琼脂扩散实验常出现的错误

张月平

琼脂扩散实验常出现的错误

一、    原理
    抗原、抗体在琼脂糖凝胶中可以自由扩散，当抗原、抗体在比例适当处结合为抗原--抗体复合物，形成沉淀线。
二、适用范围   
1.  检测鸡群的阳性率
2.    检测鸡群的血清效价
3.    检测抗原
三、常出现的错误
1.    倒琼脂糖平板时平板不平，其原因有：
①    平板放置时倾斜。
②    平板本身质量有问题，应选琼扩专用平板，底平坦。
2.    琼脂糖平板制备时浓度过高或过低都会影响结果：浓度过高，会推迟沉淀线出现时间；过低，可能不出现沉淀线，琼脂糖难以挑取。
3.    打孔器打孔时，孔的直径和孔间距一定要标准，否则结果差异很大。
4.    底部密封不完全会使抗原或血清渗漏影响结果，滴加抗原或血清时勿溢出孔外或滴加量太少。
5.    抗原质量不佳，对照不出现沉淀或沉淀线模糊。
6.    抗原和血清浓度过高或过低都可能导致结果不成立。
7.    被检血清受细菌污染会影响测定效果，还应避免阳光照射。
8.    湿盒中湿度对结果也有影响，温度过低，琼脂糖平板易干燥影响结果。
9.    实验温度35-37℃，过低影响效果。
10.    非特异性沉淀线。（见下图）
A：标准阳性结果。
B：非特异性沉淀线。
C：有一条是特异性，有一条是非特异性。
D：被检血清有一部分与标准阳性血清相同。
E：被检血清与标准血清完全不同，此结果为阴性，此沉淀线为非特异。
F：被检血清与标准阳性血清有部分成分相同，也有部分差异。


              图示   Ag表示抗原
                       C  表示标准阳性血清对照
                       T  表示被检血清

问心无愧

是应该注意抗原保存不好带来的麻烦

hai19733

楼主，请问下，你放入温箱培养1天的时间没？