技术 | 禽腺病毒 4 型 ZZ 株

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禽腺病毒 ( fowl adenovirus，FAd V) 属于腺病毒科 (Adenoviridae) 禽腺病毒属 ( Aviadenovirus) ，是感染家禽和野禽的常见病原，一般仅造成轻微症状，致病性较强的 FAd Vs可引起鸡包涵体肝炎 ( inclusionbody hepatitis， IBH ) 、 肌胃糜烂 ( gizzard erosions，GE) 和心包积液综合征 ( hydropericardium syndrome，HPS) 。

FAd V 病毒粒子呈球形，直径 70 ～90 nm，是一种无囊膜双股线性 DNA 病毒，基因组全长在 40～46 kb，基于全基因组的限制性片段长度多态性分析及交叉中和试验分别可将 FAd Vs 分为 A、B、C、D、E 5 个 种， 12 个血清型 ( 1 ～ 8a， 8b ～11)。

其中，A 种包括 FAd V－1 型，B 种包括 FAd V－5 型，C 种包括 FAd V－4 型和 FAd V－10 型，D 种包括FAd V－2、FAd V － 3、FAd V － 9、FAd V － 11 型，E 种包括 FAd V － 6、FAd V － 7、FAd V － 8a、FAd V － 8b 型。

FAd V 编码的主要结构蛋白包括六邻体蛋白( hexon) 、五邻体蛋白 ( penton) 以及纤维蛋白 ( fi-ber) 。Hexon 蛋白是病毒表面含量最高的蛋白，能够诱导中和抗体产生。

基于 hexon 基因序列的系统进化分析常被用于 FAd Vs 的血清型分型，这是因为要获得所有血清型 FAd V 病毒的阳性血清比较困难，交叉中和试验不能被广泛应用。Penton 蛋白在病毒入侵细胞过程中发挥重要作用，也能诱导中和抗体产生。Fiber 蛋白与 penton 蛋白非共价相连，是介导病毒与宿主细胞表面受体结合的蛋白，能够诱导保护性免疫应答产生，并与病毒的组织嗜性和毒力密切相关。FAd V的血清A 型和 C 型可编码 2 个 fiber蛋白，而血清B 型、D型和E 型仅编码 1 个 fiber蛋白。

2014 年以来，FAd V 感染引起的 IBH 和 HPS 病例在国内鸡群中不断出现且呈逐渐增加的趋势，对养禽业造成了巨大影响。

流行病学调查发现，国内目前存在着 FAd V－C、FAd V－D、FAd V －E 感染，分布在肉鸡、蛋鸡、鸭、鹅、鸵鸟等禽类群体中。

河南的 HPS 病例于 2015 年出现在豫东地区的肉鸡群中，目前全省大多数地区均有发生，死亡率达 30% ～ 80%。

在 FAd Vs 的 12 个血清型中，FAd V－4 型是引起 HPS 的主要病原体。

本研究利用 FAd V－4 ZZ 病毒株感染 SPF 鸡，对感染后鸡的临床症状、存活率、组织病理学变化、病毒的组织分布情况进行了分析，确定了该毒株的致病性，为探索其致病机制并有效防控 HPS 病例的发生奠定基础。

1 材料与方法（略）

2 结果与分析

2. 1 病毒滴度

将收获的病毒液做 10 倍倍比稀释，感染生长于96 孔板中的 LMH 细胞，96 h 读数按照 Ｒeed－Muench法得到病毒液的 TCID50为 107.8TCID50/ 0. 1 m L。

2. 2 临床症状

感染后 0 ～ 24 h，所有 SPF 鸡呈正常状态。 到48 h 时，FAd V－4 ZZ 株感染组有一半的鸡开始出现精神抑郁、嗜睡、食欲不振等症状; 严重者出现头首啄地、闭眼不睁、流涎、肛门处羽毛与粪便粘连、绿便等症状; 随后 48 h 内，其余鸡陆续出现上述严重症状，直至死亡。

整个试验周期内，PBS 对照组 SPF鸡未出现任何异常症状。

2. 3 攻毒后的存活率

FAd V－4 ZZ 株感染组在攻毒后 48 ～ 60 h 间，鸡开始死亡，死亡数占 50%; 之后，每隔 12 h，都有鸡死亡，到 96 h 时，所有感染鸡全部死亡; PBS 对照组在整个试验过程中没有鸡死亡 ( 图 1) 。



2. 4 剖检变化

将 PBS 对照组正常鸡和 FAd V－4 ZZ 株感染组死亡鸡全部进行解剖观察，结果发现 FAd V－4 ZZ 株感染组病死鸡全部可见心包积液 ( 图 2A) 和肝脏变黄肿大 ( 图 2B) 等典型的病理变化; 而对照组鸡正常，未出现任何病变特征 ( 图 2C) 。







2. 5 攻毒后的组织病变

经 HE 染色后，与对照组鸡相比，感染组病死鸡除十二指肠外，各组织均呈现出一定的组织病理学变化 (图3)。

心肌细胞有坏死现象，肌纤维间出现淋巴细胞浸润 ( 图3A) ; 肝组织出现弥漫性的灶性坏死，肝细胞内存在包涵体，并且肝细胞核碎裂、溶解，并伴有散在的炎性细胞浸润 ( 图3B) ; 脾脏实质细胞呈现点状凋亡或坏死，出现细胞核固缩、碎裂，但整体结构改变不明显 ( 图 3C) ; 肺组织血管内可见炎性细胞增多，肺间质出现水肿和少量的炎性细胞浸润 ( 图3D) ; 肾脏可见广泛弥漫性的肾小管上皮细胞水肿，胞质疏松 ( 图3I) ; 腺胃可见排列规则整齐的复合管状腺，复合管腺腔内可见少量的滴状物，腺管上皮细胞出现点状坏死 ( 图 3J) ; 十二指肠肠黏膜层绒毛排列整齐规则，肠腺丰富，排列规则，肠各层结构清晰紧密，未见明显异常 ( 图 3K) ; 法氏囊胸腺小叶结构尚在，小叶中皮髓质分界不清楚，皮髓质中淋巴细胞大量坏死减少，排列稀疏紊乱，并伴有中性粒细胞以及巨噬细胞等炎性细胞浸润 ( 图 3L) 。

2. 6 病毒的组织分布情况

荧光定量 PCＲ 检测各组织的病毒载量后发现，感染组病死鸡的心、

肝、脾、肺、肾、十二指肠、腺胃和心包积液中，都存在不同程度的病毒感染，肝组织中病毒量最高，其次为肺，表明 FAd V－4 ZZ 株病毒具有广泛的组织嗜性 ( 图 4) 。



3、 讨论

2014 年以来，国内鸡群陆续出现了 IBH 和 HPS病例，多发于 5～11 周龄，蛋鸡、肉种鸡和三黄鸡都有发病。

发病鸡剖检后心包腔内有淡黄色积液，同时出现肺水肿、肝脏肿胀变色等病变。

流行病学调查发现引起国内 IBH 病例的禽腺病毒为 FAd V－8a /b型，引起 HPS 病例的禽腺病毒为 FAd V － 4 型。

FAd V 既可经鸡胚垂直传播，也可经粪口途径水平传播，从而对养禽业造成巨大影响。

刘亮亮等研究发现国内商品化的新城疫弱毒苗中污染了 FAd V－4型病毒，可能造成鸡群大面积感染。Pan 等研究发现感染 FAd V－4 的鸭群可以不表现临床症状，但能持续排毒，形成潜在的传染源，病毒从鸭群向鸡群传播加大了 HPS 发生的风险和防控难度。

FAd V 感染一般仅造成亚临床症状，本研究致病性试验获得的临床症状、存活率、剖检结果、病理学变化、病毒组织分布情况等结果表明 FAd V－4 ZZ 株对鸡群具有高毒力，这与国内其他 FAd V－4 分离株也具有高致病性的结论一致。与无毒力的FAd V－4 ON1 和 FAd V－4 KＲ5 株相比，FAd V－4 ZZ 株存在 OＲF19、OＲF27 和 OＲF30 基因缺失。与国内最早分离的 FAd V － 4 JSJ13 株相比，FAd V － 4 ZZ 的OＲF29 序列存在 33 nt 核苷酸缺失。深入研究这些基因变异对 FAd V－4 毒力增强产生的影响，是研发FAd V 疫苗的关键。

当前，加强养禽场生物安全、防止病毒在禽类群体中因交叉感染而持续存在，同时保障禽类疫苗中不污染 FAd V，尤其是 FAd V－4，是防控 FAd V 感染和 HPS 病例发生的重要措施。
作者：金前跃 王寅彪 柴永笑 卢清侠 郭振华 罗俊 邢广旭 邓瑞广 张改平

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喂扁嘴青年

学习了，疫苗污染应该重视！

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