lhwk521 发表于 2008-5-22 11:16:35

咨询血凝试验 和血凝抑制试验 的试验方法。和器材。大家帮帮忙，写的详细点，谢谢了

本人弄过这个试验。只是1年多没弄过这东西了。忘了。
谢谢大家了。！

lhwk521 发表于 2008-5-22 11:18:22

本人电话。0416-6991234   QQ 460958888
懂的帮帮忙，好心人。

胶东禽蛋 发表于 2008-5-22 12:40:44

我小试了一下，还有许多不解之处，望各位老师不吝赐教！

雾里看花 发表于 2008-5-22 12:58:01

血凝试验（微量法）操作规程

一、    目的：测定血凝滴度
二、    仪器：恒温培养箱、微量血凝板（V型96孔）、微量移液器（带吸头）、积液槽、吸耳球，记号笔、定时器。
三、    材料：0.85%生理盐水、0.5％鸡红细胞悬液、抗原。
四、    方法与步骤：                                             单位: μl
　孔       号    1    2    3    4    5    6    7    8    9    10    11    12
0.85%生理盐水


抗原

病毒稀释倍数

0.5%鸡RBC悬液    25   25   25      25      25   25   25      25      25   25   25      25


25   25      25      25   25   25   25      25      25   25   25       -
弃25
21      22       23       24      25      26      27      28       29      210   211   对照

25   25      25      25      25   25   25      25      25      25    25   25
用吸耳球轻轻吹打孔内使挂壁的液体混合，振荡1min，置37℃恒温培养箱中作用30min观察结果
结果举例    ＋    ＋    ＋    ＋    ＋    ＋    ＋    ±    ±    －    －    －
    （1）用微量移液器向反应板每孔分别加0.85%生理盐水25μl。
    （2）换一吸头吸取25μl抗原，加于第1孔的0.85%生理盐水中，并用移液器吸吹3～5次使液体混和均匀，然后取25μl移入第2孔,混匀后取25μl移入第3孔,依次倍比稀释到第11孔，第11孔中液体混匀后从中吸出25μl弃去。第12孔不加抗原，作对照。
    （3）换一吸头吸取0.5％红细胞悬液依次加入1～12个孔中，每孔加25μl。
    （4）加样完毕，用吸耳球轻轻吹打孔内使挂壁的液体混合，并置37℃恒温培养箱中作用30min取出，观察并判定结果。
五、结果判定及记录：将血凝板倾斜45°来观察，记录最后一个不流的孔号。
“＋”表示红细胞完全凝集。红细胞凝集后完全沉于反应孔底层，呈颗粒状，边缘不整或锯齿状，而上层液体中无悬浮的红细胞。
“－”表示红细胞未凝集。反应孔底部的红细胞没有凝集成一层，而是全部沉淀成小圆点，位于小孔最底端，边缘水平。
“±”表示部分凝集。红细胞下沉情况介于“＋”与“－”之间。

雾里看花 发表于 2008-5-22 12:58:47

血凝抑制试验（微量法）操作规程

一、    目的：测定被检样本的抗体水平，辅助诊断病毒性疾病，并作为适时免疫的辅助手段，能避免免疫失败、免疫空档及重复免疫造成的损失，指导被检样本所在场的生产。
二、    仪器：恒温培养箱、微量血凝板（V型96孔）、微量移液器（带吸头）、积液槽、吸耳球，记号笔、定时器。
三、    材料：0.85%生理盐水、0.5％鸡红细胞悬液、4单位抗原、待检血清。
四、    方法与步骤：                                                   单位:μl
孔号    1    2    3    4    5    6    7    8    9    10    11    12
0.85%生理盐水

待检血清（在第8排做阳性血清作对照）
待检血清稀释倍数
4血凝单位抗原    25   25   25      25   25      25      25   25      25   25    25    25

25   25   25      25   25      25      25   25      25   25    25　25

                                                                                 弃25
21      2 2   23       24      25      26       27      28      29      210      211   212                                                                                                                              

25    25      25      25      25   25      25      25   25      25      25   25
用吸耳球轻轻吹打孔内使挂壁的液体混合，置37℃恒温培养箱中作用10min。
0.5%鸡RBC悬液    25    25    25    25    25    25    25    25    25    25    25    25
置37℃恒温箱中作用30min观察结果
结果举例    －    －    －    －    －    －    ±    ±    ＋    ＋    ＋    －
    （1）用微量移液器加0.85%生理盐水，1～12孔各加25μl。
    （2）换一吸头取待检血清25μl置于第１孔的0.85%生理盐水中，吸吹3～5次混匀，吸出25μl放入第2孔中，然后依次倍比稀释至第12孔，并将第12孔的液体混匀后取25μl弃去。底下一排做阳性血清对照。
（3）用微量移液器吸取稀释好的4个血凝单位抗原，向1～12孔中分别加25μl。然后，用吸耳球轻轻吹打孔内使挂壁的液体混合，将反应板置37℃恒温培养箱中作用10min。
（4）取出血凝板，用微量移液器向每一孔中各加入0.5％红细胞悬液25μl，再用吸耳球轻轻吹打孔内使挂壁的液体混合，混和均匀。
（5）将反应板置37℃温箱中作用30min取出，观察并记录结果。
五、结果判断和记录：将血凝板倾斜45°来观察，记录最后一个流下的孔号。
“－”表示红细胞凝集抑制。高浓度的新城疫抗体能抑制新城疫病毒对鸡红细胞的凝集作用，使反应孔中的红细胞呈圆点状沉淀于反应孔底端中央，而不出现血凝现象。
“＋”表示红细胞完全凝集。随着血清被稀释，血清对病毒血凝作用的抑制减弱，反应孔中的病毒逐渐表现出血凝作用，而最终使红细胞完全凝集，沉于反应孔底层，边缘不整或呈锯齿状。
“±”表示不完全抑制。红细胞下沉情况介于“－”与“＋”之间。

lhwk521 发表于 2008-7-15 09:00:32

xiexie nin

iamahzhu 发表于 2008-8-3 18:02:26

请教如何根据血凝抑制的试验结果来判定被检血清中新城疫的抗体水平啊？ {:1_300:} ，行家帮忙啊！

同云共舞123 发表于 2008-12-26 10:23:53

为什么要放入37度的环境中啊？不是16度的环境就可以吗？

郭文 发表于 2009-3-24 19:08:09

谢谢
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