的对照禽类的样本。根据本文作者的经验，即使采用标准化方法，不同禽只之间的自溶和人为假象变化程度也可能存在差异，因此，在就测试对象的发现下结论之前，对多只对照禽只进行评估非常重要。

未完待续

来源：鸡保姆，作者：琼·A·史密斯

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