细菌的药敏试验
测细菌对抗菌药物敏感性的试验简称药敏试验。各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，即使同种细菌的不同菌株对同一种药物的敏感性亦有差异，尤其是近年来在兽医临床上广泛地使用抗菌素，导致耐药株的不断出现，故在临床上盲目地使用抗菌素往往不能达到预期的治疗效果。因此，在临床治疗前进行药敏试验以筛选有效的抗菌素并提出所需剂量是十分必要的。此外，药敏试验还可以调查耐药菌株的流行情况，为抗菌素的生产和使用提供参考。
细菌对抗菌药物的敏感性分为高敏、中敏、低敏和耐药四级，高敏和中敏是临床上首选的抗菌素，而低敏或耐药者一般不能应用。所谓耐药性分为天然耐药和获得性耐药，前者是细菌对某一药物具有天然的抗性，而后者是指细菌在一定条件下，由本来对某一药物敏感的细菌变成耐药的菌株。获得耐药性主要是由于抗菌素在临床的广泛应用，特别是不正确的使用抗菌素而造成。为了对某些病的快速治疗或控制，一般应在治疗前测定细菌对药物的敏感性，提供合适的抗菌素，以提高疗效。
药敏试验方法包括扩散法，稀释法和联合药敏试验，本节介绍其中几种常用方法。
图2－1常用药敏试验种类
一、纸片扩散法（琼脂扩散法）
纸片扩散法是将含有一定浓度抗菌药物的纸片放置在已接种被检菌的平板培养基上，抗菌药物向周围扩散，抑制细菌的生长，故在纸片周围出现抑菌圈，抑菌圈的大小与被检菌对该种抗菌药物的敏感度呈正相关，根据抑菌圈的大小，并参照有关标准，可对该项药敏试验结果提出报告，一般分为高度敏感、中度敏感、低敏和耐药（或抗药）四种结果。
纸片扩散法用于药敏定性试验，因简便易行，故应用较广，试验方法可分为直接扩散法和对比扩散法两种。
（一）直接扩散法
国外常用Kirby-Bauer法（简称K-B法）。其试验方法已经标准化，国内目前对药敏试验方法尚未统一，各临床实验室多在K-B法的基础上加以改良应用。
1．药敏纸片的制备 可以使用事先制备的干燥药敏纸片，亦可将灭菌的干燥纸片在临用前浸泡抗菌药液。
干燥药敏纸片的制备选用质量较好的滤纸（常用新华一号定性滤纸），用打孔器制成6毫米直径的圆纸片，每100片分装在一个干净的带塞小瓶内，121℃高压蒸气灭菌30分钟，再经60℃～100℃烘干。于每一小瓶分别加入一定浓度的抗菌素1毫升，应使纸片均匀地浸吸药液，置冰箱内浸泡30～60分钟，将小瓶放入干燥器内，用真空抽气机抽干。也可放入37～50℃温箱内2～3小时烘干。制备好的干燥药敏纸片分装在密封小瓶内，放在干燥器中低温保存备用。
注意事项①制备纸片的滤纸的质量直接影响试验结果，要求所用滤纸吸水性好，均匀，不含无关的化学物质或色素等。②干燥药敏纸片必需在密封的，放有干燥剂的容器中保存，受潮后会很快失效。③干燥药敏纸片制备后立即和标准敏感菌株作敏感试验，并记录其抑菌区直径，每周复查一次，如低于平均值两个标准差表示该批药敏纸片已经失效，应停止使用。
2．药敏培养基的制备
（1）Muller-Hinton琼脂培养基（简称M-H培养基K-B试验专用）
成分牛肉300克；酪蛋白酸性水解物17.5克；可溶性淀粉1.5克；琼脂17.0克。
制法将牛肉去脂肪肌腱后绞碎，加蒸馏水1000毫升制成肉浸汤，加入各成分，调整pH7.4，于121℃高压蒸气灭菌15分钟，在90毫升直径的平皿上倾注成4毫米厚的平板。
（2）敏感试验琼脂培养基
成分牛肉浸液300毫升；蛋白胨12克；葡萄糖2克；琼脂15克；蒸馏水加至1 000毫升。
制法各成分溶解后调整pH7.4 121℃高压蒸气灭菌15分钟，在90毫米平皿上倾注成4毫米厚的平板。
注意事项①培养基的成分对试验影响甚大，基本要求是适于常见致病菌生长，不含被试药物的拮抗剂，离子浓度（如钙镁离子）可影响抗菌素活性，故必须实行严格质量控制。②培养基厚度对抑菌圈大小有直接影响。培养基愈厚，纸片周围药物浓度愈低，抑菌圈愈小，反之亦然。故培养基必需控制在一定厚度。③培养基pH值对某些药物抑菌区影响很大。例如在偏酸时四环素抑菌圈变大，红霉素抑菌圈变小，故一般应为pH7.2～7.4。④琼脂浓度变化对抑菌圈有影响，琼脂浓度愈大，抑菌圈愈小。一般应用1.5%琼脂浓度。⑤分装好的药敏试验琼脂平板密封包装后在冰箱中可保存2～3周，取出后应于37℃放置10分钟，以除去平板盖上的水滴
3．菌液的准备用接种环挑取被检菌纯培养菌落4～5个，接种在4～5毫升肉汤培养基内，于37℃孵育2～5小时，用灭菌生理盐水稀释培养液，使其浓度相当于标准浊度管。
标准浊度管配制方法0.04M氯化钡（1.175%，W/V）；0.36N硫酸溶液（1%V/V）。
充分混匀，每管4～6毫升，其浊度相当于麦氏比浊管第一管的1/2，暗处保管，使用前充分摇匀，在自然光下透光比浊。此管每半年每配一次。
4．试验方法菌液的接种有划线法和涂布法，以后者较好。被检菌标化后15分钟之内接种于药敏培养基，用灭菌棉拭子沾取菌液，在管壁上挤压去掉多余液体，在平板上向一个方向均匀涂布，然后将平皿转动60°角，再涂布一次共三次，最后沿平板边缘涂布一周。加盖后放置5分钟，待平皿面稍干，用镊子将药敏纸片平放在平板上，并轻压使其紧贴在平板表面，药敏纸片一旦接触平板不要再移动。直径9.0厘米平皿可贴纸片7张。两纸片中心相距不少于24毫米，纸片与平皿边缘不少于15毫米。贴好纸片的平板于37℃培养16～18小时，观察结果。
5．结果判定测量抑菌圈直径（包括纸片直径），按其大小报告敏感、中度敏感或耐药。
国内多以直径小于10毫米为耐药，10～15毫米为中度敏感，大于15毫米为高度敏感。
K-B法对抑菌圈的解释标准见表2-2。
6．质量控制为保证试验质量，K-B法要求每周用标准菌株进行一次敏感试验。世界卫生组织（WHO）推荐用金黄色葡萄球菌（ATCC25923），大肠杆菌（ATCC25922）和绿脓杆菌（ATCC27853）等三株标准菌株按K-B标准法接种在M-H培养基上，将待试药物纸片贴好后，35℃培养18～24小时，测量抑菌圈，其直径在表5～2范围之内，表明试验合乎要求，超出此范围表明试验质量不合乎要求，应查找原因，改善试验条件。
（二）对比扩散法
对比扩散法是将被检菌与标准菌株在同一试验条件下同时进行药敏试验，用标准菌株的抑菌圈作为判定标准。直接扩散法由于结果判定已标准化，故对试验条件要求甚严。而对比扩散法则受试验条件影响较小，更适合于常规检验。国外多采用Stokes法，国内亦多用此法或略加改良应用。
表2-2对抑菌圈大小的解释标准
抗菌素
纸片含药量
（μg）
抗菌圈直径（mm）
耐药
中等敏感
敏感
葡萄球菌
青霉素
其他细菌
链霉素
四环素
土霉素
氯霉素
合霉素
红霉素
庆大霉素
卡那霉素
多粘霉素B
万古霉素
10单位
10单位
10
30
30
30
30
15
10
30
300
30
<20
<11
<11
<14
<14
<12
<12
<13
<12
<13
<8
<9
21～28
12～21
12～14
15～18
15～18
13～17
13～17
14～17
13～14
14～17
9～11
10～11
>29
>22
>15
>19
>19
>18
>18
>18
>15
>18
>12
>12
表2-3标准菌株的抑菌圈变动范围（mm）
抗菌素
纸片含药量μg
金黄色葡萄球菌
大肠杆菌
青霉素G
链霉素
四环素
氯霉素
新霉素
红霉素
新生霉素
庆大霉素
卡那霉素
多粘霉素B
杆菌肽
万古霉素
10单位
10
30
30
30
15
30
10
30
300单位
10单位
30
26～27
14～22
19～28
19～26
18～26
22～30
22～31
19～27
19～26
7～13
17～22
15～19
12～20
18～25
21～27
17～23
8～14
19～26
17～25
13～16
1．药敏纸片的制备同直接扩散法。
2．药敏培养基的制备同直接扩散法。
3．菌液的制备同直接扩散法。标准菌株常用金黄色葡萄球菌（NCTC6571）作为革兰氏阳性菌的对照菌株；用大肠杆菌（NCTC10418）作为革兰氏阴性菌的对照菌株。
4．试验方法取M-H平板，用灭菌棉拭子将准备好的标准菌株（浊度相当于麦氏比浊度第一管的1/2）均匀涂布在半个平板上，另将被检菌株（浊度同上）划线接种在同一平板的另一半上，中间稍留间隙，药敏纸片贴放在两者之间的界线上，由于37℃培养16～18小时，量取两边的抑菌圈，报告结果。
5．结果判定设Z1为标准菌株抑菌圈，Z2为被检菌抑菌圈。（均以毫米为单位）
敏感Z2≥（Z1-3），中度繁感3＜Z2＜（Z1-3），耐药Z2≤3
（三）纸条或挖沟法
如果测定数种细菌对同一种药物的敏感性，可分别用浸有不同待检菌液的棉拭子，在琼脂产板上划线接种，同时接种对照菌。将含有一定剂量药物纸条与接种菌垂直方向紧贴于平皿直线上，培养后，观察抑菌情况，在贴滤纸条处，也可用挖沟槽来替，即在琼脂平皿中间用灭菌刀切去一长条琼脂，再用滴管吸取热琼脂严密封住沟底两侧的琼脂与平皿底部紧密相连处，以免药液流至琼脂下部。在沟槽内注入定浓度的药液或含一定浓度药物的琼脂的，按上法接种待检细菌及对照菌株。
（四）TTC快速纸片扩散法
细菌的琥珀酸脱氢酶，可以把无色的氯化三苯基四氮唑（TTC）还原成红色的三苯甲月替，使培养基变红。含药纸片周围呈红色反应，表现细菌耐药。如果细菌被药物抑制不生长，则无此种能力，表示药物对细菌敏感。方法如下：用无菌吸管吸取被检菌液0.5mL（浓度为30亿～60亿/mL），加于灭菌平皿中，再加TTC溶液（TTC0.5g,20g/L琥珀酸钠生理盐水100mL，高压蒸汽灭菌后，4℃避光保存）0.4～0.5mL，混匀，倒入已融化并冷至45℃的琼脂培养基15 mL，立即混匀，待凝固后，将各种抗菌药纸片贴于平皿上，继续培养1～3h，取出观察结果。
结果判定：敏感菌株纸片周围可见清晰、无色抑菌环，背景呈红色；耐药菌株无抑菌环。判定可按抑菌环直径大小，将对药物的敏感性分为四种：①无抑菌环出现的为耐药；②抑菌环的直径7～9㎜的为低度敏感；9～11㎜的为中等度敏感；大于16㎜为高度敏感。多粘菌素B及粘菌素的标准要低一些，9～11㎜为中等度敏感；12㎜以上的为高度敏感。
此外，还有牛津小环法，是细菌和对药物敏感试验最早应用的方法，现在已很少应用。
二、稀释法
稀释法是将抗菌药物作倍比稀释，在不同浓度的稀释管内接种被检细菌，定量测定抗菌药物对该细菌的最低抑菌浓度（MIC）。本法可用作校正扩散法的标准。稀释法包括试管法，微量法和琼脂稀释法。现将微量稀释法和固体培养稀释法介绍如下。
（一）培养基
培养基常用下列两种之一。
1．脑、心浸汤培养基。
成分牛脑（小牛脑，制成浸液）200克；牛心（制成浸液）250克；月示胨10克；葡萄糖2克；氯化钠5克；磷酸氢二钠2.5克；蒸馏水加至1 000毫升。
制法先将牛脑和牛心分别制成浸液，加蒸馏水至1 000毫升，加入其他成分，加温溶解，调整pH为7.6～7.8（最终pH7.4～7.6），过滤分装，于121℃高压蒸气灭菌15分钟。
2．1%血清肉汤
在常规肉汤内，加入1%无菌血清即可。
（二）抗菌素贮存液和应用液的配制
各种抗菌素按其效价先配成1 000微克/毫升贮存液。青霉素和金霉素应新鲜配制，其余常用抗菌素贮存液可在4℃冰箱保存1～2周备用。如需长期保存，可将贮存液过滤除菌，分装于小试管内，在－20℃保存。进行药敏试验时，用液体培养基将抗菌素贮存液稀释到500微克/毫升，也可以按照各抗菌素各自的稀释浓度范围，稀释到此范围的最高浓度。
（三）菌液的准备
被检菌株纯培养后移种于适宜的增菌液，经培养增菌后，用肉汤稀释，使应用菌液每毫升含细菌105CFU（菌落形成单位）。
（四）试验方法
准备12支小试管，每管加培养基1毫升，第一管加抗菌素稀释液1毫升，混合后取1毫升移入第二管，依次倍比稀释到第11管。第12第为对照。
取U型底的8×12孔聚苯乙烯微孔板，经紫外线消毒，用微量加液器在每排孔中加入上述倍比稀释好的抗菌素溶液，浓度由低到高，每孔加入50微升，直到第11孔，最后一孔加培养基作为对照。再于每孔中加入准备好的应用菌液，每孔50微升。在一块微孔板中，每排可
加不同的抗菌素。但最好是同一株被检菌。加液完毕盖上消毒玻板，振荡混匀，放入垫有湿
纱布的方盘内，于35℃培养18～24小时，观察结果。
表2-4抗菌素的稀释浓度范围（μg/mL）
抗菌素
0.03
0.06
0.13
0.25
0.5
1.0
2.0
4.0
8.0
16
32
64
128
256
512
青霉素G
四环素
氯霉素
红霉素
庆大霉素
卡那霉素
多粘菌素B
万古霉素
+
+
+
√
+
+
+
+
+
√
+
+
√
+
+
+
√
√
√
+
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
√
+
√
√
√
√
√
√
√
+
√
√
+
√
√
√
+
+
+
√
+
+
√
+
+
+
+
+
+
+
+
+
√.常用的浓度；+.必要时补充的浓度
5．结果判定
将微孔板放在黑色背衬下观察，孔底呈圆点样混浊沉淀为细菌生长指征，孔内液体不现混浊表示细菌被抑制生长。细菌生长完全被抑制或约80%被抑制的抗菌素最低稀释度就是MIC。对照孔内细菌应生长良好。
三、固体培养稀释法
本法是将不同剂量的药物，加入融化后冷至45℃的定量琼脂培养基中，混合均匀，倾注平皿或注入试验管或斜面，琼脂凝固后，掀开平皿盖倒置于37℃温箱中30min烘干表面水分，这是含不同递减浓度药物培养基。一般接种幼龄菌于培养基中培养，在次日观察细菌生长情况，无细菌生长的最低含药平皿中的剂量则为该药物的MIC。也有以少于5（或10个）菌落作为MIC标准的。具体方法如下：
1．无菌试管10支（或可按需要确定支数），将抗菌药物原液，用稀释液递减稀释到第9管，第10管作为对照。
2．培养基的选用应根据被测细菌的不同而定，一般多选用牛心浸液琼脂；链球菌、肺炎球菌选用牛心浸液血液琼脂；嗜血杆菌采用加0.5%兔血琼脂培养基，将培养基融化并冷至55℃左右加入兔血混匀，置55℃水浴中备用。
3．将各浓度药液10mL加入上述培养基90mL中混匀，倾注平皿，等凝固后，掀开平皿盖于温箱中烘干30min，取出后在平皿底面，用玻璃铅笔划成若干等份的放射状格并编号。
4．接种时用接种环钓取菌液划线接种于平皿小格内。每含药平皿上可接种多份被检菌株，并同时接种标准菌株，置37℃培养18～24 h，观察结果，判定MIC。
生长慢的细菌，可接种于斜面培养基延长观察时间。
四、联合药敏试验
为了提高疗效，减少单一抗菌素的毒性和耐药性，临床上常联合使用二种或多种抗菌素。但联合使用抗菌素除了具有协同和累加作用外，还会有颉颃作用，故在临床治疗前应对病原菌作联合药敏试验，以选择联合使用有效的抗菌素。
联合药敏试验方法常用有平板纸片扩散法，纸条法和稀释法。
（一）平板纸片扩散法
药敏培养基的制备，菌液的准备及在培养基上涂布，药敏纸片的制备等均和单片纸片扩散法相同。将两种抗菌素的药敏纸片贴在已涂布被检菌株的平板上，二片之产相距2～3毫米，于35℃培养18～24小时，观察结果，根据呈现的抑菌图形报告“协同”，“无关”或“颉颃”作用。
（二）试管法
将两种不同浓度的抗生素，加入同一液体培养基试管内。同时，将各单一抗生素不同浓度的溶液，分虽加入液体培养基的试管内，再接种被检细菌，置37℃温箱，培养18～24 h，观察结果。根据两种混合抗生素抑菌作用浓度与单一抗生素的抑菌作用浓度的比较，得出两种抗生素的联合作用是协同、相加、无关或是颉颃。
具体方法：将低浓度、高浓度的抗生素溶液，分别加入含10 mL培养基的试管中，可根据需要进行2种或3种甚至多种抗生素联合。一般以2种为宜。进行两种抗生素的联合敏感试验时，需试管9支，其中4支试管作联合药敏试验加入两种抗生素；4支试管作单一药敏试验，各加一种抗生素；1支试管作对照，不加抗生素。最后，每管加试验菌液0.05mL，混匀后置37℃温箱中培养18 h，观察结果。
结果判定：肉眼观察管内培养物清晰者表示该管的单独的或联合抗生素能抑制细菌生长，混浊的则无抑菌作用。按试管内所含单独或联合抗生素的浓度作初步判断。
最终结果：用接种环从所有肉眼观察清晰的试管内，取一环划线接种到血琼脂平皿上（一个平皿可接种6～8支试管中的培养物），对照管也同样移种。再将全部试管和血琼脂平皿，均置37℃温箱培养18 h，观察试管内细菌生长情况和计算血琼脂平皿上的菌液，做最后结果判定。凡试管内的培养物一直保持清晰而无细菌生长的，为强抑菌能力；若原来培养清晰而再培养后又混浊的，说明细菌又恢复生长，是为暂时抑菌。血平皿上的菌落在20个以下的为强杀菌作用；20～50个之间的为部分杀菌作用；50～200个的为弱杀菌；200个以上的仅有抑菌作用。
（三）纸条法
1．含药纸条的制备 将滤纸剪成长20㎜，宽6㎜的纸条，印上药物的名称，放在平皿内高压蒸汽灭菌、烘干，并按要求配制抗菌药物的浓度，每100个干纸条加抗生素液8.5mL，使每一纸条都浸透药物，置37℃温箱中烘干后放冰箱中保存。
2．试验方法 将试验菌液均匀划线接种于平皿培养基上，用无菌摄子将药物纸条按田字形彼此垂直贴在培养基表面。在离平皿中心4㎜处，先贴一种药物纸条，再垂直贴第二种、第三种、第四种，在贴好中心4种药物纸条后，再贴边缘的8种，每两种药物的交界处，要保持1～2㎜的距离，以免药物经纸条彼此直接扩散。含药纸条贴好后，放37℃温箱中培养8～12 h观察结果。
先观察单独药物的抑菌情况，再观察联合敏感试验结果，以协同、相加、颉颃或无关进行结果判定。
（四）平板纸条交错法
将含有一定浓度的不同药物的滤纸条，以彼此垂直的方向紧贴于已接种被检菌的琼脂平皿上。根据需要，一个琼脂平皿可同时贴2～4张含药纸条。经培养后，如某一种药物有抗菌作用；另一种与之有颉颃作用，细菌则沿两种药物扩散交界处生长；如两种药物呈协同作用，在两种药物扩散相遇处出现增强抑菌作用。
（五）梯度纸条法
在平皿（9㎝）中先倒入普通琼脂培养基约10 mL，随即倾斜平皿，使琼脂凝固成斜面，然后再倒入含有一定浓度药物的琼脂培养基10 mL使平皿放平，含药琼脂的底层与不含药物琼脂的表层恰好互补相接。含药琼脂中的药物将向其下面不含药物的琼脂内扩散，形成了含药物浓度渐减的连续梯度，待琼脂表面干燥后，涂布被检细菌，将含其它药物的纸条与梯度一致的方向，平行贴于平皿板表面，培养后根据出现的图形进行结果判定。
注：关于抗生素微生物检定法（双碟法）可详阅《中华人民共和国兽药典》（1990年一部）。
附:常用培养基的配方及制备
1营养肉汤（或普通肉汤）
成分：牛肉膏 5 g，磷酸氢二钾 1 g，蛋白胨 10 g，氯化钠 5 g，蒸馏水 1000 mL。
制法：⑴ 称取牛肉膏、蛋白胨和盐类后，加入1000 mL水中，加热溶解，调PH 7.4至7.6，再加热15 min，补足水分；
⑵ 凉后用滤纸过滤，分装（肉汤必须完全透明）；
⑶ 置高压灭菌器内，121 ℃高压蒸气灭菌20 min。
用途：⑴ 可供一般细菌生长的营养培养基，用其可检查细菌的生长表现。
⑵ 制备固体培养基的基础。
2 营养琼脂（或普通琼脂）
成分：牛肉膏 5 g，磷酸氢二钾 1 g，蛋白胨 10 g，氯化钠 5 g，琼脂20 g，蒸馏水 1000 mL。
制法：⑴ 取牛肉膏、蛋白胨、盐类加入水中溶解；
⑵ 将琼脂剪碎后加入肉汤内，加热使之融化；
⑶ 用0.5 mol/L 氢氧化钠溶液调PH 7.4～7.6，煮沸10～15 min，补足蒸发的水分至原量；
⑷ 用垫有薄层脱脂棉的双层纱布过滤，分装于试管或者三角瓶内，加塞，包装；
⑸ 121 ℃高压蒸气灭菌20 min，倒成普通琼脂平板或者摆成普通琼脂斜面，备用。
用途：⑴ 可供一般细菌的分离培养、纯化及观察菌落性状及保存菌种用；
⑵ 为特殊培养基的基础培养基。
3 血液琼脂或血清琼脂
成分：普通琼脂 100 mL，无菌抗凝血或者脱纤血 5 mL。
制法：⑴ 无菌操作采取健康动物（绵羊或家兔）血液，置于盛有玻璃珠的灭菌三角瓶或加有5％柠檬酸钠溶液（血液与其比例约为9/1）的三角瓶内，摇动，制成脱纤血或者抗凝血或者直接静脉或者心脏采血，置于灭菌大试管内，使其自然凝固，次日分离血清备用；
⑵ 将灭菌普通琼脂融化待凉至50 ℃左右，按5～10％量将血液或者血清加入，混匀后倾注于平皿或者分装于试管中摆成斜面，即为鲜血琼脂平板或者斜面，或为血清琼脂平板或斜面，备用。
用途：⑴ 常用于标本中病原菌的初次分离或者营养条件要求较高病原菌的培养；
⑵ 用以检查细菌的溶血作用；
⑶ 血斜面常用于保存菌种。
4 麦康凯琼脂
成分：蛋白胨2 g，琼脂2 g，氯化钠0.5 g，胆盐0.5 g，乳糖1 g，1％中性红水溶液0.5 mL，蒸馏水 100 mL。
制法：⑴ 除中性红水溶液外，将其他各成分加入水中，加热溶解，调PH至7.2，煮沸，用纱布脱脂棉过滤；
⑵ 加入中性红溶液摇匀，分装于烧瓶中，以116 ℃高压蒸气灭菌15 min；
⑶ 倾倒成平皿备用。
用途：用于肠道菌的分离鉴定。
5 糖培养基
成分：蛋白胨 1 g，氯化钠 0.5 g，1.6％溴甲酚紫酒精溶液 0.1 mL，糖0.5～1 g,蒸馏水100 mL。
制法：⑴ 将蛋白胨与氯化钠加入蒸馏水中，加热溶解后调PH为7.6，再煮沸加热30 min；
⑵ 待冷后用滤纸过滤，加入糖和0.4%～0.7%的琼脂，加热使琼脂溶解；
⑶ 分装于试管中，116以116 ℃高压蒸气灭菌15 min。
用途：鉴定细菌对糖类的发酵能力以鉴定细菌。
辛苦了，楼主。总结的很全面。 好，比较全面。 看了，这是天书，因为我没有药敏实验室的条件。
多么希望，我做过以上各种药敏的步骤。唉！唉！唉！ 复方药做此，无指导意义。QQ506440890 学习了 楼主辛苦了。
回 6楼(萧瑟秋风) 的帖子
请问复方药做药敏为什么没有指导意义啊？谢谢回 楼主(昨日重现) 的帖子
很好 辛苦了 好的！:P:P:P:victory::victory: 辛苦了。谢谢 我也感觉到,复方药确实做出来的结果不是很稳定! 很有实用价值,
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