与鸡传喉相关的自然并发感染
问题描述
鸡的呼吸道感染给全世界的家禽业造成了重大经济损失，损失的原因是生产力下降、体重减轻、产蛋量下降和死亡率增加，以及诊断测试、疫苗和抗生素治疗费用的增加。这种感染受到限制系统的青睐，这些系统促进了传染性病原体的发展和传播。
多种病原体与鸡的呼吸道感染有关，包括病毒如鸡疱疹病毒 1 (GaHV-1) 和白喉型禽痘病毒(APV) 和细菌如支原体属和副鸡禽杆菌。这些呼吸道病原体尤其成问题，因为它们可能导致单一感染或多种疾病 。并发感染 、霉菌毒素引起的免疫抑制或传染性法氏囊病病毒 (IBDV) 感染通常会加重和延长病变的严重程度，还有鸡贫血病毒(CAV) 和禽呼肠孤病毒(ARV) 。
呼吸系统疾病病因的快速和早期检测对于有效控制和减少损害至关重要。然而，由于呼吸道临床症状和大体病变的相似性，它变得具有挑战性。此外，该过程可能涉及不止一种药剂，需要额外的组织学和微生物学分析才能进行最终诊断 。PCR 的病原学检测是一种有效的诊断工具，尽管它应该与病变的组织病理学评估相结合，以确认由于某些病原体的携带者或潜伏状态而导致的疾病 ，并考虑到定期使用抗支原体病的活疫苗和传染性支气管炎。
传染性喉气管炎 (ILT) 是一种高度传染性的病毒性呼吸道疾病，给全世界的家禽业造成严重问题 。ILT 的病原体是鸡疱疹病毒 1 (GaHV-1)，它是疱疹病毒科的一员，可在携带鸟类中诱发潜伏期 。疾病的诊断基于一项或多项实验室测试的确认，组织病理学是最快和最常见的方法 。
在禽支原体病中，鸡毒支原体感染是造成显着高发病率和经济影响的原因。随着鸡毒支原体疫苗使用率的提高，需要更准确的方法来追踪感染源并区分田间毒株和疫苗毒株。测序方法已作为一种新工具被引入这些病原体的分子流行病学研究。使用多位点序列分型(MLST)对大量遗传目标进行测序有助于区分不同菌株。鸡毒支原体可以通过对位于 16S 和 23S rRNA 基因之间的基因间隔区 (IGSR) 和细胞粘附素 (mgc2) 基因 进行测序来区分。
用于控制鸡毒支原体的可用减毒活疫苗包括菌株 MG F、ts-11、6/85 和MG-70 。然而，6/85 菌株并未在巴西使用。
鸡呼吸道合并感染的发生很少通过组织学和PCR联合分析进行研究。我们报告了自然感染鸡中 GaHV-1 和合并感染的发生，描述了与分子检测相关的组织学变化。此外，我们基于 IGSR 和 mgc2 基因的部分序列对鸡毒支原体进行了系统发育和分子分析。
材料和方法（略）结果
病史和临床体征
在鸡受到呼吸道疾病严重影响的所有农场中，观察到每周死亡率增加，平均达到 2%，在一个大约有 150,000 只鸡的农场，死亡率达到 10%，产蛋量显着下降。临床症状主要见于20-35周龄鸡，表现为咳嗽、打喷嚏、鼻窦肿胀、流鼻涕。其他体征包括冷漠、结膜炎和发绀。
大体病变和组织病理学
鼻甲和鼻旁窦呈充血、粘液粘稠和纤维蛋白渗出物，是中度急性鼻炎和鼻窦炎的特征。呈现长期疾病演变的鸡干酪样渗出物显着增加，确定了严重的鼻窦和面部肿胀。大多数鸡的气管出现中度至明显的粘液性或纤维蛋白性炎症。
在检查的鸡总数中，77.4% 的组织学变化提示仅被一种呼吸道病原体感染，而 22.6% 的组织病理学发现提示合并感染。在评估的鸡总数中61.3% 的组织学病变与 GaHV-1 感染一致，45.2% 的病变与支原体感染一致，12.9% 与禽杆菌属一致的病变，3.2% (1/31) 的鸡表现出白喉型禽痘病毒感染的特征性病变。
在呼吸道黏膜中观察到的典型 ILT 病变以纤维蛋白渗出物、坏死和脱屑为特征，并形成含有核内包涵体的合胞体。支原体病的典型病变见于鼻甲、喉、气管和支气管的黏膜，其特征是固有层强烈增厚，淋巴细胞浸润，形成滤泡状，此外还有许多浆细胞和组织细胞。表面上皮呈多灶性至合并或弥散性扁平化，纤毛缺失，杯状细胞数量减少和固有层中的粘液腺。在有明显病变的鸡中，上皮变成立方体或扁平而没有纤毛。除了固有层中淋巴细胞和浆细胞的弥漫性浸润外，肺还出现支气管淋巴组织增生。在四只鸡中，观察到支原体 （见图1 ）。
图 1 受支原体和 GaHV-1共同感染的蛋鸡。
鸡的肺表现为支气管黏膜明显增厚，其特征是淋巴细胞炎性浸润和滤泡样形成。上皮出现纤毛脱落、脱屑和含有核内包涵体的合胞细胞。H&E，400 倍。
提示支原体病和喉气管炎的中度至重度病变主要发生在气管近端，而在远端则观察到轻度至中度病变。任何鸡的大脑或三叉神经节均未观察到变化。
感染性鼻炎的病变的鸡表现出鼻甲和鼻窦的变化以及喉部、气管和肺部的轻度病变。病变的特征是明显的坏死性和嗜异性鼻炎和鼻窦炎。鼻旁窦充满无定形嗜酸性物质，含有细胞碎片和病灶内细菌菌落。在喉和气管，固有层中观察到多灶性至合并的异嗜性浸润，上皮细胞多灶性坏死。在肺部，肺实质和支气管固有层有异嗜性和组织细胞性炎症浸润。Goodpasture 染色的鼻窦切片显示大量含有革兰氏阴性杆菌的细菌菌落。
在喉部和近端气管的上皮中观察到禽痘病毒的特征性病变。有淋巴浆细胞性喉炎和气管炎伴上皮增生、鳞状化生，上皮细胞内可见大量胞浆内嗜酸性包涵体（Bollinger包涵体）（图2）
图 2。GaHV-1 和禽痘病毒自然共感染的蛋鸡。H&E，400 倍。
气管呈黏膜化生，特征为鳞状上皮增生伴数个嗜酸性胞浆内包涵体和合胞细胞伴核内包涵体。
讨论
本研究中不同呼吸道病原体之间的关联可能导致受感染鸡的死亡率增加。由病毒引起的疾病中的合并感染或继发感染可能会导致更严重的情况，导致死亡率增加 。然而，环境和病原体毒力的变化也可能影响疾病严重程度和死亡率，如 GaHV-1、 MG和A. paragallinarum所述。
混合感染的诊断特别具有挑战性，因为确定病因可能需要多种方法 。然而，病因的检测可能不足以完成疾病和/或死因的诊断。上述呼吸道感染可能会发展为潜伏状态，例如 GaHV-1 和M.galisepticum 。此外，如支原体病所述，存在减毒活疫苗株可能会导致 PCR 反应阳性结果。 因此，将这些发现与组织病理学分析联系起来对于确定因果关系并进行明确诊断至关重要。重要的是要强调通过 PCR 或培养和分离检测阳性样本的频繁失败，即使组织病理学病变强烈表明特定试剂也是如此。样本中抗原浓度低可能导致无法识别，这在慢性感染中很常见 。
Mohamed 等人描述了与A. paragallinarum 继发感染相关的 GaHV-1 感染。作者认为，混合感染可导致自然爆发中的潜伏期缩短和死亡率增加，这表明呼吸系统药物具有协同作用。在本研究中，组织病理学结果显示合并感染的疾病发生率低于 PCR 结果显示的频率。因此，很明显，抗原的存在并不一定会导致疾病状态，因为鸡可能充当一种或多种病原体的沉默携带者。
先前基于血清学和分离的研究表明，GaHV-1 中涉及大肠杆菌和副鸡 A.感染，证明了鸟类呼吸道感染的混合特征。由于原发性传染原引起的免疫抑制，这些病原体通常在宿主中找到有利的感染条件，例如传染性法氏囊病病毒或传染性贫血病毒 或继发感染呼吸道病毒感染，例如低致病性流感病毒。活的减毒疫苗（如 for）传染性支气管炎病毒疫苗还可以促进大肠杆菌。高浓度的氨和灰尘也会导致呼吸窘迫，这可能是由于不卫生的条件、管理不善和人口密度高。此外，季节性变化、天气和寄生虫感染可能与免疫反应受损有关 。
支原体属 本研究的蛋鸡感染可能是多种因素的结果。将鸡从无疫苗接种区释放到接种过疫苗的鸡场会增加患病的可能性。生物安全失败或疫苗接种计划不足也可能起作用。M. gallisepticum以其与其他呼吸道病原体（病毒或细菌）的致病协同作用而闻名，例如A.副鸡嗜血杆菌和大肠杆菌。M. gallisepticum之间的相互作用和 GaHV-1 与本研究中观察到的相似，先前已报道过 。滑膜分枝杆菌引起亚临床呼吸道感染，尽管大多数致病菌株会引起临床呼吸道疾病 。生物安全的失败和不良的疫苗接种计划导致支原体病的持续存在 ，使鸡容易受到其他呼吸道病原体的感染。
白喉型的剧毒禽痘病毒会在口腔和呼吸道黏膜中产生严重损伤，这些损伤很容易与 ILT 混淆 。在这项研究中，一只鸡呈现出与这两种病原相容的组织学损伤，包括有时在同一细胞中观察到的核内和细胞质内包涵体。近期，报告了新的涉及禽痘病毒和 GaHV-1 的合并感染病例。
鸡可以是无症状携带者 ,需要结合分子检测和组织病理学进行诊断，这应证明病因和相应的病变。此外，还需要通过测序来表征疫苗（减毒株）和野毒株之间的致病性或区分 。多个区域的测序，特别是 IGSR 和 mgc2 基因的片段，可以区分支原体菌株 。核苷酸分析本研究中 IGSR 序列的比对允许鉴定三种不同的菌株。在这三种毒株中，两种被定性为田间毒株，一种源自巴西用于蛋鸡的疫苗 (2012/1)，与美国的 F 毒株相同。奇怪的是，2013 年收集的任何样本都没有 IGSR 扩增，这可能是目标区域突变或缺失的结果。然而，同样的样本也分析了 mgc2 基因的片段，显示存在四种不同的田间毒株和一种疫苗毒株。mgc2 基因片段序列与 GenBank 中公布的序列的比对再次显示菌株 2012/1 与疫苗 F 菌株之间的 100% 同一性。然而，虽然 F 株感染可能导致呼吸道黏膜固有层炎症浸润增加，但疫苗株感染不会导致纤毛上皮形成大淋巴细胞聚集和化生 ，这是在 2012/1 菌株感染中观察到的。
在个别鸡中，鸡毒支原体的测序表明存在与疫苗菌株在遗传上无关的田间菌株。2011 年的三个菌株来自一个农场饲养的鸡，这些鸡没有接种支原体病疫苗，可能是田间菌株。在这种情况下，组织病理学病变是中度至强烈的。菌株 2012 和 2013 是从鸡场获得鸡感染M. gallisepticum F 和 MG-70 菌株的。然而，在 2012 年至 2013 年期间，在接种鸡毒支原体疫苗的鸡中发现的鸡毒支原体菌株的高度变异性表明，接种疫苗并不能保证对不同菌株的交叉保护，并且可能使野毒株和疫苗毒株????。
结论和应用
[*]1.多种病因的呼吸道疾病的发病率可能是蛋鸡的常见病症，主要是由于高密度鸡群中存在多龄鸡。
[*]2.组织病理学是一种基本的诊断技术，可用于指导分子确认测试，单独应用时不会区分携带者或无症状个体。
[*]3.已经表明，在评估的农场中用鸡毒支原体疫苗株进行疫苗接种并不能保证对不同的鸡毒支原体菌株提供必要的保护，这些毒株具有很高的遗传变异性。
[*]4.这项研究强调，遗传分析对于区分鸡毒支原体疫苗和田间毒株的基因型很重要。此外，它可以阐明这种病原体的进化进程和疫苗接种的影响。
来源：鸡保姆，中南山 编译整理
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