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发表于 2008-12-31 01:25:50
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来自： 中国天津
规模化商品肉鸡场新城疫免疫程序研究
规模化商品肉鸡场新城疫免疫程序研究
王文道,郑增义
(山东省蓬莱市畜牧兽医站, 蓬莱 265600)
鸡新城疫是由鸡新城疫病毒引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽和观赏鸟等的高度接触性、急性、致死性传染病。被国际兽医局（OIE）列为对动物危害最大的A类传染病。近年来，我国禽病学工作者在新城疫的诊断和防制上也做了大量的卓有成效的工作，研制成功了鸡新城疫油乳剂灭活苗，并在全国范围内大面积推广，取得了明显的经济效益，但免疫失败也常常发生，鸡新城疫仍然是我国家禽的头号疾病。因此，为适应大型集约化养鸡场的新特点，对鸡新城疫免疫程序作了进一步探索，现报告如下。
1 材料
1.1试验仪器 隔水式恒温培养箱（GNP-9080型，上海精宏实验设备有限公司）
LDZ4－0.8自动平衡微量离心机（北京医用离心机厂）
KQ－600DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;定时钟（北京环保仪器厂）;冰箱（BCD—2068 青岛海尔）
v型微量凝集板（ 北京市丰台区塑料制品厂 ）
1.2 试验材料
新城疫标准抗原，中国农科院哈尔滨兽医研究所提供。新城疫Ⅳ-传支H120二联弱毒疫苗，购自南京中牧股份有限公司。新城疫Ⅳ弱毒疫苗，购自南京中牧股份有限公司。国产新城疫油乳剂灭活疫苗（Ⅳ弱毒株灭活），购自青岛易邦公司。进口新城疫油乳剂PD50灭活疫苗（Ⅳ弱毒株灭活），购自意大利伊柔公司。
1.3试验动物 1日龄AA肉鸡，购自民和牧业有限公司。
1.4 试验饲料 全程饲料均购自民和饲料有限公司。
1.5 试验时间和地点: 2006年4月至2006年8月在蓬莱市兽医站化验室和蓬莱市某规模化商品肉鸡养殖场。
2 方 法
将6000只1日龄AA肉鸡随机分为6组，用新城疫弱毒疫苗和灭活疫苗单独或同时使用来防制鸡新城疫。采用不同种疫苗，不同的接种途径，不同的接种剂量，通过连续的观察记录，监测新城疫抗体水平，从而找到一条适合本地区实际的新城疫免疫接种程序。
2.1血凝抑制(HI)试验
2.2 免疫效果试验 将6000只1日龄AA肉鸡随机分为 6 组，每组1000只，各组按不同的程序进行疫苗免疫，按上述检测方法对不同日龄（1、21、35、49）鸡的抗新城疫病毒的抗体水平进行检测。各组免疫程序见表1.
1日龄
8日龄
14日龄
22日龄
第1组
新城疫Ⅳ-传支H120二联弱毒疫苗，1.5倍点眼
传染性法氏囊弱毒疫苗，2倍饮水
新城疫Ⅳ弱毒疫苗，2倍饮水
第2组
新城疫Ⅳ-传支H120二联弱毒疫苗，1.2倍点眼
新城疫Ⅳ-传支H120二联弱毒疫苗，1.5倍点眼
传染性法氏囊弱毒疫苗，2倍饮水
新城疫Ⅳ弱毒疫苗，2倍饮水
第3组
新城疫Ⅳ-传支H120二联弱毒疫苗，1.5倍点眼；国产油苗0.4ml颈部皮下注射
传染性法氏囊弱毒疫苗，2倍饮水
新城疫Ⅳ弱毒疫苗，2倍饮水
第4组
新城疫Ⅳ-传支H120二联弱毒疫苗， 1.2倍点眼
新城疫Ⅳ-传支H120二联弱毒疫苗，1.5倍点眼；国产油苗0.4ml颈部皮下注射
传染性法氏囊弱毒疫苗，2倍饮水
新城疫Ⅳ弱毒疫苗，2倍饮水
第5组
新城疫Ⅳ-传支H120二联弱毒疫苗，1.2倍点眼；进口油苗PD50 0.1ml颈部皮下注射
新城疫Ⅳ-传支H120二联弱毒疫苗，1.5倍点眼
传染性法氏囊弱毒疫苗，2倍饮水
第6组
新城疫-传支H120二联弱毒疫苗，1.2倍点眼；进口油苗PD50 0.1ml颈部皮下注射
新城疫Ⅳ-传支H120二联弱毒疫苗，1.5倍点眼
传染性法氏囊弱毒疫苗，2倍饮水
新城疫Ⅳ弱毒疫苗，2倍饮水
表1 各组鸡的免疫程序
3 结果与分析
各组鸡血凝抑制（HI）价结果见下表2.
表2不同免疫程序组鸡体抗NDV抗体效价 （nLog2）
1日龄
21日龄
35日龄
49日龄
第1组
7.21±0.93
3.38±0.82
5.13±1.54
3.96±1.33
第2组
7.17±1.01
3.79±1.02
5.33±1.31
4.25±1.11
第3组
7.17±1.09
3.92±1.35
5.58±1.32
5.42±1.38
第四组
7.21±0.98
4.17±1.34
5.71±1.27
5.67±0.96
第5组
7.17±0.96
4.21±1.14
5.63±0.71
5.08±0.72
第6组
7.21±0.88
4.25±1.15
5.75±0.99
5.96±0.86
对49日龄新城疫抗体滴度数据进行统计：用多重比较方法中最小显著极差法（LSR法）中q检验法进行检验，结果见表3.
第1组
第2组
第3组
第4组
第5组
第6组
第1组
0.29
1.46**
1.71**
1.12**
2.00**
第2组
0.29
1.17**
1.42**
0.83*
1.71**
第3组
1.46**
1.17**
0.25
0.34
0.54
第4组
1.71**
1.42**
0.25
0.59
0.29
第5组
1.12**
0.83*
0.34
0.59
0.88*
第6组
2.00**
1.71**
0.54
0.29
0.88*
表3统计结果
差异显著* 差异极显著** 差异不显著无标记
从表3可以看出: 5组、 6组与3组、4组差异不显著，说明进口油苗PD50和国产油苗免疫后抗体水平差别不大，但是整齐度要优于国产油苗;6组与5组差异显著说明，在22日龄鸡体抗NDV抗体效价 （nLog2）为4～5之间时加强免疫，49日龄抗体更高; 3、4、6组与1、2组差异极显著，5组与1组差异极显著，5组与2组差异显著说明，新城疫灭活疫苗与弱毒疫苗联合使用比单纯用弱毒疫苗免疫的抗体水平要高，并且比较整齐。
4 讨 论
4.1 1日龄雏鸡新城疫灭活苗的选择：因为雏鸡有母源抗体，比成年鸡需要更高的抗原含量，加之雏鸡不能接受太多的矿物油，因此疫苗注射剂量要求很少。普通油苗无法在保护力和疫苗的注射剂量间获得平衡，进口油苗PD50解决了此矛盾。抗原浓度高：0.1mLPD50疫苗的抗原含量要高于0.5mL普通油苗15倍剂量的抗原含量，使雏鸡获得足够的抗原，提供理想的保护；PD50不受母体抗体的影响：高抗原含量足以突破母源抗体的干扰，发挥最佳的免疫效果。
4.2 对于需要加强免疫时的抗体滴度，研究认为在鸡体抗NDV抗体效价 （nLog2）为4～5之间,因此根据抗体效价的检测结果适时调整免疫程序。
4.3母源抗体存在可以给雏鸡提供前期的保护，但是，对及时、有效确定首免日龄造成了困难。若首免日龄不恰当，母源抗体会对活毒疫苗免疫产生干扰，使首免难以产生有效的保护。对3组和4组21日龄鸡新城疫抗体平均值进行t检验差异不显著（P>0.05）说明4组1日龄首免21日龄鸡新城疫抗体并不高于3组1日龄不免 ,同时根据上表3组和4组49日龄鸡新城疫抗体平均值进行q检验差异不显著说明1日龄首免体液抗体并不高。但一个合理的新城疫免疫程序应该既要考虑到母源抗体干扰作用，又要兼顾局部粘膜免疫，根据本次试验结果，推荐在1日龄左右进行首免比较合适。
4.4 新城疫 HI抗体滴度是衡量机体对该病毒侵袭时抵抗力强弱的一个比较容易检测到的有参考价值的指标，但不是一个绝对保险的指标。因为除了HI抗体之外，中和抗体及存在于呼吸道、消化道、生殖道粘膜上的分泌型抗体，在免疫力(尤其是局部免疫)方面发挥极其重要的作用。
4.5任何免疫程序的保护率都不可能达到100%，新城疫防制是一个综合体系，除了制定合理的免疫程序外，还应重视饲养管理和生物安全。
5 结 论
5.1进口油苗和国产疫苗免疫后抗体水平差别不大，但是整齐度要优于国产油苗。
5.2新城疫灭活疫苗与弱毒疫苗联合使用比单纯用弱毒疫苗免疫的抗体水平要高，并且比较整齐。
5.3程序四和六的新城疫抗体水平较高而且整齐，免疫空白少，建议在实践中采用。
如何提高新城疫免疫效果
鸡新城疫（ＮＤ）是对养鸡业危害极大的一种传染病，近年的流行方式已由急性大批发生转为散发，症状由典型转为非典型。笔者认为，此病的发生主要与母源抗体、疫苗选择、免疫程度和环境污染等方面有关。要提高ＮＤ的免疫效果，必须采取综合防制措施，主要应从以下几个方面入手： 一、正确认识ＮＤ疫苗，摆正油佐剂灭活苗与弱毒苗的地位 现在用于ＮＤ免疫的疫苗很多，主要有Ⅰ系、Ⅱ系、ＮＤW、克隆、油佐剂灭活苗等，其各有各自的特点： １．Ⅰ系属中等毒力疫苗。免疫期长达１年，从现论上讲有返强的可能。由于雏鸡多带母源抗体，所以未见致病，但对产蛋高峰的鸡使用有一定的影响。 ２．Ⅱ系属弱毒苗。对雏鸡无不良影响，多用于首免，尤其适用于母源抗体水平不齐的鸡群，但保护力不强，免疫期短，如遇强毒感染，对鸡群不能完全保护。 ３．ＮＤ鼠疫苗。为中等偏弱毒株，是从ＮDW株选毒出来的新型疫苗，它的毒力比Ⅱ系强，适于雏鸡首次气雾免疫。 ４．克隆化疫苗。现在市场上的进口苗有克隆Ｎ-３０和克隆Ｎ-２９两种，国产的有克隆Ｎ-８３、Ｎ-88两种。这种苗在国外已广泛应用，但价格较高，国内应用不多。 ５．油佐剂灭活疫苗。目前国内外各厂家都有生产，许多非定点生产的单位也有生产，它有以下特点：①不扩散病毒；②单独使用需２０天才产生免疫力；③免疫产生的抗体高于活毒疫苗并且维持时间长，可以维持３0～４０周。但油佐剂灭活疫苗的造价高。 现在有些鸡场只重视油乳剂灭活疫苗而忽视弱毒疫苗的作用，认为一次油苗保上笼，这种做法是不科学的。虽然油佐剂苗可产生较高水平的抗体，有较好的保护作用，但其接种缺乏细胞免疫和局部的粘膜免疫，即使ＨＩ抗体较高，强病毒仍能感染并能在消化道、呼吸道粘膜局部繁殖，而弱毒活疫苗则能刺激鸡体产生细胞免疫和体液免疫，增强局部免疫反应，由此产生的局部抗体和局部免疫细胞在控制ＮD感染上是十分有效的。所以，进行油乳剂疫苗免疫时应有弱毒苗作基础，免疫应以弱毒疫苗为主，油乳剂灭活疫苗适当配合。 二、设计科学合理的免疫程序，提高免疫应答的整齐度，避免“免疫空白”和“免疫麻痹” 在设计免疫程序时，第一要了解母源抗体水平，确定最佳首免日龄；第二是依本场发病史调整原免疫程序；第三是针对雏鸡的大小选择恰当的疫苗；第四要搞好强化免疫，提高免疫的覆盖面；第五是注射各种疫苗要保持适当的间隔，以免互相干扰；第六要根据实际情况选择恰当的接种途径并正确操作，免疫剂量不可随意加大，以免产生免疫麻痹。常用的免疫程序： １．在７日龄时用Ⅱ系首免，２０日龄用Ⅰ系二免，鸡上笼时用油乳剂疫苗注射。这是最常用的免疫程序，但问题是7日龄时大多数鸡的母源抗体没有降到1∶4０以下，疫苗病毒被中和而失效，免疫以后还有１0天左右的易感期，此期间还有可能感染。在２０日龄二次免疫以后也有７天左右的易感期，所以在此种程序中要加强首免及二免后的易感期内的管理。另外，产蛋５个月后再作一次Ⅰ系疫苗免疫，这样效果更好。 ２．在１日龄时用Ⅰ系疫苗首免。这是近几年推广的新程序，多用于肉仔鸡，但在使用中，发现有一些缺陷：①如果雏鸡母源抗体高于1∶200时，Ⅰ系疫苗会被母源抗体干扰，失去保护作用。②如果母源抗体低于1∶2０雏鸡反应较大。所以应用Ⅰ系疫苗１日龄首免时应先做母源抗体的监测，母源抗体在1∶２0～１：２00之间时才能应用。 ３．在１日龄使用弱毒苗和油乳剂疫苗首次免疫，上笼时再注射油乳剂疫苗。使用这个程序的优点是抗体上升较快，免疫后易感期可以缩短２～３天，免疫抗体水平高，保护力也强，是目前最好的免疫程序。但有的鸡群保护力不能维持到１４０天，到９０天左右部分抗体滴度已下降到１∶4０以下，易发生非典型ＮＤ，因此，可于１３周龄时用ＮＤW疫苗气雾免疫一次。 三、搞好抗体监测。认识ＨⅠ抗体与保护率的关系 对于鸡群来说，应定期做免疫抗体监测。一般当机体进行免疫后７～１０天会产生免疫抗体，当抗体上升达到两个滴度以上时说明免疫成功，监测时间为弱毒活疫苗免疫后７～１０天，灭活苗免疫后１４～２１天，监测频率是弱毒活疫苗抗体监测不超过１个月，灭活疫苗不超过２个月。一般弱毒疫苗免疫后ＨＩ滴度较低，而１：６４油佐剂灭活苗免疫水平较高，一般在1∶１０２４。而雏鸡的临界免疫抗体水平是1∶１６，当抗体水平在１∶1６以下时要马上进行免疫。 近年有的雏鸡免疫抗体在1∶6４以上还有发病现象，这主要原因是因为测得的ＨⅠ抗体不是新城疫的惟一抗体，还有分泌性抗体ＩgA，HI抗体只有血凝作用，而没有真正的中和保护作用，两种抗体呈正相关而不成正比，因此在生产中ＨＩ抗体只能作参考，并不是绝对的。 四、加强管理，增强机体抵抗力，预防应激因素的发生 加强鸡群的正常管理，供给鸡只全价日粮，满足其营养需要。许多资料表明，蛋白质营养不良、氨基酸缺乏均能引起免疫抑制，缺乏缬氨酸时新城疫免疫的ＨＩ抗体降低；锌、铁、硒等矿物质对机体的抵抗力、免疫机能起重要作用，当缺乏时会引起免疫抑制。另据试验表明，维生素Ａ、E、Ｃ等对体液免疫、细胞免疫均有影响，缺乏时也会使抗体效价降低。 应激因素将使鸡只发生一系列生理变化，体内肾上腺素分泌增多，使血中淋巴细胞减少，同时蛋白质的分解代谢增强，用于产生免疫球蛋白的原料相对减少，导致抗体形成减少；应激使法氏囊、胸腺功能下降，而造成抗体产生能力下降，因此一定要减少或避免应激因素的发生，不可避免的情况下在饲料中添加维生素Ｅ、Ｃ及氯丙嗪、赐益、速补１４等抗应激药物，以提高机体抵抗力，增强特异抗体的产生。 |
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