出口肉禽接种新城疫活疫苗后排毒规律的研究

可兽医

出口肉禽接种新城疫活疫苗后排毒规律的研究 孙泉云，张苏华，周锦萍，沈悦，鞠龚讷（上海市畜牧兽医站201103） 文章来源：中国家禽

摘要：选择上海某养禽公司不同新城疫免疫程序的出口肉鸡场的鸡群，分别于免疫后不同时期采集喉气管和泄殖腔棉拭样品及屠宰后胸肌组织样品，接种于SPF鸡胚进行病毒分离，并以HA和HI试验、ICPI试验及PCR试验进行鉴定。结果表明，鸡群免疫弱毒疫苗后至少排毒2周以上，不同免疫程序则鸡群排毒情况存在差异，因而出口肉鸡实施合理科学的免疫程序非常必要。
关键词：鸡新城疫；弱毒疫苗；排毒；病毒分离和鉴定
新城疫（ND）是由新城疫病毒所引起的养禽业的烈性传染病，为世界动物卫生组织（OIE）规定于国际贸易间必检的A类传染病。欧盟和日本、韩国等均以从我国出口禽群中分离到新城疫病毒而停止了对我国的禽类进口贸易，给我国养禽业造成了严重的经济损失，而这其中不少是由新城疫的疫苗毒株所引起。为此，组织实施对上海市出口鸡新城疫活疫苗排毒规律及感染状况的调查研究和针对性摸底检测。
1材料
1．1 SPF种蛋
由北京梅里亚维通实验动物技术有限公司提供。
1．2 血清
ND、鸡产蛋下降综合征（EDS）、禽流感（AI）阳性血清和抗原，由哈兽研提供。
1．3 ND弱毒疫苗
分别来自于英特威公司、梅里亚公司等。
1．4试验鸡
来源于上海申藤畜禽有限公司的4个出口肉鸡场，品种为AA肉鸡。
2方法
2．1出口肉鸡的免疫程序
2．1．1  A组免疫程序（149鸡场和118鸡场）
3日龄  MA5＋CL30滴眼（英特威公司）；
18日龄Lasota胸肌注射（梅里亚公司）。
2．1．2 B组免疫程序（184鸡场和140鸡场）
10日龄 MA5＋CL30＋ Lasota滴眼（梅里亚公司）；
21日龄Avinew饮水免疫（梅里亚公司）
2．2鸡棉拭样品及组织样品的采集
每一鸡场的鸡群按比例随机抽样，每次取样12只份，分别于鸡群免疫后10d．14d和18d采集鸡喉气管和泄殖腔棉拭样品，以无菌棉拭子刮取鸡喉气管、泄殖腔上皮粘膜组织和内容物，置于内含双抗的lmL 0．01M  pH 7.4 PBS管中。组织样品于该批鸡上市屠宰后采集胸部肌肉25—30g，置于样品袋内冻存备用。
2．3病毒分离
2．3．1样品处理
棉拭样品经眼科镊挤压后以2000g离心20min，取上清双抗处理后待用。胸肌组织样品加无菌PBS（0.01M pH7．2）剪碎研磨后制成10％悬液，冻融3～4次后置超声波裂解仪中作用4min，室温放置l～2h，4000r/min离心20min，取上清加双抗（1000IU/mL）处理后冻存备用。
2．3．2鸡胚接种试验
取上述样品上清液接种于9日龄SPF鸡胚尿囊腔，每个样品接种5个鸡胚，0．2mL／个，置37℃温箱孵育，弃去24h内死亡鸡胚，以后按时观察并随时取出死亡鸡胚，至96h未死亡鸡胚则置于4℃冰箱冻死，采集尿囊液进行HA和HI试验，共盲传2代。
凡出现HA阳性者采用HI试验分别以新城疫、EDS和禽流感抗血清进行鉴定。
2．4  1日龄雏鸡脑内致病指数（ICP）的测定
用无菌PBS将每份有HA活性的尿囊液10倍稀释后分别经脑内接种1日龄SPF雏鸡10只，剂量为0．05mL／只，接种后分别隔离饲养，每日观察发病及死亡情况，连续8d，正常者记为0，发病者记为1分，死亡者记为2分。统计每次观察每只鸡的平均记分值计算ICPI值，另设10只仅注射生理盐水的1日龄雏鸡作对照。
2．5 RT－PCR试验
由扬州大学协助完成。通过PCR方法扩增NDV分离株的HN基因并进行基因测序，与NDV疫苗毒株进行同源性比较分析。
3结果
3．1鸡胚接种试验
鸡胚接种后均未出现死亡，绝大多数鸡胚未见明显病变，仅极个别鸡胚出现体表充、出血等致病性变化。各组免疫后10d和14d鸡群的棉拭样品的鸡胚尿囊液均能凝集鸡红细胞，HA效价为2[sup]1-6[/sup]。所有HA阳性尿囊液都能被ND特异性抗血清所抑制，而不与EDS和禽流感抗血清发生特异性反应。所有胸肌样品未检出HA阳性。棉拭样品鸡胚接种后的HA阳性数量和效价见表1。   
[sup]3．2致病指数测定
经检测，1日龄雏鸡脑内致病指数（ICPI）范围为0．25－0．375。对照组雏鸡观察8d均未发病。
3．3 KT—PCR鉴定
使用特异性PCR引物进行基因扩增，表明分离株与ND疫苗毒株产生特异性条带。经核苷酸序列及氨基酸序列的同源性分析，证实分离株与疫苗毒株具有很高的同源性（99％以上）。
4小结与讨论
经对肉鸡棉拭样品和胸肌样品的鸡胚接种，表明分离毒株能凝集鸡红细胞，并可被特异的ND阳性血清所抑制，结合ICPI试验测定结果，确认所分离病毒为低毒力NDV，通过RT－PCR试验的鉴定分析，表明分离株与ND疫苗毒林有很高的同源性。
根据试验，我们认为出口肉鸡上市前20－25d不要进行新城疫弱毒苗的免疫。饮水免疫较之于其它免疫途径更具广嗜性，因此新城疫最后一次免疫方式宜采用胸肌注射接种，以降低新城疫疫苗毒检出的可能性。
经我们对试验鸡场的分析指导，发现他们原先制定及普遍实施的B组免疫程序存在明显的欠缺和不合理，25批出口肉鸡群进行NDV检测，16批被检出阳性。后经采用我们推荐的A组免疫程序，之后35批出口肉鸡群的NDV检测均为阴性，可见实施科学免疫的重要性。

问心无愧

总结一点，注射免疫的排毒量少于饮水，更安全。这贴有很好的指导作用，谢谢可兽医

禽福星

出口也是看出口哪个国家，不同国家的壁垒是有所不同的，出口欧盟、美国的鸡千万别用NDI系

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好贴 学习了 ！