禽流感新城疫胶体金快速诊断试纸盒的使用细则

神九-魏晗

禽流感新城疫胶体金快速诊断试纸盒的使用细则

胶体金试纸这一高科技产品虽然以易于操作和判断著称，但仍有一些小的要领需要掌握。下面的说明是一些长期使用者的经验总结，对于初用者尽快达到熟练使用会有一定的帮助。

              使用步骤

1、用棉签在鸡相应部位采样；2、将样本涮到病毒洗脱液小瓶中，轻摇；3、试纸水平避光放置，用吸管吸取样本液，逐滴加四滴到试纸滴孔处；4、半小时内观测试纸结果。单项试纸在T1（检测线1）处出现横线为阳性，AI+ND双项检测试纸在T1处出横线为禽流感阳性，T2处出横线为新城疫阳性。所有的试纸其C线（质控线）都必须出，不出即本条试纸失效，结果不能予以认可。

               样本采集

1、可以将几只鸡的病料放到一个瓶里测

原本设计时，是一条试纸测一只鸡。根据我国的实际情况，也可以将几只鸡的病料放到一个病毒洗脱液中去测。一般一栋5000套（只）鸡的鸡舍只用一条就够了，就是发现有病毒再重做一次也就是再用一条总加起来两条也就足够了。这样做一是为了降低成本，二是采集的样本多了，准确度也就提高了。只采一只概率太低。但在采上四、五只鸡，概率就大大提高了。

测病毒与平时的测抗体不一样。测抗体时，要好鸡蔫鸡都要随机地抓，这样才能测出鸡群中抗体的大致情况；而测病毒只需抓蔫的就行，只要这几只中捕捉到病毒就可以确诊这栋鸡群中有病毒的感染。也不用去管这几只鸡中是全部被感染还是有一只或两只被感染。

2、能够用棉签采到合适的病料是个关键。

这分两种情况。一是在活鸡身上采。另一种是在死鸡身上采或将鸡杀死后再采。

当在活鸡上采时，将棉签插到鸡泄殖腔内1~2公分，轻轻转几下，要尽量少沾粪便多沾液体，因为粪便里的病毒相对来说要少得多。

当在死鸡身上采时，就可以剖检采其体内部分了。一是气管，可以直接在打开的气管上采。注意不要采气管内的痰，因为痰病毒不一定多，且能影响金标的结合与流动，不利于判定。正常情况下，气管粘膜上会有一层薄薄的液体，在气管上沾几下，沾上粘膜上的液体即可。也不要沾血块之类的其它东西。棉签与气管方向横竖关系不大，一般顺气管方向干活顺当一些。

另一采取点就是肠道的十二指肠和小肠中段卵黄蒂周围1~2公分处。剪开所在肠道，距肠道0.5~1毫米轻刮肠道，在淋巴滤泡（肿胀、出血、溃疡等病变部位，用棉签沾几下即可。轻刮肠道面是因为食糜中的病毒没有病变部位的多。不是硬刮肠道面是因为表面上有可能有肠粘膜上皮释放出来的病毒。棉签与肠道面在同一水面上，垂直采样，取一两下即可，试纸灵敏度很高，不用大量沾取。

关于棉签的使用。因为一个棉签要采多只鸡且每只鸡有可能采多个部位，所以棉签要多次使用，在其从病毒洗脱液瓶中往外拔时，要将棉签的头在瓶璧上挤一挤，特别是拔到瓶颈时要转着再挤一挤。这样一可以将液体尽量多地留在瓶中，二是沾水少的棉签在再沾液体时能较好地沾上新的部位的液体，避免了拔出时带水过多再沾时沾液体少或沾不上液体的情况。

如果认为一个棉签沾得次的次数过多麻烦，您自己也可以在超市中选与我们提供的棉签相近的棉签买一些。需要时可以多用一个。不过要注意棉签不要用的太多，把病毒洗脱液别沾完了或沾得过少了。所剩液体过稠是很不利于金标的流行即测定的进行的。

3、采集的样本不要稠及出现情况的处理

试纸盒的灵敏度很高，不用过多地取病料。取病料是只要保证能沾到病变部位就行。太稠了，不但影响滴加的样本与金标的结合，而且还影响金标在试纸条上的流动。一些试纸条上的金标跑不完，就是因为样本太稠的原因。

如果不慎取成这样了怎么办？

一是可以用另外的一个未用的洗脱液瓶中的液体再加到这个稠瓶中一部分将其稀释一下。二是如果在滴加样本时发现太稠金标跑得不好这时可立即用未启用瓶中的液体加到滴孔中一到两滴，让金标跑得顺当一些。如果取样本中有特别沾稠的物质可以将它用干净的牙签将其剔除；如果样本中有大量的尿酸盐且将滴孔下面的聚脂膜的向下渗液的空隙堵住时要用棉签的另一端在滴孔底部聚脂膜上轻轻搅几下让液体渗下去。

                  试纸判定

3、取完样本后要盖好瓶盖，摇动瓶子使样本与病毒洗脱液充分接触。滴液时，滴瓶要与滴液孔不直接接触，滴完一滴就可滴下一滴，连续滴4~5滴。

5、观察金标流动时应该注意的问题。质量控制线即C线必须出红色直线，不出即本条不能用了。不管检测线即T线出不出。

检测线是一线直线，与质控线平行。不是跑动中的曲线，也不是金标从金标垫中刚跑出时的弯月型线。判定结果时要尽量让金标跑完，无用的金标都跑到最上端的吸水滤纸上是取好的。

另外检测线宽度约一毫米，有时金标跑不好时会显出它来。在上下都有金标离子的情况下，刚好显出一条白色宽为1毫米左右的线来，这种情况仍是阴性，因为病毒刚好要在这条线上被捕捉，说明还没有病毒或病毒没有到这条线上。出现这种情况说明金标跑得不好，这是一要加一两滴未加样本的液体看金标能否顺利跑过去，不行就不要这此结果，得换试纸条重做了。

比这个情况略好的是，在上下红色金标离子的映衬下出现的宽为一毫米宽的白线上出现了一条较窄的红色，这是有病毒即阳性，但跑得不是很好。也可以重做。

如果金标因为稠而跑不动，可以在金标运行过程中滴加未用的新液体，一是稀释二是加些流动的动力，一般视情况可加一到两滴。这个动作在操作十分钟内是有效的，超了二十五分钟意义就不大了。

               使用者心理变化

6、试纸条从接触到熟练大约分三个阶段。

一是对产品的检验阶段，这时可用流感新城疫抗原（或用活疫苗）来直接检测试纸能用不能用、灵敏度如何。在这个过程中也能熟练地认知试纸的大部使用过程。这个过程很重要，许多同志往往不愿做这一工作，直接拿试纸条去给户里测野毒。常常因出现不理想可应付不了的情况。古人常说，磨刀不误砍柴功。即使觉得试纸条有点贵，也是应该先练好再去做工作的。胶体金产品虽说高科技又好用，但还是有一点使用技巧和熟练过程的。

第二个阶段是对心理的冲击阶段。过了第一阶段，对产品的质量和灵敏度没有怀疑且能熟练掌握检测试纸条的方法后。我们好多兽医，特别是干了几年自己觉得水平也不低或感觉自我良好的同志会碰到与试纸条冲突的地方，这个过程在心理上表现得更为突出。也就是在自己经验内认定是禽流感或新城疫的病测病毒测不到，或认为没有病毒病的病测到了病毒。即试验手段的结果与平时的经验判断之间出现冲突。用兽医自己的话说就是，平时看得“温和型流感”“慢性鸡瘟”很准，而且还给老百姓看得很好，结果一测没有这个病毒。这不让人恼火吗？

实际上眼观剖检比实验室手段来说，准确度还是要差很多，现胶体金方法如比实验室的微量血凝试验类方法的灵敏度还要高5~9个数量级。据我们的经验，兽医在禽流感和新城疫上的判断至少有三分之一以上是不正确，有的失误在一半以上。而且许多成功的例子里有时就没有这个病。

如何将看病的旧的经验与新的经验相结合，结束冲突是每个使用者在心理上都要过的一关。当然兽医本身的水平也得到了一个本质的提高。

第三个阶段是熟练应用阶段。再先进的设备和产品对人来说也是一个工具。在看病过程中起决定作用的人。试纸条再高级也是人的一个好的助手。这个阶段就能达到人设备合一。一方面可以随时利用试纸来随时验证或辅助自己的判断，另一方面自己也能灵活地对待试纸的结果。能够从疾病的整体上来考虑病毒粒子的量的变化，同时考虑产品的灵敏度等等。再能利用试纸的高灵敏度高特异性来分离鉴定病毒，或者推广到养殖场上平时的检测上，这时其意义就大得多了。

技术咨询：刘军同 15803214536

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