家禽传染病的血清学检验：血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验

佐君畜牧

                                    家禽传染病的血清学检验：血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验  


　　1．血凝抗原的制备： 血凝抗原制备因实验室和病毒不同而异。如新城疫病毒，接种9～11月日龄鸡胚尿囊腔，37℃孵育72～120小时收取尿囊液即可作为抗原，也可以使用IV疫苗来作为抗原。如应用灭活的浓缩抗原，既易保存，又避免了传染的可能，而且效价稳定。

　　2．血凝（HA）试验
　　（1）在“V”型微量反应板上进行。每孔加入50微升（用微量进样器或将16号注射针头磨去斜尖，调整针头孔径使每滴恰好25微升）pH 7.2的0.01摩尔／升PBS液或生理盐水，向第1孔滴加新城疫抗原50微升，吸放3～5次混匀，然后从第一孔吸出50微升加入第二孔，以相同方法混匀，再从第二孔吸50微升加入第三孔，如此做倍比稀释至倒数第二孔，再从倒数第二孔吸出50微升弃去，最后一孔不加病毒（抗原）作为红细胞对照。
　　（2）吸取1%鸡红细胞悬浮液，每孔滴加50微升，加毕后在微量振荡器上振荡15～30秒，使其混合均匀，静置室温下或37℃温箱中作用20～40分钟。
　　（3）当对照孔红细胞全部沉入孔底中间，即可判定各孔的红细胞凝集情况。以病毒最大的稀释度孔出现100％凝集现象者为这个病毒的凝集价，即一个血凝单位。

　　3．血凝抑制（HI）试验
　　（1）4单位抗原（病毒）的配制： 如上述血凝试验表中病毒的血凝价为第八孔（256，即1:256倍稀释），4个单位的病毒则除以4，即64倍（64）稀释即可。但实验室一般实际使用的抗原浓度也不尽相同，新城疫、禽流感病毒用4单位，支原体用2～4单位。
　　（2）取洁净的96孔微量反应板，编号后按血凝试验方法给1～12孔各加50微升稀释液。
　　（3）取被检血清（或已知阳性血清）50微升加入第一孔中，混合均匀，从第一孔吸出50微升加入第二孔，如此作倍比稀释到第十孔，从第十孔吸出50微升弃去，第十一孔不加血清，作为抗原对照，第十二孔不加血清和抗原作为红细胞对照。
　　（4）给1～11孔各加50微升4单位抗原，振荡混匀，置37℃温箱或室温作用20～30分钟。
　　（5）加1%红细胞悬液，每孔加50微升，置37℃作用20～30分钟观察结果。待第十一孔抗原对照孔的红细胞均匀铺在管壁（100％凝集），检查各孔的抑制情况。

　　4．判定标准和注意事项
　　（1）判定时首先应检查对照孔是否正确。如正确则证明各种条件及操作无误。
　　（2）红细胞凝集时，红细胞分散在管底四周呈界限明显的扣状凝集者判为阳性“＋”，无凝集或凝集抑制时，红细胞集于管底呈点状为阴性“－”。有些实验人员建议判定时倾斜血凝板，观察如有“泪滴痕”现象或管底流动现象者判定为阴性。凝集阴性的最大稀释倍数就是被检血清（或卵黄抗体）的抗体效价！
　　（3）判定时结果与温度和时间有关。温度高时，结果出现快，需要的时间短，温度低时，结果出现晚，一般需30分钟。
         注意：由于现在被检血清的抗体效价往往很高，甚至能达到12-14个效价，所以有时测定抗体时会使用到两排凝集孔，那样最好能设定两个对照孔，也就是倒数第2个孔（本血凝抑制试验所说的11孔）抗原对照和倒数第1个孔（也就是本试验所说的第12孔）的血球对照。如果仅仅只需要使用12个孔，则也可以不设血球对照孔。

蒋先生

传说中的实验室操作略述。。。

tianshi_a

收藏了  谢谢!

刘定章

能发上来就不错

（昨夜星辰）

学习了，谢谢。

问心无愧

实验室的工作是叙述起来很复杂，操作起来很直观。

理想在飞翔1

这些对我来说太复杂了

心甘情愿

就应该多一点这方面的帖子

红风儿

学习中

新疆游侠

学习。

107459642

辛苦了

难于上青天

学习了。

成熟男人

看了好几遍了这样的帖子很少看到  如果弱毒苗加油苗同时做一边  能维持多长时间    我这里做抗体不方便    只能听兽医说的大概时间   老师能给我提个最好的建议吗   先谢了

养鸡人陈利

学习了，

常老师

成熟男人:看了好几遍了这样的帖子很少看到  如果弱毒苗加油苗同时做一边  能维持多长时间    我这里做抗体不方便    只能听兽医说的大概时间   老师能给我提个最好的建议吗   先谢了 (2009-12-01 16:32)

这要看你养的什么鸡？