禽白血病感染现状和实验室检测方法

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禽白血病概况：

禽白血病是由反转录病毒科的禽白血病病毒(ALV)引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称，引起病禽的良性和恶性肿瘤，导致病禽发育缓慢、产蛋下降等。

ALV可通过垂直和水平两种方式进行传播。主要是由种鸡通过鸡蛋（胚)向下一代垂直传播，即祖代直接传给父母代及商品代；经垂直传播带毒的雏鸡在出壳后通过高度密集状态下与其它雏鸡的直接接触，也可造成严重的水平传播。因此，种鸡场对该病的净化对于下一代鸡场控制该病有着至关重要的源头作用。

根据病毒特异性囊膜蛋白的抗原性不同，ALV可分为A、B、C、D、E、F、G、H、I和J十个亚群。目前国内可感染鸡群的只有A、B、C、D、E 和 J 六个亚群，其中J亚群致病性和传染性最强，而E亚群致病性很弱或非致病；而其余四种亚群（F、G、H、I）可分别感染颈环雉、金黄雉、匈牙利鸡及冈比亚鹌鹑。

ALV不同于其它病毒的一个最大特点是：分为外源性ALV和内源性ALV两大类。外源性ALV是指只能由外界病毒感染鸡群，而不会通过细胞染色体进行传递的ALV，如A、B、C、D和J亚群，该类病毒可以在自身细胞与细胞间以完整的病毒粒子形式进行扩散，或在个体与群体间通过直接接触或污染物发生水平传播，也可以完整的病毒粒子形式通过鸡胚从种鸡垂直传播给后代，该类病毒致病性强；内源性ALV是指病毒染色体可整合到易感禽类细胞染色体基因组中，可通过基因进行垂直传播的ALV，该类病毒基因组一般为不完全片断，不具有传染性或致病性很弱。

三、禽白血病感染现状

禽白血病于1987年以后在发达国家已基本根除，然而由于引种和种鸡场在繁育过程中管理不当，在白羽肉用型种鸡、黄羽肉鸡及蛋用型鸡中均分离到了该病毒。禽白血病的流行已成为目前危害养鸡业特别是蛋鸡业的最主要疫病之一。

我国ALV-J感染状态：（1）白羽肉种鸡，2003年前感染很普遍，现在显著减少，2005年后就没有再分离到ALV-J，这是因为经过多年严格净化，国外大型种鸡场已基本不存在ALV-J感染，只要保持引种的安全管理，就会大大减少感染；（2）蛋用型鸡，以前主要为经典禽白血病亚群（A、B、C、D），但近几年主要为ALV-J亚群；（3）地方品系鸡，广东、广西的三黄鸡和山东及其它省份地方品系鸡的肿瘤病，大多为ALV-J亚群感染。

四、实验室诊断方法

目前，对于禽白血病的防治没有有效的措施，既没有疫苗可以预防，也没有有效的药物用于治疗。世界各国控制禽白血病的主要方法是通过病原检测，淘汰阳性鸡，从而净化种群达到消灭本病的目的。因此，在该病的控制中及时准确的诊断就显得尤为重要。国内外相继建立了多种禽白血病诊断方法，但每一种诊断技术均有利弊，对禽白血病的确诊往往需要多种检测技术的结合才能作出。

1.病毒的分离与鉴定

该方法是诊断禽白血病最有效、可靠的手段。用于病毒分离的理想病料为血浆、粪便、蛋清、胚胎、精液、和羽髓。将被检病料经适当处理后，接种于单层鸡胚成纤维细胞(CEF)进行培养，ALV可在CEF中增殖，但不形成明显的细胞病变，因此培养物需结合其他技术（血清学或分子生物学）来检测病毒是否增殖，阳性结果表明存在外源性禽白血病病毒。但该方法费时、昂贵，不适于大量样品的检测。

2.双抗夹心ELISA

    我公司自主研发产品原理就是双抗夹心法，简单、快速、成本低，可用于蛋清、泄殖腔拭子、疫苗、胎粪等多种样本的检测，利用检测病毒的p27蛋白来判断是否含有该病抗原。

这种检测技术最大缺点是检测结果会出现假阳性，阳性结果仅能说明待检样品中含有p27蛋白，而p27蛋白同时存在于内源性病毒和外源性病毒中，该方法难以对这两类病毒进行区分，在检测外源性病毒时常出现一定数量的假阳性结果。

在应用双抗夹心ELISA法检测禽白血病时，应对鸡群采用多次随机取样，参考多次实验结果判断阳性率变化趋势再最终确诊。这是因为鸡群被外源性病毒感染后，在一定时期内p27蛋白阳性率会急速上升，而内源性病毒的感染的鸡群p27蛋白阳性率相对保持稳定(通常维持在一个很低的百分点)。

3.间接免疫荧光试验(IFA)

制备单克隆抗体，每个抗原可结合3～5个抗体分子，抗体又可结合3～5个荧光标记的二抗分子，逐步方法检测信号，敏感性与特异性都比较强。IFA法所需时间短，可做快速诊断，但因其需要荧光显微镜，很难在基层推广，且有时会产生非特异性荧光，影响结果的准确性。

4.琼脂双向扩散实验（AGP）

AGP是指抗原抗体在凝胶内呈现的一种沉淀反应。此法简便易行，适用于现场大规模检测，曾在我国的种鸡净化中发挥了很大作用，也是国内最早运用于临床检测的方法。AGP采用从鸡的羽髓中检测禽白血病毒抗原，该方法具有检出率高、操作简单、费用低廉和易于推广等特点，并可以检测5日龄以上的任何品种鸡群。但该方法需逐只拔羽取髓，易使鸡产生应激

反应，检测过程需2天左右，且敏感性差。因而，对于大型集约化祖鸡场全群净化，实际操作性较低。

5.PCR方法

国内已建立多种针对病毒特异性基因片段的PCR和RT-PCR诊断方法，可分别用于检测ALV感染鸡群多种组织中的病毒DNA和RNA, 敏感性和精确性均高于ELISA法，常作为分离病毒后的确认手段。PCR方法可进行早期诊断，较早地淘汰病鸡，避免更大的经济损失，但因设备复杂、技术性强，对实验环境要求高等原因，同样很难运用于基层养殖场。
以下为三种主要检测方法的对比：（如下表）

检测方法	检测时间	所需设备
ELISA	3小时	酶标仪
IFA	8天	细胞培养设备、荧光显微镜
PCR	3天	PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统

      注：检测时间为处理100份样本所需的时间

养殖场进行禽白血病净化时，每次检测的样品数高达数千份，并且要求快速得到准确结果，以便及时周转鸡群并淘汰阳性鸡，节省饲养成本，所以需全面考虑检测效率、成本、现场设备和技术人员等因素。综合考虑多种因素，双抗夹心ELISA法操作简便，对实验室条件和人员要求相对较低，成本也相对较低，最适合用于养殖场进行禽白血病的净化和日常监测。

目前，禽白血病市售检测产品较少，主要竞品为IDEXX禽白血病抗原检测试剂盒及禽白血病抗体检测试剂盒双抗体夹心法检测病毒p27蛋白，可检测蛋清、泄殖腔拭子、疫苗、胎粪等多种样本，样品处理方法简单，操作简便，孵育时间仅为135min.

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佐君畜牧

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