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日志

血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI)

已有 189 次阅读2010-11-5 09:29

1、血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI)
  某些病毒,如正粘病毒、副粘病毒,在病毒表现具有血凝素,可以凝集某些红细胞,这一特性可被相应抗体所抑制。血凝试验一般用于分离具有血凝特性病毒的常规检测方法和进行血凝抑制试验时血凝单位的确定;血凝抑制试验有两方面的用处,一是应用标准病毒液测定血清中的相应抗体,二是应用特异性抗体鉴定新分离的血凝性病毒。
2、免疫琼脂扩散试验(AGID)
  抗原、抗体在含有电解质的琼脂凝胶中可以向四周自由扩散,当抗原、抗体至适当部位相遇时,产生特异性结合物,出现肉眼可见的沉淀线。可以用此试验测定未知的抗原或抗体。
3、补体结合试验(CFT)
  可溶性抗原,如蛋白质、多糖、类脂质、病毒等,与相应抗体结合后,其抗原抗体复合物可以结合补体,但这一反应肉眼不能察觉,如果再加入致敏红细胞(溶血系),既可根据是否出现溶血反应判定反应系中是否存在相应的抗原和抗体。本方法因操作繁琐,影响试验结果的因素多,加之红细胞需新鲜配制,补体不易保存,难以制成标准化试剂盒,现正逐渐被其它敏感简易的试验所替代。
4、病毒中和试验(VN)
  病毒与相应抗体结合后,使病毒不能吸附或穿入易感细胞,丧失了破坏细胞的能力,抑制CPE的产生。用病毒中和试验定量检测抗体是经常使用的血清学方法。应用已知抗血清,可很好地鉴定未知病毒和区分不同血清型的病毒。该试验分两部分,一是病毒中和部分,即经适当稀释的病毒和血清混合,在一定温度下作用一段时间;二是用适当的宿主系统(如鸡胚、实验动物、细胞)检测未被中和的残余病毒。
5、凝集试验
  细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后,在有电解质存在时,抗原颗粒互相凝聚成肉眼可见的凝集小块,成为凝集反应。参与反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。
  直接凝集试验可分为玻片法和试管法。玻片法为一种定性试验。将含有已知抗体的诊断血清与待检菌悬液各一滴在玻片上混合,数分钟后,如出现颗粒状或絮状凝集,即为阳性反应。此法简便快速,适用于新分得细菌的鉴定和分型。如沙门氏菌的鉴定、血型的鉴定多采用此法。相反,也可用已知的诊断抗原悬液检测待检血清中是否存在相应抗体,如布氏杆菌和鸡白痢检测。试管法为一种定量试验,用于检测待测血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的含量,以用于临床诊断或供流行病学调查。
6、间接血球凝集试验
  红细胞经鞣酸或其它偶联剂处理后能吸附抗原或抗体,应用丙酮和甲醛固定的红抗体或抗原时就可发生凝集。材料准备抗原(即致敏红细胞),对照阳性和阴性血清从指定单位购得。稀释液常用的稀释液为生理盐水或PBS ,加入最终浓度为1%的健康兔血清。反应板"V"型孔底的微量血凝反应板。
7、酶联免疫吸附试验(ELISA)
  近几年酶联免疫吸附试验(ELISA)已取得很大的发展,并得到广泛应用,现已成为动物疫病检测的常规手段。该技术简便、安全、敏感、而且快速。
  抗原和抗体结合是免疫学的基本反应,具有高度特异性。酶催化底物形成可溶性或不溶性有色产物,则是酶的固有特性。当酶与抗原或抗体结合后,使结合物(酶标记结合物)同时具备了上述两种特性。当形成酶标记免疫复合物后,结合在免疫复合物上的酶在遇到相应底物时,使无色底物转生成可溶性或不可溶性的有色物质。有色物质的出现客观地反映了酶的存在。根据有色产物的有无及其浓度,即可间接推断被检抗原或抗体是否存在极其数量,从而达到定性或定量测定的目的。
  酶联免疫吸附试验的核心是利用抗原抗体的特异性吸附,在固相载体上象搭积木一样层层叠加,最上一层必然联系着酶。整个反应都必须在抗原抗体结合的最适条件下进行。酶联免疫吸附试验的方法主要有以下几种:间接法(用于测定抗体);夹心法(用于测定大分子抗原);竞争法(用于测定小分子抗原及半抗原);双夹心法(用于检测多种大分子抗原)。
8、免疫荧光试验
  将抗原或抗体标记上荧光素,再进行抗原抗体反应。由于荧光素在紫外线的照射下能激发出可见的荧光,因此荧光的出现就说明标记物的存在,同时也反映了抗原或抗体的存在。免疫荧光试验有直接法和间接法。
9、聚合酶联反应
聚合酶联反应(PCR)可用于扩增诊断材料中病毒的基因片段。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程(碱基配对和半保留复制原则),其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
  ①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右,经一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
  ②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
  ③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的"半保留复制链",而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

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