【分享】山东省禽腺病毒流行情况（2021～2022）

共享精神

近年来，家禽业受到家禽腺病毒（FAdV）引起的心包积水综合征、包涵体肝炎等腺病毒性疾病的显着影响，这些疾病在我国日益流行。山东省是我国家禽养殖的重要地区，分离出多种复杂多样的FAdV血清型。然而，优势菌株及其致病特征尚未见报道。因此，对FAdV的致病性和流行病学调查显示，当地FAdV流行的优势血清型为FAdV-2、FAdV-4、FAdV-8b和FAdV-11。

17日龄无特定病原体 (SPF) 雏鸡的死亡率为 10% 至 80%；临床症状包括精神抑郁、腹泻和消瘦。病毒排出的最长持续时间为 14 天。所有感染组的发病率最高出现在第 5-9 天，此后逐渐消退。最明显的症状发生在感染 FAdV-4 的雏鸡中，包括心包积液和包涵体肝炎病变。

我们的结果补充了目前山东省家禽群中 FAdV 的流行病学数据，并阐明了优势血清型的致病性。这些信息对于FAdV疫苗研发和疫情综合防控可能具有重要意义。

一、简介

自1963年美国首次发现鸡包涵体肝炎（IBH）以来，该病已在全球许多国家流行，并对全球家禽业产生了显着影响。IBH 是由具有多种致病性的禽腺病毒 (FAdV) 引起的。大多数感染都是亚临床的，并且持续导致整个农场感染。FAdV 可导致生长迟缓、IBH、心包积水综合征 (HPS)、肌胃糜烂 (AGE)、产蛋量减少和免疫抑制感染可能导致10-80% 死亡率。

FAdV属于腺病毒科腺病毒属，是一种二十面体结构的病毒，其核衣壳含有六邻体、五邻体和纤维。六邻体作为主要的衣壳蛋白，是病毒类型、类群和亚类的主要抗原决定因素，其核苷酸序列是系统发育基因分型的可靠标记。

基于六边形根据基因，FAdV可分为12个血清型，包括FAdV-1至FAdV-7、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-9至FAdV-11。

根据病毒分子结构特征可分为5种，即A（FAdV-1）、B（FAdV-5）、C（FAdV-4和FAdV-10）、D（FAdV-2、FAdV- 3、FAdV-9 和 FAdV-11) 和 E（FAdV-6、FAdV-7、FAdV-8a 和 FAdV-8b）。

通常，FAdV-1 可引起 AGE，FAdV-4 可引起 HPS，FAdV-11 可引起 IBH。

2014年HPS爆发后，FAdV-4 被报道为中国的主要血清型；但自2016年以来，随着FAdV-4灭活疫苗的广泛使用，其患病率逐渐下降。到2020年，FAdV-4、FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11都不同程度地流行。

FAdV-4疫苗免疫已成为各大型养殖场的普遍做法；然而，单价疫苗在不同血清型之间表现出较差的交叉保护作用。因此，考虑到目前多种血清型的流行，开发有效的多价疫苗刻不容缓。

山东省是我国家禽养殖的重要地区，已发现多种复杂多样的FAdV血清型。本研究通过流行病学调查，对山东省目前主要的FAdV血清型进行了调查。此外，对流行的 FAdV 毒株进行的比较病理学研究很少。因此，我们通过动物实验来分析各种血清型的致病性，以了解当前流行菌株的致病特征。

2、材料和方法（略）

3、 结果

3、3.1. 样品

2021年至2022年，从分布于山东省各市的各个养殖场采集疑似感染FAdV的家禽样本601份。共发现FAdV阳性病例118例，阳性率为19.63%（118/601）。山东17个城市中有16个发现FAdV（图1）。


图1。2021-2022年山东省样本采集分布图（数字表示阳性样本）

2022年的阳性率低于2021年（图2A），但总体月度患病率趋势一致。肉鸡中，感染最常见于 21-42 日龄，产蛋鸡则最常见于 120-270 日龄（图 2B）。


图2. 流行病学调查。(A)时间分布；(B)簇间分布；(C)血清型统计；(D)与其他病毒混合感染。

118例阳性病例中分离出78株FAdV；28株属于FAdV-11（35.90％），19株属于FAdV-4（24.36％），16株属于FAdV-2（20.51％），13株属于FAdV-8b（16.67％），2株属于FAdV -1 (2.56%)（图 2C）。共感染58例，其中FAdV与CIAV、HEV共感染发生率最高（图2D）。

3.2.六邻体基因的测序和分析

测序和剪接后，78个FAdV的序列提交至GenBank（GenBank登录号：OP917852-OP917924和OP920975-OP920979）。根据获得的序列和从 NCBI 下载的参考序列进行系统发育分析。结果如图3所示。系统发育树表明，44 个分离株属于 FAdV-D（FAdV-2 和 FAdV-11），19 个分离株属于 FAdV-C（FAdV-4），13 个分离株属于 FAdV-E（FAdV-8b），2 个分离株属于 FAdV-E（FAdV-8b）。 FAdV-A (FAdV-1)。


图3. 基于 FAdV六邻体基因序列的系统发育树。参考菌株的登记号标注在菌株后面。参考菌株的血清型标记在菌株前面。红色标记的菌株是用于致病性评估的菌株。

所有 FAdV-2分离株彼此之间具有100％的同源性，并且与参考菌株GX01的六邻体基因序列（GenBank登录号：ON014843.1）具有99.61％的核苷酸同源性。所有 FAdV-11 分离株彼此之间以及与参考株 MX95-S11 (KU746335.1) 均显示 100% 同源性。所有 FAdV-4 分离株彼此之间同源性为 99.9-100%，与参考株 SD1601 (MH006602.1) 的同源性为 99.89-100%。所有 FAdV-8b 分离株彼此 100% 同源，与参考株 AH720(KY968968.1) 和 764 (KT862811.1) 99.58–99.96% 同源。所有 FAdV-1分离株彼此之间具有100% 同源性，与参考毒株11-7127 (MK572848.1) 具有99.93% 同源性。

3.3.致病性

感染FAdV-4和FAdV-8b的个体在感染后1天表现出抑郁、头部萎缩、羽毛凌乱、粪便呈白色或血色等症状，直到感染后9d临床症状逐渐减轻并消失11天。FAdV-2 和 FAdV-11 感染组在 3天时表现出异常发声和白色粪便或血液，随后在11 天时症状显着减轻。

在尸检过程中，FAdV-4 感染组表现出最严重的病变。观察到严重的心包积液（图4A）。肝脏呈黄棕色肿胀、灰白色坏死灶及点状出血(图4B )。脾脏肿大、充血（图4C）。肾脏苍白肿胀（图4D）。镜下观察可见心肌纤维颗粒变性、间质充血、水肿、异嗜性粒细胞浸润(图4E )。肝细胞变性坏死，有大量嗜碱性包涵体；肝脏被大量巨噬细胞和淋巴细胞浸润增殖（图4F）。在脾脏中观察到充血、出血和淋巴细胞损失(图4G )。肾小管上皮细胞出现变性；肾脏表现出间质充血和出血（图4H）。


图4. SDDZ-22070201 (FAdV-4) 菌株感染致病性测试中观察到的典型尸检和显微病变 (HE × 200)。(A)心脏：心包积液；(B)肝脏：灰白色坏死灶及点状出血；(C)脾脏：肿大充血；(D)肾脏：苍白、肿胀；(E)心脏：心肌纤维颗粒变性[ (E)中黑色箭头]和异嗜性粒细胞浸润[ (E)中红色箭头]；(F)肝脏：肝细胞坏死[ (F)中红色箭头]和包涵体[ (F)中黑色箭头]；(G)脾脏：淋巴细胞损失[ (G)中的黑色箭头]；(H)肾脏：肾小管上皮细胞变性[(H)中的黑色箭头]和肾间质充血[ (H)中的红色箭头]。

体重增加统计显示，在整个试验期间，所有四个感染组的体重增加均<30克，而对照组平均增加70克（图5A），感染组之间没有显着差异。FAdV-4感染组在感染后5天首次死亡，最终死亡率为60%。FAdV-2、FAdV-8b 和 FAdV-11 感染组在 8 dpi 时死亡，最终死亡率分别为 30%、10% 和 30%（图 5B ）。


图5. 不同 FAdV 株感染鸡的致病性分析。(A)受感染鸡的每日体重增加。(B)生存曲线。(C)病毒脱落。(D)病毒血症持续时间。

FAdV-2 和 FAdV-4 的泄殖腔病毒脱落持续 1 至 13 d，FAdV-8b 和 FAdV-11 的泄殖腔病毒脱落持续 1 至 14 d。在 FAdV-4 感染组中，病毒排出在 6 dpi 时达到峰值，其他三组在 8 d 时达到峰值（图 5C）。FAdV-4、FAdV-8b 和 FAdV-11 病毒血症持续 1 至 14 dpi，FAdV-2 病毒血症持续 1 至 13 d。FAdV-4感染组血液中病毒载量在7 dpi时达到峰值，FAdV-2感染组在9 d时达到峰值，FAdV-8b感染组在11 d时达到峰值，FAdV-11感染组在11 d时达到峰值组（图5D）。

从收集的组织中提取核酸，并通过 qPCR 进行分析，以评估病毒分布（即在心脏、肝脏、脾脏、肺、肾和法氏囊中）。病毒复制的生长期主要发生在3-7 dpi，此时各组织中的病毒载量达到峰值（图6）。在 1、3、5 和 7 dpi 时，FAdV-4 感染组的病毒载量显着高于其他三个感染组（法氏囊中除外）。所有感染组中最高的病毒载量出现在 FAdV-4 组中，肝脏在 5 dpi 时（10 9.53拷贝/μl）。


图6. 通过 qPCR 评估感染后 1、3、5、7、9、11 和 14 天时各种鸡组织中的病毒载量。(A)心脏；(B)肝脏；(C)脾脏；(D)肺；(E)肾；(F)法氏囊。Ns 表示无显着性，P < 0.05 的值被认为具有统计学显着性 (*)，P < 0.01 的值被认为具有显着性差异 (**)， P < 0.001的值被认为具有高度显着性差异 (***)，并且 P < 0.01 的值被认为具有高度显着性差异 (***)。 P < 0.0001 被认为是高度显着的 (****) 。

来源：鸡保姆，作者：王美龙 孟繁良等

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