添加剂鉴别及测试
添加剂复合预混料中微量矿物质元素测定一、铁、铜、锌、锰、钴元素含量的测定
1.试剂和溶液
硝酸；盐酸：(v/v)溶液；铁、铜、锰、锌、钴标准储备溶液：分别用各元素高纯制剂配制成1000毫克/毫升浓度的溶液，盛于塑料瓶中，存放在冰箱里。
2.仪器
原子吸收/火焰分光光度计。
3.测定步骤
①试样分解称取1.0000克样品于K氏瓶中，加30毫升浓硝酸放置过夜，在电炉上加热至瓶内液体剩下2～3毫升时，加10毫升盐酸溶液，继续加热数分钟，冷却后移至50毫升容量瓶中，用去离子水定容摇匀。
用同样操作做空白试验。
②校正曲线按下列各元素浓度由标准储备液分取稀释，配成标准系列溶液(微克/毫升)：
Zn 0 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0；
Cn 0 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0；
Mn 0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0；
Fe 0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0；
Co 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0；
分别用原子吸收分光光度计测定吸收值，绘制成校正曲线。
③测定 将试样分解液或稀释后用原子吸收分光光度计测定各元素的吸收值。
④计算和结果表示 各元素含量Xi(以毫克/千克表示)按下式计算：
Xi=Ci×V/m
式中Ci：用待测液吸收值从校正曲线查得的浓度，微克/毫升；
m：样品质量，克；
V：样品定容体积，毫升。
二、碘含量测定
1.试剂和溶液
硫代硫酸钠：0.005N溶液按GB601-77标定；无水碳酸钠；氢氧化钠：1+1(V/V)溶液；95％乙醇；85％磷酸；溴水；水杨酸；碘化钾；
淀粉指示剂：于25～30毫升蒸馏水中加1克可溶性淀粉，在不断搅拌下把淀粉悬浮液慢慢倒入50毫升沸水中。冷却，并用蒸馏水稀释成100毫升。
2.测定步骤
称取0.5～1.0克样品(准确至0.1毫克)于50毫升镍坩埚中，加5.0克碳酸钠，5毫升氢氧化钠溶液，10毫升乙醇，注意使全部样品湿润，在水浴中加热除去乙醇，然后将坩埚移入100℃烤箱内干燥2小时。
把坩埚置于电热板上炭化后移入马福炉内，在500℃下炭化30分钟，冷却后加15毫升蒸馏水，在电炉上小火煮沸10分钟。
将坩埚内容物转移到虑纸上过滤，并用沸水洗涤数次，收集虑液和洗液于三角瓶中(全部虑液应大致为300毫升)。以甲基橙为指示剂，用磷酸中和粉红色后再补加1毫升磷酸。
加过量溴水(溶液变成黄色)，缓缓煮沸至溶液无色，再煮5分钟。加入水杨酸少许，冷却后，加1毫升磷酸，0.5克碘化钾摇匀，用0.005N硫代硫酸钠滴定至接近无色，加淀粉指示剂1.0毫升，并继续滴定至蓝色完全消失。
3.计算和结果表示
碘含量(毫克/千克)=V×105.8/m
式中 V：滴定时消耗硫代硫酸钠体积，毫升；
m：样品质量，克；
105.8：1.0毫升0.005N硫代硫酸钠相当碘的量，微克。
4.讨论
此法是测定复合预混料中碘的经典方法，实际测定过程中应注意下列几点：
①炭化时，不能象其它如钍、磷等微量元素测定时那样要求灼烧成“白灰”；对于不含有机物的预混料产品，测试时可添加有机物如淀粉、面粉或谷物，称样量在0.5～1.0克，添加1～2克有机物。
②低浓度的硫代硫酸钠很不稳定，极易被氧化，要求在每次测定样品过程中要及时标定硫代硫酸钠。
三、硒元素含量的测定
微量元素硒的测定方法很多，如荧光法、气相色谱法、原子吸收分光光度法及催化极谱法等。栾翠玉等(1992)推荐丁基黄原酸钾分光光度法，此法简易、条件不苛刻，本书只介绍此法。
1.原理
在酸性介质中，丁基黄原酸钾与四价硒生成一种黄色油状络和物，用紫外分光光度计直接测定。
2.仪器与试剂
751克型紫外分光光度计；恒温水浴箱；去离子水；丁基黄原酸钾：商品试剂；亚硒酸钠储备液：称取亚硒酸钠(分析纯)0.2235克溶解定容1000毫升(100微克/毫升)；
乙酸?乙酸钠缓冲液：pH=4
3.测定方法
称取预混料0.2000克于1000毫升烧杯中加水溶解，过滤于500毫升容量瓶中，定容。取10毫升提取液于50毫升纳氏比色管中，加入2％EDTA-2Na溶液1.0毫升和pH=4.0的乙酸?乙酸钠缓冲液0.5毫升，混匀，加入0.2％黄原酸钾2.0毫升，置于25℃水浴中保温1小时，加入四氯化碳8.0毫升萃取2分钟，溶于有机相中的丁基黄原酸?硒络合物，静止2小时后，以试剂空白为参比，在波长300纳米处测定其吸光度。
用亚硒酸钠储备液，配制成0～16微克/毫升内不同浓度的硒标液，在上述条件下测定吸光度，绘制工作曲线。并从工作曲线查出试样中硒元素的浓度，再换算成硒元素含量(毫克/千克)。
三、流散剂
流散剂也叫流动剂、抗结块剂。它是改善加工工艺性能和提高饲料耐存性的辅助剂。它对流动缓慢，易粘不散和对湿度敏感的物料，可提高它们的泻注性和贮存的稳定性，在制作添加剂和预混料中常常使用。
配合饲料中有各式各样的组分，它们有着种种不同的加工性能，例如：有的是经过干燥的有机物，有的是液体状态的油或糖蜜，有的是对特异条件特别敏感的维生素添加剂和微量元素，有的具有粘着性，有的表面湿度过高，有的表面凹凸不平等等。使用流散剂可以调节这些性状，使它们容易流动、散开，表现为泻注性增强。
流散剂的作用在于它本身是微小的颗粒，能把粉料中的其它颗粒包围起来，填充于它们之间，把这些颗粒分开，不能形成团块，不能粘着。
流散剂有天然的和合成的硅酸化合物和硬脂酸盐，对动物完全无害，可单独使用或混在一起使用。它们的作用机制不同。
常用的流散剂有：硬脂酸钙、硬脂酸钠、硬脂酸钾、滑石粉、硅藻土、硅酸钙和脱水硅酸等。
流散剂的使用量为饲料的0.5％～2％，一般用在预混料中，在全价饲料中一般不用。
常用微量元素含量的鉴别和测定
一、饲料级硫酸铜
(一)鉴别
1.试剂和溶液 乙二胺四乙酸二钠(GB1401-78)：15％(m/v)溶液；氢氧化钠(GB665-81)：0.1摩尔/升溶液；硫酸铜(GB652-78)：0.02％(m/v)溶液；氯化钡：5％(m/v)溶液；乙酸乙酯(Hg3-1226-79)。
2.操作步骤 铜离子：取试样溶液5毫升，加0.5毫升乙二胺四乙酸二钠溶液，加0.5毫升氢氧化钠溶液，加1毫升乙酸乙酯振摇，有机层呈棕色。硫酸根离子：取试样溶液适量于试管中，加氯化钡溶液，即有白色沉淀生成，在盐酸和硝酸中不溶。
(二)硫酸铜含量的测定
1.原理 加入碘化钾，将溶液中的二价铜离子还原为一价铜离子，并用硫代硫酸钠标准溶液滴定，以释出的碘来测定铜的含量。
2.试剂和溶液 硫代硫酸钠(GB637-77)：(Na2S2O3)约为0.1摩尔/升的标准溶液；冰乙酸(GB676-78)；可溶性淀粉(Hg3095-59)：0.5％(m/v)溶液；碘化钾(Hg1272-77)。
3.操作步骤 称取0.5克试样(m)，称准至0.0002克，置于碘量瓶中，加50毫升水溶解，加4毫升冰乙酸，加2克碘化钾，摇匀后，于暗处放置10分钟，用硫代硫酸钠标准液(V，毫升)滴定至淡黄色，加2毫升淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚刚消失即为终点。
4.计算
CuSO4·5H2O(％)=(C·V×0.2497)/m×100=(C·V×24.97)/m
Cu(％)=(C·V×0.06355)/m×100=(C·V×6.355)/m
式中C：硫代硫酸钠标准溶液的摩尔浓度，摩尔/升；
V：滴定时消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，毫升；
m：试样质量，克；
0.2497：每毫摩尔硫酸铜(CuSO4·5H2O)的克数；
0.06355：每毫摩尔铜的克数。
二、饲料级硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)
(一)鉴别
1.试剂和溶液 铁氰化钾(GB644-77)：10％(m/v)溶液；氯化钡(GB652-77)：5％(m/v)溶液。
2.操作步骤 硫酸根离子：取试样溶液适量于试管中，加氯化钡溶液，即有白色沉淀生成，在盐酸和硝酸中不溶。亚铁离子：取试样溶液，加铁氰化钾溶液，生成深蓝色沉淀。
(二)硫酸亚铁含量的测定
1.原理 在酸性介质中，用高锰酸钾滴定硫酸亚铁。微过量的高锰酸钾指示终点的到达。
2.试剂和溶液 硫酸(GB625-77)；磷酸(GB1282-77)；高锰酸钾(GB647-77)：约为0.1摩尔/升的标准溶液。
3.操作步骤 称取0.5克试样，称准至0.0002克，溶于50毫升不含氧的水中，加5毫升硫酸，2毫升磷酸，用高锰酸钾标准溶液滴定至溶液呈现的粉红色在30秒内不消失为止。
4.计算
FeSO4·7H2O(％)=(C·V×0.2780)/m×100=(C·V×27.80)/m
Fe(％)=(C·V×0.05585)/m×100=(C·V×5.585)/m
式中C：高锰酸钾标准溶液的浓度，摩尔/升；
V：滴定时消耗高锰酸钾的体积，毫升；
m：试样质量，克；
0.2780：每毫摩尔硫酸亚铁的克数；
0.05585：每毫摩尔铁的克数。
三、饲料级硫酸锌(ZnSO4·7H2O，ZnSO4·H2O)
(一)鉴别
1.试剂和溶液 乙酸(GB676-78)：1+10；硫酸钠(Hg3-122-64)：25％(m/v)溶液；双硫腙：1+100四氯化碳溶液；氯仿；氯化钡：5％(m/v)溶液。
2.操作步骤 锌离子的鉴别：称取0.2克试样，溶于5毫升水中，移取1毫升试液，用乙酸调节溶液的pH为4～5，加两滴硫酸钠，再加数滴双硫腙四氯化碳溶液和1毫升氯仿，振摇后，有机层显紫红色。硫酸根离子的鉴别：取试样溶液适量于试管中，加氯化钡溶液，即有白色沉淀生成，在盐酸和硝酸中不溶。
(二)硫酸锌含量的测定
1.原理 将硫酸锌用乙酸溶解，加适量水，以六次甲基四胺调节溶液的pH至5～6，以二甲酚橙为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准溶液滴定，终点颜色由紫红色变为亮黄色。
2.试剂和溶液 乙酸(GB676-78)：1+16溶液；六次甲基四胺(GB1400-78)：20％(m/v)溶液；二甲酚橙指示剂：0.2％(m/v)溶液；乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)(GB1401-78)：约为0.05摩尔/升的标准溶液。
3.操作步骤 称取0.3克七水硫酸锌试样(或0.2克一水硫酸锌试样)，称准至0.0002克，置于200毫升三角烧瓶中，加30毫升乙酸，使试样溶解，加30毫升水及2滴二甲酚橙指示剂，然后滴加六次甲基四胺溶液至溶液呈紫红色后，再过量5毫升，用乙二胺四乙酸二钠标准溶液滴定至溶液由紫红色变为亮黄色即为终点。
4.结果计算
ZnSO4·7H2O(％)=(C·V×0.2875)/m×100=(C·V×28.75)/m
ZnSO4·H2O(％)=(C·V×0.1790)/m×100=(C·V×17.90)/m
Zn(％)=(0.06537×C·V)/m×100=(6.537×C·V)/m
式中C：乙二胺四乙酸二钠标准溶液的摩尔浓度，摩尔/升；
V：滴定所消耗乙二胺四乙酸二钠标准溶液的体积，毫升；
m：试样质量，克；
0.2875：每毫摩尔ZnSO4·7H2O的克数；
0.1790：每毫摩尔ZnSO4·H2O的克数；
0.06537：每毫摩尔锌的克数。
四、饲料级硫酸锰(MnSO4·H2O)
(一)鉴别
1.试剂和溶液 硝酸(GB626-78)；铋酸钠(GB635-65)；氯化钡(GB652-77)：5％(m/v)溶液。
2.操作步骤 锰离子的鉴别：称取0.2克试样，溶于50毫升水中，取3滴于点滴板上，加2滴硝酸，再加少许铋酸钠粉末，产生紫红色。硫酸根离子的鉴别：
取试样溶液适量于试管中，加氯化钡溶液，即有白色沉淀生成，在盐酸和硝酸中不溶。
(二)硫酸锰含量的测定
1.原理 将硫酸锰用水溶解，以盐酸羟胺为还原剂，用氨?氯化铵溶液控制试液的pH值为10，加铬黑T指示剂，以乙二胺四乙酸二钠滴定至形成蓝色络合物。
2.试剂和溶液 盐酸羟胺(Hg3-967-76)；氟化铵(GB1276-77)；氨-氯化铵缓冲溶液，pH=10；铬黑T指示剂：0.5％(m/v)溶液；乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)(GB1401-78)：约为0.05摩尔/升的标准溶液。
3.操作步骤 称取0.3克试样，称准至0.0002克，置于250毫升三角烧瓶中，加150毫升水溶解试样，再加0.5克盐酸羟胺，溶解后，加3克氟化铵掩蔽剂，加热至63～65℃，马上加10毫升氨?氯化铵缓冲溶液，摇匀后用乙二胺四乙酸二钠标准溶液滴定(滴定时保持60℃恒温)，接近终点时，加3～4滴铬黑T指示剂，继续滴定至溶液由紫红色转变为蓝色。
4.结果计算
MnSO4·H2O(％)=(C·V×0.1690)/m×100=(C·V×16.90)/m
Mn(％)=(C·V×0.05494)/m×100=(C·V×5.494)/m
式中C：乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)标准溶液的浓度，摩尔/升；
V：滴定所消耗的乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)标准溶液的体积，毫升；
m：试样质量，克；
0.1690：每毫摩尔MnSO4·H2O的克数；
0.05494：每毫摩尔Mn的克数。
五、饲料级亚硒酸钠
(一)鉴别
1.试剂和溶液 乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)：15％(m/v)溶液；甲酸(Hg3-1296-80)：1+9溶液；盐酸(GB622-77)：1+1溶液；硒试纸(盐酸-3，3-二氨基联苯胺)：0.5％(m/v)溶液。
2.仪器 一般实验室仪器和铂丝。
3.操作步骤 亚硒酸根离子的鉴别：取试样少许，加5毫升水溶解，加5滴乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)溶液，加5滴甲酸溶液，用盐酸调节pH值至2～3。加5滴硒试剂振摇，放置10分钟，即产生沉淀。钠离子的鉴别：用铂丝蘸取盐酸，在无色火焰中燃烧至无色。蘸取试样，在火焰上燃烧，火焰呈黄色。
(二)亚硒酸钠含量的测定
1.原理 在强酸介质中，亚硒酸钠与碘化钾发生氧化还原反应产生游离碘，硫代硫酸钠将游离碘还原成碘离子，以淀粉为指示剂，根据颜色变化判断反应终点。
2.试剂和溶液 碘化钾(GB1272-77)；盐酸(GB622-77)；淀粉指示剂(Hg3095-59)：1％(m/v)溶液；硫代硫酸钠(GB637-77)：约为0.1摩尔/升的标准溶液；二硫化碳(GB1615-79)。
3.操作步骤 称取0.1克预先在105～110℃下烘干至恒重的试样，称准至0.0002克，置于带有瓶塞的250毫升锥形瓶中，用50毫升水溶解，加1克碘化钾，加8毫升二硫化碳，再加3毫升盐酸摇匀，放置5分钟，用硫代硫酸钠标准溶液滴定，边滴定边强力振摇，接近终点时，用2毫升淀粉指示剂继续滴定至水层蓝色消失。
另以相同条件做空白试验。
4.结果计算
Na2SeO3％=(0.1729×C·(V1-V2))/4m×100=(4.323×C·(V1-V2))/m
Se(％)=(0.07896×C·(V1-V2))/4m×100=(1.974×C·(V1-V2))/m
式中C：硫代硫酸钠标准溶液的浓度，摩尔/升；
V1：试样所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积，毫升；
V2：空白试验所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积，毫升；
m：试样质量，克；
0.1729：每毫摩尔Na2SeO3的克数；
0.07896：每毫摩尔Se的克数。
六、饲料级碘化钾
(一)鉴别
1.试剂和溶液 淀粉(Hg3095-59)：1％(m/v)溶液。
2.操作步骤 碘离子的鉴别：称取0.5克试样，称准至0.01克，置于50毫升烧杯中，用5毫升水溶解，加入1毫升淀粉溶液，产生蓝紫色。钾离子的鉴别：取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取试样，在无色火焰中燃烧，火焰呈紫色，但含少量钠盐时，须隔蓝色玻璃透视，方可辨认。
(二)碘化钾含量的测定
1.原理 碘化钾和硝酸银反应，生成淡黄色沉淀，反应式表述如下：
KI+AgNO3→KNO3+AgI↓
2.试剂和溶液 冰乙酸(GB676-78)：1+16溶液；曙红钠(Hg3395-60)：0.5％(m/v)乙醇溶液；硝酸银(GB670-?77)：约为0.1摩尔/升的标准溶液
3.操作步骤 称取0.25克预先在105℃烘干至恒重的试样，称准至0.0002克，置于250毫升锥形瓶中，用50毫升水溶解，加5毫升冰乙酸及3滴曙红钠，用硝酸银标准溶液避光滴定至溶液呈肉红色，即为终点。
4.结果计算
KI(％)=(0.1660×C·V)/m×100=(16.60×C·V)/m
I(％)=(0.1270×C·V)/m×100=(12.7×C·V)/m
式中C：硝酸银标准溶液的浓度，摩尔/升；
V：滴定所消耗的硝酸银标准溶液的体积，毫升；
m：试样质量，克；
0.1660：每毫摩尔碘化钾的克数；
0.1270：每毫摩尔碘的克数。
七、饲料级氯化钴
(一)鉴别
1.试剂和溶液 冰乙酸(GB676-78)；乙酸钠(GB693-77)；乙酸-乙酸钠缓冲溶液：称取2.7克乙酸钠，加60毫升冰乙酸溶于100毫升水中即成。钴试剂{4-［(5-氯-2-吡啶)偶氮］-1，3-二氨基苯}：0.1％(m/v)乙醇溶液。称取0.1克钴试剂溶于100毫升95％乙醇中，棕色瓶中贮存。硝酸银(GB670-77)：2％(m/v)溶液；盐酸(GB622-77)：2+1溶液。
2.操作步骤 钴离子的鉴别：取试样溶液，加2毫升乙酸-乙酸钠缓冲溶液，加3滴钴试剂溶液，3滴盐酸溶液，溶液呈现红色。氯离子的鉴别：取试样溶液，加硝酸银溶液，即有白色沉淀生成，在硝酸中不溶。
(二)氯化钴含量的测定
1.原理 在酸性介质中，Co2+和SCN-生成具有［Co(SCN)4］2-离子式的络合物，在丙酮存在的情况下，用乙二胺四乙酸二钠滴定，Co2+与乙二胺四乙酸二钠生成红色络合物，达终点时，蓝色消失。
2.试剂和溶液 盐酸羟胺(Hg3-967-76)；硫氰酸铵(GB660-78)；乙酸铵(GB1292-77)：饱和溶液；丙酮(GB686-78)；乙二胺四乙酸二钠：约为0.05摩尔/升的标准溶液。
3.操作步骤 称取0.3克试样，称准至0.0002克，置于250毫升锥形瓶中，加50毫升水溶解，加0.25克盐酸羟胺，加10克硫氰酸铵，加4毫升饱和乙酸铵溶液，摇匀后再加50毫升丙酮，以乙二胺四乙酸二钠标准溶液滴定至蓝色全部消失即为终点。
4.结果计算
CoCl2·6H2O(％)=(0.2379×C·V)/m×100=(23.79×C·V)/m
Co(％)=(0.05893×C·V)/m×100=(5.893×C·V)/m
式中C：乙二胺四乙酸二钠标准溶液的浓度，摩尔/升；
V：滴定所消耗的乙二胺四乙酸二钠标准溶液的体积，毫升；
m：试样质量，克；
0.2379：每毫摩尔CoCl2·6H2O的克数；
0.05893：每毫摩尔Co的克数。
部分药物性饲料添加剂的定性检测
一、对氨基苯胂酸或对氨基苯胂酸盐
1.试剂
浓盐酸；0.1％亚硝酸钠；0.5％氨基磺酸胺；0.1％双盐酸化N-1-萘基乙烯二胺水溶液。
2.操作步骤
将0.1克试样和4毫升水放到蒸发皿内，边加热边摇动，再加入1毫升浓盐酸，混合并过滤。往滤出液中加入2毫升0.1％亚硝酸钠溶液，混合均匀后静置5分钟；再加入2毫升0.5％氨基磺酸胺溶液，混合均匀后静置2分钟。再加入1毫升0.1％双盐酸化N-1-萘基乙烯二胺水溶液。如有对氨基苯胂酸或对氨基苯胂酸盐存在，即呈紫色。
二、氨丙啉
1.试剂
溶液A：将2.5克铁氰化钾和3克氢氧化钠溶解于500毫升蒸馏水中；溶液B：将50毫克2，7-萘二醇和500毫升甲醇溶解于150毫升蒸馏水中；溶液C：水、甲醇和氯仿(1∶1∶1)
2.操作步骤
将4毫升溶液A与13毫升溶液B混合，将8～10克试样加到30毫升溶剂C中，摇动一分钟，然后静置1分钟，让其沉淀。将5毫升试样的上清液置入溶液A和溶液B的混合液，充分混合。如果有氨丙啉存在，溶液即呈紫色。
三、杆菌肽
1.试剂
茚满三酮溶液：将200毫升茚满三酮溶解于100毫升正丁醇中；
乙酸盐缓冲溶液：50％氢氧化钠与浓乙酸的混合液(pH=4)。
2.测定步骤
用茚满三酮溶液渗透滤纸，然后放入100℃烘箱中烘5分钟；将0.1克试样放在滤纸中央，加１滴乙酸盐缓冲液，再放入烘箱中烘５分钟，若有杆菌肽存在，呈现紫粉红色。
四、金霉素和土霉素
1.试剂及配制
将10克硼酸溶解于300毫升蒸馏水中，边慢慢加水边搅拌，然后再加入700毫升浓硫酸(贮存在冰箱内)。
2.操作步骤
将每种试样取少量放在滴试板上或培养皿内，加2～3滴配好的硼酸浓硫酸溶液，若有金霉素存在，试剂一加入即呈现深紫蓝色；若有土霉素存在，试剂一加入即呈现亮红色。
五、青霉素和普鲁卡因青霉素
1.试剂
溶液A：pH=4乙酸盐缓冲溶液；溶液B：将两克对二甲氨基苯甲醛溶解在100毫升20％的盐酸中。
2.操作步骤
将少量试样放在培养皿中或白色滴试板上，加2～3滴溶液A，再加2～3滴溶液B，当普鲁卡因青霉素完全溶解在试剂B中时，即呈现出浓黄色。
部分维生素原料的鉴别和测定
一、维生素E
（一）鉴别
1.试剂 无水乙醇(GB678-78)；硝酸(GB626-78)。
2.操作步骤 称取样品约相当于维生素E15毫克，加无水乙醇10毫升溶解后，加硝酸2毫升摇匀，在75℃加热约15分钟，溶液呈橙红色。
(二)维生素E含量的测定
1.试剂和溶液 95％乙醇；无水乙醇；硫酸(GB625-77)；二苯胺(GB681-78)：1％(克/毫升)硫酸溶液；硫酸铈(Hg10-2244-82)；硫酸铈标准溶液：0.01摩尔/升。
2.测定方法 称取样品约相当于维生素E0.18克(准确至0.0002克)，置于100毫升量瓶中，加无水乙醇至刻度。振摇30分钟，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，小心吸取续滤液50毫升，置于回流瓶中，加硫酸3毫升，摇匀，加热回流3小时，冷却后移置于100毫升量瓶中，用无水乙醇反复洗涤容器，洗液放入量瓶中，再加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。小心吸取25毫升，加乙醇20毫升，水10毫升，二苯胺硫酸溶液2滴，用0.01摩尔/升硫酸铈标准溶液滴定，滴定速度以每10秒25滴为宜，至溶液由亮黄色转变为灰紫色。持续10秒钟，即为终点。滴定结果用空白试验校正。
3.结果计算
样品所含维生素E相当标示量的百分数X(％)：
X(％)=((V1-V2)×F×0.002364×8)/m×K×100=1.8912×(F×(V1-V2))/m×K
式中V1：样品溶液消耗硫酸铈标准溶液的体积，毫升；
V2：空白溶液消耗硫酸铈标准溶液的体积，毫升；
F：硫酸铈标准溶液浓度校正系数；
0.002364：滴定度(每毫升的0.01摩尔/升硫酸铈标准溶液相当于0.002364克的生育酚)
8：样品的稀释倍数；
m：样品质量，克；
K：维生素的标示量。
二、维生素B2
(一)鉴别
1.试剂和溶液 连二亚硫酸钠；冰乙酸；乙酸钠。
2.操作步骤 称取样品约1克，加水100毫升，其溶液在透射光下，显淡黄绿色，并有强烈淡黄绿色荧光；试液分成两份，一份中加入碱溶液，荧光即消失；另一份中加连二亚硫酸钠结晶少许，摇匀后黄色即消退，荧光消失。
(二)维生素B2含量的测定
1.试剂和溶液 冰乙酸；乙酸钠：1.4％溶液。
2.仪器设备 分光光度计，附1厘米比色皿
3.操作步骤 避光操作，称取样品约0.075克(准确至0.0002克)，放入烧杯中，加冰乙酸1毫升与水75毫升，加热溶解后，加水稀释，冷却后放入500毫升容量瓶中，再加水稀释至刻度，摇匀后小心吸取10毫升，放入100毫升容量瓶中，加1.4％乙酸钠溶液7毫升，并用水稀释至刻度，摇匀；另取1.4％乙酸钠溶液7毫升于100毫升容量瓶中，用水稀释至刻度，作为空白对照液，在1厘米比色皿内，用分光光度计于444±1纳米波长处测定吸光度。
4.结果计算
维生素B2(％)=(A/323×L×C)×100
式中A：样品在444±1纳米波长处测得的吸光度；
323：维生素B?2在444±1纳米波长处的吸光系数；
L：光路长度，1厘米；
C：100毫升溶液中样品的克数。
三、维生素B1(硝酸硫胺素)
(一)鉴别
1.试剂和溶液 硫酸；硫酸亚铁：取硫酸亚铁结晶8克，加新沸过的冷水100毫升，摇匀溶解，本液应临用新制；冰乙酸；乙酸铅：取乙酸铅10克，加新沸过的冷水溶解后，滴加冰乙酸使溶液澄清，再加新沸过的冷水至100毫升，摇匀待用；氢氧化钠：10％溶液；铁氰化钾：取铁氰化钾1克，加水10毫升溶解。本液应临用新制；异丁醇。
2.操作步骤 取2％样品溶液2毫升，加硫酸2毫升，放冷，缓缓加入硫酸亚铁溶液2毫升，两层溶液接触处产生棕色环。溶解样品约5毫克于乙酸铅溶液1毫升和氢氧化钠1毫升的混合液中，产生黄色；称取样品约5毫克，加氢氧化钠溶液2.5毫升，溶解后加铁氰化钾溶液0.5毫升与异丁醇5毫升，强力振摇2分钟，放置使之分层，上面的醇层显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性，荧光即消失，再加碱使成碱性，荧光又显出。
(二)硝酸硫胺素含量测定
1.试剂和溶液 盐酸；硅钨酸：10％溶液；盐酸：取盐酸5毫升，加水稀释至100毫升；丙酮。
2.操作步骤 称取样品0.05克，准确至0.0002克，加水50毫升溶解后，加盐酸2毫升煮沸，立即滴加硅钨酸溶液4毫升，继续煮沸2分钟，用在80℃干燥至恒重的4#垂熔坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液20毫升分次洗涤，再用水10毫升洗涤一次，最后用丙酮洗涤2次，每次5毫升，沉淀物在80℃干燥至恒重。
3.结果计算
硝酸硫胺含量X1按下式表示：
X1(％)=((W2×0.1939)/W1×(1-X2))×100=(19.39×W2)/((1-X2)×W1)
式中W1：样品质量，克；
W2：干燥后沉淀重量，克；
X2：样品干燥失重，重量百分数(％)；
0.1939：换算系数。
氨基酸添加剂的分析和测定
一、饲料级L-赖氨酸盐酸盐
(一)鉴别
1.试剂和溶液 茚三酮(Hg3-984-76)：0.1％(m/V)溶液；硝酸银(GB670-77)：0.1摩尔/升溶液；硝酸(GB626?78)：1+9溶液；氢氧化铵(GB631-77)：1+2溶液。
2.操作步骤 氨基酸的鉴别：称取试样0.1克，溶于100毫升水中，取此溶液5毫升，加1毫升茚三酮溶液，加热三分钟后，加水20毫升，静置15分钟，溶液呈紫红色。氯化物的鉴别：称取试样1克，溶于100毫升水中，加硝酸银溶液，即产生白色沉淀。加入稀硝酸，沉淀不溶解；另取白色沉淀，加入过量的氢氧化氨溶液，沉淀溶解。
(二)L-赖氨酸盐酸盐含量测定
1.试剂和溶液 甲酸(Hg3-1296-80)；冰乙酸(GB676-78)；乙酸汞(Hg3-1096-77)：6％(m/v)冰乙酸溶液；α-萘酚苯基甲醇指示剂：0.2％冰乙酸溶液；高氯酸(GB623-77)：约为0.1摩尔/升的冰乙酸标准溶液。
2.操作步骤 试样预先在105℃干燥至恒重，称取干燥试样0.2克，称准至0.0002克，加3毫升甲酸和50毫升冰乙酸，再加入5毫升乙酸汞的冰乙酸溶液。加入10滴α-萘酚苯基甲醇指示液，用0.1摩尔/升高氯酸的冰乙酸标准溶液滴定，试样液由橙黄色变为黄绿色即为滴定终点。用同样方法另作空白试验以校正之。
3.结果计算
C4H14N2O2·HCl(％)(0.09132×C·(V1-V2))/m×100
式中C：高氯酸标准溶液的浓度，摩尔/升；
V1：试样所消耗的高氯酸标准溶液的体积，毫升；
V2：空白试验所消耗的高氯酸标准溶液的体积，毫升；
m：试样质量，克；
0.09132：每毫摩尔赖氨酸盐酸盐的克数。
二、饲料级DL-蛋氨酸的测定
(一)鉴别
1.试剂和溶液 无水硫酸铜：硫酸饱和溶液；氢氧化钠：1+5水溶液；氨基乙酸：1+100溶液；硝基铁氰酸钠：1+10溶液；盐酸(GB622-77)：1+5溶液；茚三酮：2％(m/v)溶液；乙酸钠。
2.操作步骤 称取试样25m克，加1毫升无水硫酸铜饱合硫酸溶液，呈现黄色；称取试样5毫克，加5毫升水溶解氢氧化钠溶液2毫升，振荡混合，加1毫升氨基乙酸溶液，0.3毫升硝基铁氰酸钠溶液，然后再充分振荡混合，在35～40℃下放置10分钟，冰冷2分钟，加入10毫升稀盐酸溶液，振荡混合，溶液呈赤色。称取试样1克，溶于30毫升水中，取1毫升该试液，加1毫升茚三酮溶液和100毫克的乙酸钠，加热至沸腾，溶液呈蓝紫色。
(二)蛋氨酸含量的测定
1.试剂和溶液 磷酸氢二钾；磷酸二氢钾；碘化钾；碘：0.05摩尔/升的溶液；可溶性淀粉：0.5％(m/v)溶液；硫代硫酸钠：0.1摩尔/升溶液。
2.操作步骤 称取0.3克(准确至0.0002克)试样，放入具塞三角瓶中，加水100毫升，磷酸氢二钾2克，磷酸二氢钾2克，碘化钾2克，振荡混合溶解，准确加入0.05摩尔/升碘液50毫升，密塞后充分振荡混合，放置30分钟后，以1毫升淀粉试液为指示剂，用0.1摩尔/升硫代硫酸钠溶液滴定过量的碘，按同样的方法作空白试验。每1毫升0.1摩尔/升硫代硫酸钠溶液=7.460毫克C5H11NO2S。
3.计算结果
C5H11NO2S(％)=(K×(V1-V2))/m×100
式中K：每毫升硫代硫酸钠的毫克数
V1：试样消耗的硫代硫酸钠的体积，毫升；
V2：空白试验消耗的硫代硫酸钠的体积，毫升；
m：试样质量，克。
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