琼脂扩散实验常出现的错误
琼脂扩散实验常出现的错误一、 原理
抗原、抗体在琼脂糖凝胶中可以自由扩散，当抗原、抗体在比例适当处结合为抗原--抗体复合物，形成沉淀线。
二、适用范围
1.检测鸡群的阳性率
2. 检测鸡群的血清效价
3. 检测抗原
三、常出现的错误
1. 倒琼脂糖平板时平板不平，其原因有：
① 平板放置时倾斜。
② 平板本身质量有问题，应选琼扩专用平板，底平坦。
2. 琼脂糖平板制备时浓度过高或过低都会影响结果：浓度过高，会推迟沉淀线出现时间；过低，可能不出现沉淀线，琼脂糖难以挑取。
3. 打孔器打孔时，孔的直径和孔间距一定要标准，否则结果差异很大。
4. 底部密封不完全会使抗原或血清渗漏影响结果，滴加抗原或血清时勿溢出孔外或滴加量太少。
5. 抗原质量不佳，对照不出现沉淀或沉淀线模糊。
6. 抗原和血清浓度过高或过低都可能导致结果不成立。
7. 被检血清受细菌污染会影响测定效果，还应避免阳光照射。
8. 湿盒中湿度对结果也有影响，温度过低，琼脂糖平板易干燥影响结果。
9. 实验温度35-37℃，过低影响效果。
10. 非特异性沉淀线。（见下图）
A：标准阳性结果。
B：非特异性沉淀线。
C：有一条是特异性，有一条是非特异性。
D：被检血清有一部分与标准阳性血清相同。
E：被检血清与标准血清完全不同，此结果为阴性，此沉淀线为非特异。
F：被检血清与标准阳性血清有部分成分相同，也有部分差异。
图示 Ag表示抗原
C表示标准阳性血清对照
T表示被检血清 是应该注意抗原保存不好带来的麻烦 楼主，请问下，你放入温箱培养1天的时间没？
页:
[1]
