【分享】禽戊型肝炎和禽白血病病毒的合并感染是中国褐壳蛋鸡群爆发肝炎和肝出血综合

共享精神

抽象的

中国商品海兰褐色蛋鸡群的母鸡在47周龄时死亡率增加，产蛋量减少。从 47 到 57 周，平均每周死亡率从 0.11% 增加到 3.0%，产蛋量从 10% 下降到 30%，在 54 周龄观察到最高死亡率（3.0%）。11 只鸡的尸检显示组织损伤，包括肝炎、肝出血、破裂和/或肝肿大。显微镜下肝脏病变表现为肝细胞坏死、淋巴细胞性静脉周围炎和髓系白血病。虽然没有从肝脏和脾脏样本中回收到细菌，但通过巢式逆转录聚合酶链反应在所有 11 只测试母鸡中检测到禽戊型肝炎病毒( HEV ) RNA。其中，亚组 J禽白血病病毒通过 PCR 在 5 只母鸡中检测到前病毒 DNA。此处获得的部分 ORF2 基因序列的比对证明与其他已知禽 HEV 分离株的相应序列具有相同的同一性（76% 至 97%）。环境此处获得的 ALV-J 分离株序列与其他 ALV 亚组具有 50.1 至 55% 的同一性，与其他已知的 ALV-J 分离株具有 91.8 至 95.5% 的同一性。此处获得的所选序列的系统发育树分析将具有基因型 3 HEV 的禽 HEV 序列分组，并将 ALV-J 序列分配给与已知 ALV-J 亚群分开的分支。免疫组化结果证实肝脏中存在禽 HEV 和 ALV-J。因此，这些结果表明，在本研究分析的蛋鸡群中观察到禽 HEV 和 ALV-J 共感染导致肝炎和肝出血综合征的爆发。

介绍

禽戊型肝炎病毒（HEV）是大肝脾（ BLS）病、肝炎脾肿大（ HS）综合征和肝破裂出血（ HRH ）综合征的主要病原体。这些疾病的临床症状包括死亡率增加（1-5%）、产蛋量减少（10-40%）、腹腔积血、肝出血以及肉种鸡和蛋鸡的肝脏和脾脏肿大。然而，越来越多的证据表明这种病毒可能不足以引起疾病。值得注意的是，已在健康鸡中检测到禽 HEV；而在实验条件下，临床疾病并没有在接种禽 HEV的无特定病原体 ( SPF ) 鸡中持续重现。因此，据推测，在肉种鸡和蛋鸡出现 BLS、HS 综合征或 HRH 综合征症状之前，除了禽 HEV 之外，还需要其他因素。目前，鸡群的禽HEV 感染通常使用 2 种检测方法进行诊断：间接酶联免疫吸附试验 ( iELISA ) 检测抗体的存在和逆转录聚合酶链反应 ( RT-PCR ) 检测肝脏中的病毒 RNA 、粪便和胆汁样本。最近，已经开发了几种嵌套 RT-PCR 方法来诊断鸡群中的禽 HEV 感染。在这些方法中，由 Huang 等人开发的 RT-PCR 测定法，已被广泛使用。

禽白血病病毒( ALV ) 已根据其宿主范围、病毒包膜干扰和交叉中和模式分为 6 个亚组，称为 AE 和 J。禽白血病病毒 J 亚群 ( ALV-J ) 在 1980 年代后期首次从英国商业肉型鸡中分离出来 。感染 ALV-J 的鸡通常表现出肿瘤发展、免疫力下降、生长迟缓、肝出血、肝脾肿大和死亡率增加，这在肉种鸡中最为明显，一些临床症状与 BLS 病、HS 综合征和HRH 综合征。在中国，肉鸡、蛋鸡和种鸡群中出现了 ALV-J 感染。然而，ALV-J 与其他鸡病毒因子如马立克氏病病毒、网状内皮细胞增多症病毒或鸡传染性贫血病毒的共同感染经常被报道。为了诊断鸡群中的 ALV-J 感染，病毒分离、ELISA 和 PCR 检测被广泛使用。

在这项研究中，进行了一项调查，以确定在蛋鸡群中观察到的疾病的病原体，该鸡群表现出死亡率增加和产蛋量减少。为了诊断禽 HEV 和 ALV-J 感染，进行了 ELISA 和巢式 RT-PCR、PCR 和免疫组织化学测定，并证明在蛋鸡群中发生了禽 HEV 和 ALV-J 的自然合并感染。

材料和方法（略）

农场描述和临床观察


图 1。一个鸡舍（鸡群）的产蛋量和死亡率显示 47 至 57 周龄鸡的产蛋量减少和死亡率增加。

3、结果

大体病变和组织学检查

在受影响鸡舍的11只鸡中，有7 只表现出肝脏严重肿大并伴有大量黄色坏死肝脏病变（图2A ）。其他 4 只鸡的肝脏呈深色并伴有肝肿大（图2B ）。值得注意的是，所有 11 只鸡都表现出弥漫性肝出血（图2C），其中 3 只鸡观察到肝破裂（图2D）。肝脏显微镜检查显示存在出血和严重的肝变性和坏死（图 3A），肝小叶内有局灶性增生的淋巴细胞（图3B）和中央静脉周围淋巴细胞的局灶性聚集（图 3 ）C）。这种微观损伤类似于鸡的禽HEV感染通常引起的病理变化。此外，在肝脏切片中还观察到淋巴肿瘤细胞和少量含有胞质嗜酸性颗粒的髓细胞（图3D），这是在感染ALV-J的禽类中观察到的典型病理变化。11个肝脏切片均表现出禽HEV感染的典型病理变化特征。其中，7 个还表现出在 ALV-J 感染期间通常观察到的变化。


图 2。受累蛋鸡肝脏肿大、肝炎综合征和肝出血。(A) 肝脏可见黄色肝坏死。(B) 深色肝脏。(C) 弥漫性肝出血。(D) 肝破裂出血。


图 3。来自受影响鸡舍的蛋鸡肝脏的显微镜下病变。(A) 肝脏出血图像；酒吧 = 100 微米。(B) 肝小叶淋巴细胞和局灶性增生；酒吧 = 100 微米。(C) 肝门区淋巴细胞浸润；酒吧 = 100 微米。(D) 充满嗜酸性颗粒的髓细胞样肿瘤细胞；酒吧 = 50 微米。组织用苏木精和伊红染色。

细菌学

使用标准的需氧和厌氧细菌分离方案没有从任何肝脏或脾脏中分离出细菌剂。

病毒学

在所有 11 只受试鸡中均检测到禽 HEV RNA，其中 11 只肝脏、11 只胆汁、7 只粪便和 3 只脾样本使用巢式 RT-PCR 检测部分禽 HEV ORF2 基因序列呈阳性。此外，通过PCR检测，5只鸡（5只肝脏和3只粪便样本）也是禽HEV RNA阳性的，其ALV env基因呈阳性。BLAST 结果显示，所有禽 HEV RNA 阳性样本序列与从 GenBank 获得的已知禽 HEV 毒株序列具有约 80-99% 的同一性，而 ALV 阳性样本的序列与 GenBank ALV-J 序列具有 90-95% 的同一性。网状内皮增生病毒在这些样本中未检测到临床马立克氏病病毒（数据未显示）。当一起考虑时，这些结果表明测试的鸡群同时感染了禽 HEV 和 ALV-J。

来源：鸡保姆，致谢本文原作者：Yani Sun,Qizhong Lu,Jingfei Zhang, Xiaoxuan Li,Jiakai Zhao,Wenqi Fan, Pinpin Ji, Kun Wang, En-Min Zhou, and Qin Zhao，中南山编译整理

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