鸡胰腺交感传出神经元的分布研究

猪年

刘学荣[sup]1，2[/sup]，蒙学莲[sup]3[/sup]，刘　英[sup]1*  [/sup]

（1．甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070；2.中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州730046；3.中国农业科学院兰州兽医研究所，甘肃兰州 730046）   

摘　要：用霍乱毒素结合辣根过氧化物酶逆行追踪法对鸡胰腺的交感传出神经元的定位进行了研究。结果表明，鸡胰腺的交感传出神经元位于双侧的肾上腺神经节、内脏神经节和T3-T7交感干神经节，在交感干神经节中集中分布节段在T5交感干神经节。
关键词：交感传出神经元；胰腺；辣根过氧化物酶标记法；鸡
1869年，Langerhans在发现胰岛时，即已经注意到胰岛具有丰富的神经支配[sup][1-2][/sup]。免疫组化法的研究发现哺乳动物胰腺的神经分布相当丰富。随着神经束示踪技术的发展，人们曾用顺行和逆行追踪法从不同角度研究了猫[sup][3-4][/sup]和大鼠[sup][5-7][/sup]胰腺的神经元分布情况，支配哺乳动物胰腺的交感节后神经元主要分布在双侧腹腔神经节和T5-L2或T5-L7交感干神经节。
禽类的胰腺位于十二指肠降袢和升袢之间的系膜内[sup][8][/sup]，前人用大体解剖的方法观察到，禽类的胰腺和十二指肠接受同一神经丛——胰-十二指肠神经丛的支配。该神经丛起自腹腔神经丛，左右迷走神经延伸到胃十二指肠区后，合并成一短支，并与腹腔神经丛交通[sup][9][/sup]。而对于禽类胰腺的神经元定位还未见报道，本研究用霍乱毒素结合辣根过氧化物酶(CT-HRP)逆行追踪法研究了鸡胰腺交感传入神经元的定位情况，为比较解剖学增添了新资料。
1　材料与方法
1.1　材料
实验动物选用体重1.5  kg～2.5  kg的成年母鸡11只(甘肃黄鸡)，临床检查正常。其中在胰腺右侧注射CT-HRP的6只，在胰腺左侧注射CT-HRP的5只。
霍乱毒素结合辣根过氧化物酶(CT-HRP)为中国协和医科大学人体解剖教研室产品；四甲基联苯胺(TMB)为Fuka，AG，CH-9470Buchs，瑞士分装。
1.2　方法
1.2.1　麻醉　手术前用20%的乌拉坦(氨基甲酸乙酯，C[sub]9[/sub]H[sub]7[/sub]O[sub]2[/sub]N)水溶液，剂量5  mL/kg体重，经腹腔或静脉注射麻醉。
1.2.2　注射　右侧卧位保定动物，在手术部位去毛、消毒。从胸骨后内侧突起，在肋弓下方向后切开皮肤约8  cm，将腹壁各肌肉和腹膜分层分开，暴露胰腺和十二指肠袢，从创口拉出胰腺和十二指肠袢，将100  μL 100 g/L CT-HRP溶液分点注射在胰腺左侧或右侧的外膜下和实质内。酶注射完毕后，关闭腹腔并进行术部消毒，包扎创口。
1.2.3　取材　术后动物存活4  d～5  d后，经左心室依次灌注下列溶液：①9  g/L的生理盐水250  mL～300  mL(PBS 0.1 mol/L，pH 7.4)；②2%多聚甲醛-1.25%戊二醛-0.1  mol/L磷酸缓冲液(pH 7.4 4 ℃)1 000 mL；③100 g/L蔗糖-0.1  mol/L磷酸缓冲液(pH 7.4，4  ℃)500 mL。整个灌注过程约在1  h内完成。随即取下双侧胸、腰和荐段交感干神经节、内脏神经节、肾上腺神经节和腹腔神经节。将材料编号放入100  g/L蔗糖磷酸缓冲液中，置4  ℃冰箱中过夜。
1.2.4　染色及观察　将所取材料制成50  μm厚的连续冰冻切片，贴片按四甲基联苯胺(TMB)法[sup][9][/sup]染色。风干后，再经10  g/L中性红复染，脱水、透明、封片。光镜下观察，并按每个脊神经节统计全部标记细胞。
2　结果
2.1 HRP注入鸡胰腺的右侧壁后，交感节后神经元标记细胞的分布情况  
HRP注入鸡胰腺的右侧壁共6例，结果交感神经节中共出现标记细胞3  853个，平均每例642.2个。位于右侧的标记细胞占标记细胞总数的62.3%，位于左侧的占37.7%。出现在肾上腺神经节的标记细胞最多，占标记细胞总数的59.3%；出现在交感干神经节和内脏神经节的标记细胞各占25.5%和15.2%，交感干神经节的次之，内脏神经节的最少(表1)。
   

表1 CT-HRP分别注入鸡胰腺右侧和左侧壁后标记细胞在交感节后神经节中的分布

Table1 The labeled cells in sympathetic  postganglia when CT-HRP  injected into the right  and left side  of pancreas   

  

注射部位 交感节后神经元STG 内脏神经节SG 肾上腺神经节AG                  Injection site  T R L  R L R L

右侧（6例）R 535 445 339 248 1527 758                   T 3853 980 587 2285

% 100 25.5 15.2 59.3

左侧（5例） L 236 182 308 328 225 462

T 1741 418 636 687                  % 100 24.0 36.5 39.5

  注：①“L”表示左侧；②“R”表示右侧；③“T”表示合计。
Note：①“L” means Left；②“R” means Right；③“T” means total.  
   
交感干神经节中共出现标记细胞980个，位于右侧标记细胞占54.6%，左侧的占45.4%，两侧差异显著(P＜0.05＝。这些标记细胞主要分布在位于T3-T7的各交感干神经节中，标记细胞的峰值位于T5交感干神经节。标记细胞多成群分布于交感干神经节的周边，且多位于交感干神经节的下角端部(表2，图1)。

表2 HRP分别注入鸡胰腺右侧和左侧壁后标记细胞在交感干神经节中的分布

Table 2 The labeled cells in sympathetic  trunk ganglia when  CT-HRP  injected into  the right and  left side  of pancreas

  

注射部位                  Injection site	T1                  R L	T2                  R L	T3                  R L	T4                  R L	T5                  R L	T6                  R L	T7                  R L	LS1-12                  R L	T                  R L
右侧注射（6例） R	0 0	4 1	40 36	152         128	163         138	143         110	33 32	0 0	535         445
T	0	5	76	280	301	253	65	0	980
%	0	0.5	7.8	28.6	30.7	25.8	6.6	0	100
左侧注射（5例） L	0 0	0 1	23 11	42 37	97 82	69 49	5 2	0 0	236 182
T	0	1	34	79	179	118	7	0	418
%	0	0.2	8.1	18.9	42.8	28.2	1.7	0	 

注：①“L”表示左侧；②“R”表示右侧；③“ T”表示合计；④“T1-7”表示胸段段交感干神经节；⑤“LS1-12”表示腰荐段交感干神经节。
Note：①“L” means Left； ②“R” means Right；③“T” means total；④“T1-7” means sympathetic trunk ganglia in the thorax segment；⑤“LS1-12” means sympathetic trunk ganglia in the segment LS1-12.
 
 
肾上腺神经节中共出现标记细胞2 285个，其中位于右侧的标记细胞占66.8%，左侧的占33.2%，两侧差异显著(P＜0.05)。肾上腺前后端和外侧面的神经节中都有大量的标记细胞，绝大多数标记细胞分布在肾上腺包膜下的神经节中，肾上腺实质中很少发现有标记细胞，标记细胞密集分布于整个神经节内(图2)。
内脏神经节中共出现标记细胞587个，其中位于右侧的标记细胞占57.8%，左侧的占42.2%，两侧差异显著(P＜0.05）。标记细胞成群分布于神经节的中部(图3和图4)。

                                 

 

图1 T5交感干神经节的标记细胞(100×)

Fig.1 The labeled cells located in T5 sympathetic trunk ganglia(100×)

 

                               

图2　肾上腺神经节的标记细胞(100×)

Fig.2 The labeled cells located in adrenal ganglia(100×)

                                

图3　内脏神经节的标记细胞(200×)

Fig.3 The labeled cells located in splanchnic ganglia(200×)

                                  

图4　内脏神经节的标记细胞(200×)

Fig.4 The labeled cells located in splanchnic ganglia(200×)

 
2.2 HRP注入鸡胰腺左侧壁后，交感节后神经元标记细胞的分布情况
将HRP注入鸡胰腺左侧壁的共5例试验。结果在交感神经节中共出现标记细胞1 741个，平均每例出现348.2个。出现在肾上腺神经节中的标记细胞最多，占标记细胞总数的39.5%，出现在内脏神经节和交感干神经节中的标记细胞各占36.6%和 24%，内脏神经节的次之，交感干神经节的最少(表1)。
交感干神经节中共出现标记细胞418个，位于右侧的标记细胞占56.5%，左侧的占43.5%，两侧差异显著(P＜0.05)。这些标记细胞主要分布在位于T3-T7的各交感干神经节，标记细胞峰值在T5交感干神经节(表2)。
肾上腺神经节共出现标记细胞687个，位于右侧的标记细胞占33.2%，位于左侧的占66.8%，两侧差异显著(P＜0.05)。
内脏神经节中共出现标记细胞636个，位于右侧的标记细胞占51.6%，位于左侧占48.4%，两侧差异不显著(P＞0.05)。
3　讨论
关于胰腺交感传出神经元的分布，有文献报道过大鼠和猫的交感传出神经元的定位特点。用True blue逆行标记法研究发现，大鼠胰腺的交感传出神经元主要分布在腹腔神经节[sup][5-7][/sup]。而用HRP法研究猫胰腺交感节后神经元的定位时发现，猫胰腺的交感传出神经元分布在双侧腹腔神经节和T5-L2[sup][3][/sup]或T5-L7[sup][4][/sup]交感干神经节，以前者为主。胰腺左右两侧的交感节后神经元的分布无差异[sup][3][/sup]。Yasuhiko[sup][4][/sup]用HRP和WGA-HRP混合液追踪研究猫胰腺交感节后神经元时发现，胰腺脾叶和胰腺十二指肠叶的交感节后神经元的分布有差别，即支配胰腺脾叶的交感节后神经元以来自左侧的占优势；支配十二指肠叶的交感节后神经元以来自右侧的占优势。这可能与猫胰腺各叶的解剖位置有关。
本试验用HRP法研究发现，鸡胰腺的交感传出神经元位于双侧的肾上腺神经节、内脏神经节和T3～T7交感干神经节，在交感干神经节中集中分布节段在T5交感干神经节。支配鸡胰腺的交感节后神经元以位于肾上腺神经节的为主，占标记细胞总数的53.1%。无论在胰腺的左侧还是在右侧注射HRP，出现在交感干神经节和内脏神经节中的标记细胞都是右侧多于左侧。但出现在肾上腺神经节中的标记细胞的情况有所不同，即在胰腺右侧注射HRP后，右侧肾上腺神经节中出现的标记细胞多于左侧，而在胰腺左侧注射HRP后，左侧肾上腺神经节中出现的标记细胞多于右侧。
Hsieh T M用大体解剖的方法研究鸡胰腺的神经纤维来源时发现，鸡的胰腺和十二指肠接受同一神经丛——胰-十二指肠神经丛的支配，该神经丛起自腹腔神经丛，同时接受肝神经丛的分支，胸段第2至第5交感干神经节发出的神经纤维汇聚于腹腔神经节，腹腔神经节发出神经纤维形成腹腔神经丛，腹腔神经丛与两侧的迷走神经有交通支[sup][9][/sup]。而本研究发现支配鸡胰腺的交感节后神经元分布在双侧的肾上腺神经节、内脏神经节和T3～T7交感干神经节，以位于肾上腺神经节的占多数。这一结果与大体解剖学的观点是一致的。
 
  
参考文献（略）
 

星随风流

深不可测！待研究！





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