家禽样品采集与送检指南
一、外检样品操作流程：二、样品的采集：
1、材料：
病历档案单、中性笔、防护服、手套、口罩、酒精棉球、一次性注射器（1ml 和 2.5ml规格）、手术剪、眼科镊子、标记笔、样品袋、试子、无菌生理盐水或 PBS（含三抗）、离心管（1.5ml 规格）、照相机。
2、血清学检测：2.1样品采集2.1.1随机选择采样，比例按照：每栋鸡舍 5000-20000 只鸡 90%置信区间计算，每栋鸡舍不得少于 10 份，一般常规采样 20-50 份即可。2.1.2采样布控点：
2.1.3血样采集方式：（见下图图二）采血时先将注射器抽入少量空气，再将针头缓慢扎入血管或心脏，当见血液自动快速汞入针管时，说明针头已插进血管或心脏中，应即刻停止进针，进行抽血。（提前抽入少量空气，有利于观察针尖是否扎准血管和后期注射器直接凝血）
2.1.3.1颈静脉采血方法：左手将鸡固定好，鸡头朝下，可看到微细的血管，左手拇指压住血管近心端，右手拿稳注射器，针头与皮肤以15度角进针，确定针头插入血管后开始缓慢外抽，抽血开始后左手拇指松开，右手握好注射器不可左右晃动，当抽约有1ml血时（大鸡可使用5ml注射器抽2-3ml左右）拨出针头。
2.1.3.2鸡心脏采血方法：侧卧采血法：鸡侧卧固定鸡翅及双腿放置于桌上，自龙骨突前缘起引直线至翅基，在由此中点想髋关节引直线，此线前1/3和中1/3交界的嵌窝即进针部位。仰卧采血法：鸡头朝下固定，右手指触嗉囊下方龙骨突前缘嵌窝，感觉心脏位置，自嵌窝向斜下方与躯体呈45度角心脏方向刺入。（说明：适用于小日龄雏鸡；心脏采血对心脏有损伤，极易伤及肺脏等其它脏器，引起内脏出血，甚至造成死亡。）
2.1.3.3翅下静脉采血：固定鸡的翅膀和双腿，翅静脉下有三条血管汇合的嵌窝，于嵌窝后缘翅骨头进针，针尖缓慢插入静脉汇合处，自然汞血后立即停止进针，开始抽血。避免直接由静脉进针，以防导致出血过多。
2.1.4血样收集方法：将采集的血液沿管壁慢慢注入离心管（要拔掉针头注入），切忌用力过猛起泡或溶血。采好的血样要竖立放置，避免受冷和振动，在 25-37℃环境中静置 10-30min，这样有利于血液凝固和析出血清（见图三），否则容易发生溶血（见图四），然后放置 4℃冰箱或放置冰袋进行送检。也可将冲有气体的注射器（抽血完后避免晃动），针尖朝下（空气在上，血液在下）斜置，25-37℃环境中静置 10-30min析出血清。注意:不要把采集好的血样直接放在-20℃冰箱；采好血样的离心管或注射器不可颠倒或震荡。
2.1.5如何避免血清呈胶冻样：A、采血时间尽量避免于开采食后1-2h之内采血，尤其是种鸡，采血如在此阶段即易使血清呈胶冻样。B、采血后放置的时间太短，血液没有完全分层就做离心,由于离心使红细胞、活化的血小板离开了纤维蛋白网，缺乏磷脂表面，胶冻状的纤维蛋白将再也无法收缩，从而产生胶冻样的血清。因此建议采血后要多放一段时间，待纤维蛋白收缩后，再离心，上层就是清亮的血2.1.6采集的血样，根据不同分组区分放置，并做好标记。2.1.7如果需要检测鸡蛋抗体，请将鸡蛋分组包装好，以防运输过程中压碎，或者用5ml一次性注射器去除针头抽取无蛋清的卵黄3-5ml左右，将其针头，针帽还原，固定后送检。
3、病原学样品检测样品采集（病毒/细菌分离鉴定）
3.1对于病毒病原学病料检测样品，采样原则主要是样品新鲜、有代表性，有明显病理变化。在时机选择上，尽量避免在发病后期采样，严格避免打完相应血清后采样。
具体要求如下：
3.1.1每个发病鸡舍至少挑选 5 只具有发病共性的鸡只；3.1.2选择远离生产区，有消毒设施或便于消毒的区域剖检采样；3.1.3剖检前，先将鸡只浸泡于消毒盆中，沾湿羽毛，但不能让消毒液进入口腔内，同时避免送检器官组织的病原与消毒液接触；3.1.4采集脏器主要有肝脏、肾脏、肺脏、气管、法氏囊、脑等组织器官，在样品采集部位选择上，最好采集病变和健康交界部位的组织或脏器，避开包心包肝的鸡只，同时根据疫病特点，选取病毒含量高的部位进行采集。所采集的组织脏器一定要分别装袋。常见疫病采集部位见附表 1.3.2拭子的采集，主要是指采集泄殖腔拭子和咽拭子，操作动作应轻柔，具体操作如下：3.2.1准备工作：采样前，将采样缓冲液提前装入样品容器内，以不超过容器本身容积的 2/3为宜。3.2.2开启拭子包装时，要从尾端拿出拭子（根据采样动物大小，选择合适型号拭子），小心不要接触拭子顶端；3.2.3将无菌拭子插入盛有灭菌生理盐水或 PBS 的管中浸湿，然后拿出并将拭子顶端全部插入被采样部位的腔体中，轻缓用力并旋转，擦拭被采样部位的腔体内部 2-4 次；3.2.4最后打开容器，将样品端置于样品缓冲液中，并折断/剪下拭子的尾部，将拭子留在容器中，并拧紧/扣紧瓶盖；3.2.5采集注意事项：A、在进行气管拭子、咽拭子时，第3.2.3步骤，要等保护气管的软骨开启禽只吸入空气时，将拭子顶端轻轻插入气管，轻缓擦拭气管后部和四周后退出拭子，然后重复下面的步骤；B、若为采集肛腔拭子，需避免拭子带过大体积的粪便。C、如果禽只较小，气管开口直径狭窄，可能很难进行气管拭子采样，在这种情况下，应采口咽部拭子，将拭子顶端在禽只口腔内旋转，接触口腔上下部分以及舌后部分（图五）。
3.3细菌分离鉴定及药敏实验的样品采集其采样原则可参考病原学样品采集原则。具体要求如下：3.3.1每个发病鸡舍至少挑选 5 只具有发病共性的鸡只；3.3.2选择远离生产区域，且有消毒设施或便于消毒的区域采样；3.3.3剖检前，先将鸡只浸泡于消毒盆中，沾湿羽毛，但不能让消毒液进入口腔内；3.3.4采集部位是肝脏、肠道、关节腔、鼻窦等，其对应的不同细菌采集部位，见附表 2。
4、其他类型检测样品的采集
4.1 水质样品的采集①取自来水时，先将水龙头用酒精灯火焰灭菌，然后将水龙头打开，任其自流 5-10min（经常取水的水龙头放 1-3min 即可），再以灭菌试管或玻璃瓶取水备用；②取井水、池水、河水等地面水样时，须用特制的取水器，距水面 10-15cm 深处取水；③取鸡舍饮水器或水槽中的水样时，关闭水源，使水静置 30min，用灭菌吸管吸取水样放入灭菌容器内备用。4.2 饲料样品的采集4.2.1取样时应注意样品的代表性和避免采样时的污染。用灭菌金属勺以无菌操作采取有代表。4.2.2饲料样品的采集，可根据饲料存放的多少，分层定点取样或分层随机采取不同点的样品，充分混合后，取 500g 送检。4.3 环境样品的采集环境样品主要包括鸡舍地面、墙壁、门窗、笼具、车辆、水槽、食槽拭子样品、舍内空气、土壤等；4.3.1舍内空气采样由实验室专业人员，将培养皿盖打开，水平放置于鸡舍的 5 个布控采样点，高度宜选择在鸡背高度，根据污染情况，选择放置 3-15min，然后盖盖低温冷藏保存或运输；4.3.2地面、墙壁、门窗、器械等拭子的采集（包括种蛋表面），采用规板（5cm*5cm，种蛋为直径 3.5cm 的规板），将其放置于被检物体表面，在装有 4-5ml 灭菌生理盐水（或 PBS）的试管中浸湿灭菌棉试子，在试管壁上压挤掉多余盐水，然后在规板范围内滚动棉棒涂抹取样。剪去（或折去）棉棒手持端，使棉棒落入生理盐水（或 PBS）内，密闭管口低温冷藏送检壤样品采集，在土壤表层下 1-2cm 处，用灭菌金属勺取土壤数克，放入密闭容器内低温冷藏送检。4.4 其他样品的采集主要是一些非常规采样方法：如 MD 检测，摘取其病变内脏和带有羽髓的皮肤即可；关节炎的关节液样品，可以将整只鸡病变腿采集下来送检，也可用注射器无菌抽取关节液送检，其他液体类样品均可参考；种蛋样品的送检，将鸡蛋放于蛋托上，做好防碎工作即可；肠道采样需要注意，在剪取之前，先用线绳将剪取部位两端结扎，然后剪断即可。
注意：
1、样品送检前，对送检样品做编号区分，并同病历档案本一致。例如是哪个场哪个栋等信息。
2、在最后送检前或到送检单位后，填写详细病例档案本，以便提供有价值的背景资料，为实验室检测、分析提供参考。
3、送检时，采集的病料按照上述条件要求，及时装入保温箱中运送。血清等放入冰块冷存运送，病毒性病原病料冷送前最好先做冷冻，细菌性病原病料未送前的保存只能冷藏。在实际操作中，也可根据实际情况，灵活安排。3.1 开车送检：在 4h 车程内，可以简单包装后送检，夏季炎热高温情况下，放冰袋降温；4h 车程外，建议使用保温箱，里面放置保温袋冰袋进行包装运送。3.2 物流或客运运输：运送病料时尽量选择运输速度快的公司，保证所采集的病料及时送达，另外还需注意，对外包装进行加固，防止压碎、摔烂等情况发生。最后，及时与物流公司沟通，确保领取方便快捷，比如通过客车运送时，提供何地发往何处的客车，司机电话和车牌号等。
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