【分享】华中地区滑液囊支原体（MS）分离菌株鉴定及药敏评价

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目前用于长期控制滑液囊支原体的主要方法是严格的生物安全措施、涉及减少受感染动物数量和疫苗接种的根除计划；而短期控制方法通常采用抗生素治疗，如替米考星、恩诺沙星和土霉素。然而，抗生素治疗只能减轻临床症状，不足以根除受影响鸡群的感染。这可能是由于滑液囊支原体的慢性感染和环境中微生物的高水平造成的（Marois 等人，2016）。滑液囊支原体获得性抗生素耐药性的分子机制已有报道（Le Carrou et al. 2006；Lysnyansky et al. 2013）；因此，了解流行菌株的抗生素敏感性和抗生素的治疗效果对于改善药物治疗的管理至关重要。

滑液支原体（M.synoviae）感染已成为中国日益严重的问题，因为它给家禽业造成了巨大的经济损失。抗生素治疗是控制策略之一，可用于控制无滑膜支原体的鸡群中的临床爆发，特别是因为细菌可以通过鸡蛋传播。

了解华中地区养殖场滑膜支原体感染状况及流行菌株体内外抗生素敏感性，2019年至2021年，从5个省采集了485份样品，分离鉴定出52株菌株。测定8种抗生素（泰万菌素、泰妙菌素、替米考星、林可霉素、恩诺沙星、金霉素、多西环素、泰乐菌素）对分离株的最低抑菌浓度（MIC），结果显示，泰万菌素、多西环素、泰妙菌素对52株临床分离株有效（MIC值≤0.0625）分别为 0.25 μg/mL、≤0.0625–1μg/mL 和 0.25–2μg/mL）。替米考星、恩诺沙星和林可霉素具有较高的 MIC 90值 (＞32 μg/mL)。

通过滑液囊支原体建立鸡感染模型以评价这些抗生素的短期治疗效果。用药5天后，与其他组相比，多西环素（200 mg/L）和泰万菌素（200 mg/L）显示出更优异的抑制滑液分枝杆菌的能力。此外，泰万菌素（0.4μg/mL）对胚胎内注射的滑液支原体的治疗效果高于相同剂量的泰妙菌素。体外测定的 MIC 值和体内观察到的治疗效果相结合表明泰万菌素和多西环素具有最佳治疗效果。泰万菌素对滑膜支原体的垂直传播也表现出比泰妙菌素更好的抑制作用。

临床样本的分离和鉴定

从河南、湖北、安徽、湖南、江西五省（图1A -C）采集的485份睑板组织和分泌物样本中，总共纯化出52株MS（52/485，10.72%）（16.67%，中国的比例分别为11.71%、9.09%、10%和6.25%）（图2）。通过PCR验证特异性（图1D）和敏感性（图1E ）。这52个样本与GenBank注册的MS-H菌株（注册号CP021129.1）之间的同源性为93-99%。 52 株菌株的滴度范围为 105至 107颜色变化单位 (CCU)/mL。



中国不同省份滑液囊支原体分离株的地区分布及滑液支原体感染的血清阳性率。方框中显示了每个省份采集的样本数量和分离株。



最低抑菌浓度的测定 按药物排序的MIC结果如表1所示。所有分离株在重复中均显示出 MIC 结果的一致性。

36 个滑液分枝杆菌分离株中，大多数(69.2%) 的泰乐菌素 MIC值 <1 μg/mL，8 个分离株 (15.4%) 的 MIC 值为1μg/mL，8个分离株 (15.4%) 的 MIC值在 1-4 微克/毫升。安徽省分离菌株的泰乐菌素MIC值（2-4μg/mL）高于其他省份分离菌株。 对于所有MS分离株，泰万菌素和泰妙菌素的 MIC值分别≤0.25μg/mL 和 2μg/mL ，其中 28个分离株 (53.8%) 的泰万菌素MIC 值低于或等于现有抗生素的最低浓度测试中（0.0625μg/mL）。所有MS分离株的多西环素 MIC 值均≤1μg/mL ，其中 30 株（57.7%）的 MIC值为 0.0625μg/mL。泰万菌素的MIC 50和 MIC 90值最低，还有强力霉素和泰妙菌素。 10 株（19.2%）的替米考星 MIC 值≤1μg/mL，36 株（69.2%）的 MIC ≤2 μg/mL。 22株（42.3%）菌株的MIC值为2μg/mL，20株（38.5%）超过4μg/mL，其中16株（30.8%）大于本次试验所用抗生素最高浓度（32株）。微克/毫升）。所有52 株菌株的林可霉素 MIC 值均存在显着差异，最大MIC 值（>32 μg/mL）和最小 MIC 值（0.5 μg/mL）之间至少存在七个系列稀释度的差异。所有分离株的恩诺沙星 MIC 值均≥8 μg/mL。 MIC50和 MIC 90恩诺沙星的登记值最高，另外还有替米考星和林可霉素。安徽、河南地区分离株中替米考星、恩诺沙星、林可霉素的MIC值高于其他省份。

来源：鸡保姆，作者：王春、周乃吉等