请教常老师：非完全油苗怎么破乳？

沙师弟

常老师好，最我由于检测需要，要用抗体来检测疫苗中病毒的含量，疫苗是猪繁殖与呼吸综合征，圆环病毒二联灭活疫苗，南京农业大学制备的，我已经用过一些方法兽药典上用的酒精+PEG8000的方法破乳了，但似乎这个疫苗不是纯油苗，破乳完了后还有些白色悬浮的东西，在硝酸纤维素膜上点样后会直接晕开。不知道针对这种非完全油苗（我猜测）该怎么破乳？
请常老师赐教！

987654321

可以试一试用乙醚破乳，但乙醚是管制药品。看你搞得到没有。

常老师

用氯仿试试！

vet8qiang

灭活苗，不是不能测抗原含量么。可以测攻毒保护实验！
灭活苗在工艺上，应该是在病毒收集，没有灭火的时候测抗原含量的。

沙师弟

常老师:用氯仿试试！ (2013-03-15 21:21) 

常老师好！我已经用氯仿试过了，确实有用。。分了两层，上层浑浊点感觉厚重点，下层稍微清点的样子，但都是白色。。不知道这算不算成功了。。。要不要加重氯仿用量，我1ml疫苗用了600ul的氯仿。还有就是病毒对氯仿敏感，这还能用氯仿处理吗？由于疫苗中的病毒都没有血凝活性，所以也不能用血凝实验来检测。。用的琼扩。。37度处理了72小时。目前正在脱色处理。。貌似没有条带。。我之前用的斑点酶联免疫吸附法做，样点到膜上面直接快速的晕开了。不会出现常见的滴状，检测结果也是整张膜都显色。。应该是阴性了。请问常老师对于这种处理后的疫苗 还有更好的方法检测吗？

沙师弟

vet8qiang:灭活苗，不是不能测抗原含量么。可以测攻毒保护实验！
灭活苗在工艺上，应该是在病毒收集，没有灭火的时候测抗原含量的。 (2013-03-20 12:05) 

你说的这个我也看过些资料，疫苗制备中确实是这样的。但我不是做疫苗的。只是用疫苗来作为抗原制备抗体，然后用疫苗作为抗原来检测制备抗体的质量。但现在处理出来的抗原各种不适用。。

常老师

如果不想破坏病毒，用氯化钙试试3-5%

沙师弟

常老师:如果不想破坏病毒，用氯化钙试试3-5% (2013-03-20 17:54) 

哦。。谢谢常老师！那我明天试试。。不知道要处理多长时间，是有分层就行吗？这次用氯仿作的果然不行。。琼扩染色后都没蛋白带了。。冻融法处理的还行。。有蛋白带。。但貌似没和我的抗体反应。。。

vet8qiang

看完各楼讨论，汗下来，本人才疏学浅，还要多多学习！